一種檢測白血病相關(guān)融合基因的引物和探針、及其試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因型的檢測，具體講，涉及一種檢測白血病相關(guān)融合基因的引物和 探針、及其試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 白血?。↙eukemia)是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，其特征是骨髓、淋巴結(jié)等造血系統(tǒng)中 一種或多種血細(xì)胞發(fā)生惡性增殖，并浸潤體內(nèi)各組織臟器，導(dǎo)致正常造血組織細(xì)胞受抑制， 產(chǎn)生各種癥狀。白血病臨床上常以發(fā)熱、出血、貧血，肝、脾、淋巴結(jié)腫大為特點。白血病一般 按自然病程和細(xì)胞發(fā)育程度可分為急性白血?。ˋL)和慢性白血?。–L)，根據(jù)白血病細(xì)胞 的形態(tài)和生化特征，又可分為急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL)、急性非淋巴細(xì)胞白血?。ˋNLL)、 慢性粒細(xì)胞白血?。–ML)、慢性粒一單核細(xì)胞白血病（CMML)等。
[0003] 白血病是國內(nèi)十大高發(fā)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率為2. 76/10萬人口，我國估計有5 萬以上患者，且白血病患者的數(shù)量正逐年增加。白血病的發(fā)病率雖然在腫瘤發(fā)病率中排第 6位，但在兒童和青少年惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率中均占第1位。
[0004] 近年臨床研究表明，大部分白血病和淋巴瘤存在某些染色體畸變，如易位、缺失、 插入等。這些染色體易位畸變時大部分情況下會產(chǎn)生新的融合基因，這些融合基因可作為 用于診斷不同類型白血病和淋巴瘤的分子標(biāo)志。不同類型的白血病化療和放療的方案是不 同的。所以，對這些分子標(biāo)記進行檢測分析有利于治療方案的確定和分析預(yù)后。因此，世界 衛(wèi)生組織2000年發(fā)布的白血病和淋巴瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)已將染色體易位后融合基因檢測作為最 重要的指標(biāo)之一。
[0005] 目前對白血病的檢查主要有，血象檢查，骨髓涂片檢查，血液生化檢查等，但這些 都沒有對融合基因進行檢查，獲得的結(jié)果誤差范圍也比較大。目前檢測融合基因的方法主 要包括熒光原位雜交技術(shù)（FISH)，PCR和基因芯片等。但這些方法存在著準(zhǔn)確性差、操作復(fù) 雜等缺陷，臨床應(yīng)用困難。
[0006] 為了幫助臨床醫(yī)生們準(zhǔn)確及時檢測白血病融合基因、輔助確定相關(guān)化療方案及復(fù) 發(fā)檢測，本發(fā)明從中國國情出發(fā)，開發(fā)了白血病相關(guān)融合基因檢測試劑盒，該試劑盒能定性 檢測人骨髓標(biāo)本中的白血病相關(guān)融合基因22種的RNA量，從而指導(dǎo)白血病臨床診斷和用 藥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明涉及一種檢測白血病相關(guān)融合基因的引物和探針、試劑盒。
[0008] 為了完成本發(fā)明的目的，采用的技術(shù)方案為：
[0009] -種檢測白血病相關(guān)融合基因的引物和探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO: 1?72 所示。
[0010] 其中：
[0011] ⑴用于檢測SIL-TAIL融合基因的引物和探針為：由SEQ ID NO: 1所示的上游 引物，由SEQ ID N0:2所示的下游引物R1，由SEQ ID N0:68所示的下游引物R2,由SEQ ID NO: 3所示的探針，其中SEQ ID NO: 3所示的核苷酸序列的5 '端有HEX標(biāo)記，3 '端有BHl標(biāo) 記；
[0012] (2)用于檢測E2A-HLF融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:4所示的上游引 物，由SEQ ID N0:5所示的下游引物，由SEQ ID N0:6所示的探針，其中SEQ ID N0:6所示 的核苷酸序列的5'端有Cy5標(biāo)記，3'端有BH2標(biāo)記；
[0013] (3)用于檢測BCR-ABL融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:7所示的上游引 物F1，由SEQ ID N0:8所示的上游引物F2,由SEQ ID N0:9所示的上游引物F3,由SEQ ID NO: 10所示的下游引物，由SEQ ID NO: 11所示的探針，其中SEQ ID NO: 11所示的核苷酸序 列的5'端有FAM標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記；
[0014] (4)用于檢測E2A-PBX1融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:4所示的上游引 物，由SEQ ID NO: 12所示的下游引物，由SEQ ID N0:6所示的探針，其中SEQ ID N0:6所 示的核苷酸序列的5'端有Cy5標(biāo)記，3'端有BH2標(biāo)記；
[0015] (5)用于檢測MLL-AF4融合基因的引物和探針為：由SEQ ID NO: 17所示的上游引 物F1，由SEQ ID NO: 18所示的上游引物F2,由SEQ ID NO: 13所示的下游引物R1，由SEQ ID N0:67所示的下游引物R2;由SEQ ID N0:22所示的探針P1，其中SEQ ID N0:22所示的核 苷酸序列的5'端有HEX標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記，由SEQ ID NO: 23所示的探針P2,其中SEQ ID NO: 23所示的核苷酸序列的5'端有HEX標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記；
[0016] (6)用于檢測TEL-AMLl融合基因的引物和探針為：由SEQ ID NO: 14所示的上游 引物，由SEQ ID NO: 15所示的下游引物，由SEQ ID NO: 16所示的探針，其中SEQ ID NO: 16 所示的核苷酸序列的5'端有FAM標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記；
[0017] (7)用于檢測MLL-AF9融合基因的引物和探針為：由SEQ ID NO: 17所示的上游引 物F1，由SEQ ID NO: 18所示的上游引物F2,由SEQ ID NO: 19所示的下游引物R1，由SEQ ID NO: 20所示的下游引物R2,由SEQ ID NO: 21所示的下游引物R3,由SEQ ID NO: 22所示的探 針P1，其中SEQ ID NO: 22所示的核苷酸序列的5'端有HEX標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記，由SEQ ID NO: 23所示的探針P2,其中SEQ ID NO: 23所示的核苷酸序列的5'端有HEX標(biāo)記，3'端 有BHl標(biāo)記；
[0018] (8)用于檢測AML1-ET0融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:24所示的上游 引物，由SEQ ID NO:25所示的下游引物，由SEQ ID NO:26所示的探針，其中SEQ ID NO:26 所示的核苷酸序列的5'端有FAM標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記；
[0019] (9)用于檢測PML-RARa融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:27所示的上游 引物F1，由SEQ ID NO: 28所示的上游引物F2,由SEQ ID NO: 29所示的上游引物F3,由SEQ ID N0:30所示的下游引物，由SEQ ID N0:31所示的探針，其中SEQ ID N0:31所示的核苷酸 序列的5'端有Cy5標(biāo)記，3'端有BH2標(biāo)記；
[0020] (10)用于檢測CBF-MYH融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:32所示的上游 引物，由SEQ ID N0:33所示的下游引物R1，由SEQ ID N0:34所示的下游引物R2,由SEQ ID NO: 35所示的下游引物R3,由SEQ ID NO: 36所示的探針，其中SEQ ID NO: 36所示的核苷酸 序列的5'端有FAM標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記；
[0021] (11)用于檢測DEK-CAN融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:37所示的上游 引物，由SEQ ID NO:38所示的下游引物，由SEQ ID NO:39所示的探針，其中SEQ ID NO:39 所示的核苷酸序列的5'端有Cy5標(biāo)記，3'端有BH2標(biāo)記；
[0022] (12)用于檢測NPM-MLF融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:40所示的上游 引物，由SEQ ID N0:41所示的下游引物，由SEQ ID N0:42所示的探針，其中SEQ ID N0:42 所示的核苷酸序列的5'端有Cy5標(biāo)記，3'端有BH2標(biāo)記；
[0023] (13)用于檢測FIPIL1-PDGFRA融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:43所示的 上游引物F1，由SEQ ID N0:44所示的上游引物F2,由SEQ ID N0:45所示的上游引物F3,由 SEQ ID N0:46所示的上游引物F4,由SEQ ID N0:47所示的上游引物F5,由SEQ ID N0:48 所示的下游引物，由SEQ ID N0:49所示的探針，其中SEQ ID N0:49所示的核苷酸序列的5' 端有HEX標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記；
[0024] (14)用于檢測TEL-PDGFRB融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:50所示的上 游引物，由SEQ ID N0:51所示的下游引物，由SEQ ID N0:52所示的探針，其中SEQ ID N0:52 所示的核苷酸序列的5'端有FAM標(biāo)記，3'端有BHl標(biāo)記；
[0025] (15)用于檢測AML1-MDS1融合基因的引物和探針為：由SEQ ID N0:53所示的上 游引物，由SEQ ID N0:54所示的下游引物R1，由SEQ ID N0:57所示的探針，其中SEQ ID NO: 57所示的核苷酸序列的5'端有Cy5標(biāo)記，3'端有BH2標(biāo)記；
[0026] (16)用于檢測MLL-AF6融合基因的引物和探針為：