專利名稱：一種烤煙gc/ms指紋圖譜的建立方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于煙草品質(zhì)分級領(lǐng)域，具體涉及一種烤煙質(zhì)量分析、烤煙品牌識別和打葉配方中的品質(zhì)分析方法。
背景技術(shù)：
煙草作為一種天然植物，其成分相當(dāng)復(fù)雜，目前已經(jīng)分離鑒定出來的香氣質(zhì)成分就高達(dá)5000多種。這些成分對其品質(zhì)都有或大或小的影響，若依據(jù)常規(guī)的化學(xué)檢測只對其主要化學(xué)成分進(jìn)行分析，以此來判別煙草的質(zhì)量顯然有失偏頗。因此，現(xiàn)在對煙草質(zhì)量的識別主要依靠人工評吸。人工評吸雖然能從整體上把握，但是容易受個(gè)人情緒和感官差異性等主觀因素的影響。有時(shí)也會出現(xiàn)較大偏差，且工作量大。指紋圖譜技術(shù)是一種著眼于整體，不追求分析對象的某個(gè)具體的細(xì)節(jié)，反應(yīng)對象的整體特征，具有模糊性和專屬性。該技術(shù)已經(jīng)在中藥等領(lǐng)域有較為成熟的發(fā)展。武政等人就曾通過HPLC的方法建立何首烏的指紋圖譜評價(jià)其質(zhì)量，結(jié)果與中國藥典的結(jié)論相符合。 黎瓊紅等人也建立了丹參的HPLC指紋圖譜，在對11個(gè)不同產(chǎn)區(qū)丹參的分析中確定了 14個(gè)共有峰，以之判別丹參的質(zhì)量。在煙草香氣質(zhì)研究中，HPLC和GC / MS等儀器已成為常規(guī)的分析方法而廣泛應(yīng)用。經(jīng)檢索，中國發(fā)明專利中與指紋圖譜相關(guān)的發(fā)明專利申請涉及煙草和中成藥鑒定等多個(gè)方面。經(jīng)檢索目前的相關(guān)專利文獻(xiàn)如下
1)申請?zhí)枮镃N201010M8519.5文獻(xiàn)涉及功能食品活性成分檢測方法領(lǐng)域，它以超臨界C02萃取蜂膠，然后進(jìn)行GC-MS檢測，構(gòu)建指紋圖譜。其GC/MS指紋圖譜共有峰有8個(gè)， 圖譜總長度為60min。具體的步驟為將蜂膠樣品置于超臨界C02萃取釜中萃取后得到蜂膠的超臨界C02萃取物；稱取蜂膠樣品置于樣品瓶中進(jìn)行固相微萃??；再進(jìn)行GC/MS分析； 最后將不同地區(qū)蜂膠超臨界C02萃取物的GC/MS圖譜進(jìn)行比對，提取其共有峰，組成蜂膠超臨界C02萃取物的GC-MS指紋圖譜。該發(fā)明方便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握。檢測樣品時(shí)間短，所得蜂膠超臨界C02萃取物揮發(fā)性成分達(dá)120余種。2)申請?zhí)枮镃N200610149185. 8文獻(xiàn)涉及一種消痛貼粉或膏或提取物GC及GC/ MS指紋圖譜建立的方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。它涉及的質(zhì)量控制方法由以下步驟組成1.制備消痛貼供試品溶液，取消痛貼適量，精密稱重，置索氏提取器中，加入乙醚回流提取，過濾，濾液作為供試品溶液。2.用GC及GC/MS對消痛貼指紋圖譜18個(gè)共有峰中參考峰(10 號峰)進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果10號色譜峰為桉葉醇。3.依桉葉醇的特征峰為參考峰，計(jì)算相對保留時(shí)間、相對峰面積，即得消痛貼提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。該方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從色譜的整體特征面貌上把握消痛貼的質(zhì)量情況，可作為消痛貼質(zhì)量控制指標(biāo)。3)申請?zhí)枮?00410066701. 1文獻(xiàn)涉及一種中藥指紋圖譜的制作方法，是一個(gè)用裂解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)來制作中藥指紋圖譜的方法，該方法包括下列三步步驟1、 中藥材的裂解；2、GC/MS分析；3、計(jì)算機(jī)處理，獲得標(biāo)識混合體系的彩色二維條形碼，即是使得計(jì)算機(jī)能夠識別中藥的指紋圖譜。通過對同一藥材或不同藥材的標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行精確的類似度比較，根據(jù)類似度的大小，人們可對中藥材進(jìn)行鑒別。因而本發(fā)明制作方法可用來快速有效地鑒別中藥材，控制中藥材的質(zhì)量，為提高中藥生產(chǎn)現(xiàn)代化程度提供一個(gè)重要的手段。4)申請?zhí)?01010606325. 6文獻(xiàn)涉及一種貴州余慶GAP基地吳茱萸HPLC指紋圖譜的建立方法。具體包括供試品溶液的制備，提取物的制備，色譜條件的確定，使用HPLC進(jìn)行測定，并首次選用吳茱萸的兩種偽品(花椒、馬桑子)完成指紋圖譜適用性檢驗(yàn)，得到吳茱萸藥材及其提取物HPLC指紋圖譜，較全面地表達(dá)了吳茱萸藥材及其提取物的整體化學(xué)信息，確定其指紋特征，該指紋圖譜囊括了水溶性部分和脂溶性部分。它測定了 12批吳茱萸藥材樣品的HPLC指紋圖譜并進(jìn)行分析比較，得到22個(gè)共有峰構(gòu)成的吳茱萸藥材指紋圖譜。5)申請?zhí)?0111002^23. 5文獻(xiàn)涉及一種馬尾松針揮發(fā)油成分的GC指紋圖譜的建立方法。它按照揮發(fā)油的提取法制備供試溶液，共鑒別出17個(gè)特征峰，并以6號峰(石竹烯)為參照峰，計(jì)算各共有指紋峰的相對保留時(shí)間，相對保留時(shí)間的RSD均小于1.0%。所有樣品中，共有指紋峰峰面積之和占總峰面積之比值均大于69%。6)申請?zhí)枮?00810196806. 7文獻(xiàn)涉及一種烤煙醇化品質(zhì)判定的HPLC指紋圖譜分析方法。它是采用HPLC分析方法測定不同煙葉樣品，得出煙葉指紋圖譜特征峰，然后利用中草藥指紋圖譜軟件對特征峰進(jìn)行分析，建立指紋圖譜特征峰總面積與煙葉樣品感官質(zhì)量的回歸關(guān)系模型；以感官質(zhì)量為依變量y，指紋圖譜總面積χ為因變量，建立兩者的回歸關(guān)系模型為:Y = 72. 04974+0. 1388*LN(X) *LN(X)或 Y = X/ (0. 011081*Χ+13· 247)；根據(jù)所測樣品的指紋圖譜總面積X，計(jì)算出感官質(zhì)量Y。7)申請?zhí)枮?00810196807. 1文獻(xiàn)涉及一種烤煙醇化品質(zhì)判定的HPLC指紋圖譜主成分分析方法。它是采用HPLC分析方法測定不同煙葉樣品，得出煙葉指紋圖譜特征峰， 然后利用中草藥指紋圖譜軟件對特征峰進(jìn)行分析，建立特征峰主成分值與煙葉樣品感官質(zhì)量的回歸關(guān)系模型；以感官評吸值Y為依變量，7個(gè)主成分值A(chǔ)l至Α7為因變量，建立特征峰主成分值與感官評吸值的多元回歸模型Y = 85. 64+1. 34Α1+1. 21Α2 +0. 27Α3-0. 40Α4 -1. 17Α5 -0.46Α6+0.48Α7，根據(jù)分析所得到的主成分值Α，計(jì)算出感官質(zhì)量Y。8)申請?zhí)枮?01010106834. 2的文獻(xiàn)涉及一種天麻生化指紋圖譜分類與品質(zhì)鑒定技術(shù)及其應(yīng)用，涉及中藥和天然藥物的鑒定與品質(zhì)評價(jià)技術(shù)。該發(fā)明提供了分離和檢測天麻生化成分的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)最佳流動(dòng)相(梯度濃度乙腈溶液)和最佳檢測波長Gl9nm) 以及其他基本條件，提供了測定天麻生化指紋圖譜的技術(shù)和計(jì)算天麻有效成分天麻素含量的公式和方法。它不僅能用于天麻生化指紋圖譜的測定、天麻品種的分類、天麻品質(zhì)的鑒定和評價(jià)，還能用于天麻適宜種植地區(qū)確定和天麻真?zhèn)舞b別。上述專利文獻(xiàn)雖然涉及有GC/MS指紋圖譜，但是并沒有涉及烤煙的GC/MS指紋圖譜的建立方法及其應(yīng)用。其中2份涉及烤煙的指紋圖譜建立及其應(yīng)用，但它是以HPLC的方法建立的指紋圖譜。2份GC/MS指紋圖譜的文獻(xiàn)所應(yīng)用的對象和領(lǐng)域也不同，且方法也相差較多。因此本專利采用的方法及應(yīng)用領(lǐng)域尚未見專利申請。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于建立烤煙香氣成分的GC/MS指紋圖譜，并以之分析烤煙質(zhì)量的特征品質(zhì)，應(yīng)用于烤煙等級判別、產(chǎn)地識別及烤煙打葉配方應(yīng)用。同時(shí)，克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，科學(xué)的對烤煙進(jìn)行分類，切實(shí)降低烤煙評吸工作量，提高打葉配方生產(chǎn)水平，達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)的需要。本發(fā)明所述的一種烤煙GC/MS指紋圖譜的建立方法，經(jīng)過下列步驟實(shí)現(xiàn)
1)待測液制備在與蒸餾萃取裝置一端相連的平底燒瓶中加入煙末，按15 30的液固比v/g加入純水，再按0. 015 0. 030的液固比v/g加入濃度為4pL/mL的丙酸苯乙酯， 進(jìn)行加熱；在與蒸餾萃取裝置另一端相連的燒瓶中，按2 4的液固比v/g加入二氯甲烷， 并將該燒瓶置于溫度為陽 60°C的水浴鍋上加熱，進(jìn)行蒸餾萃取2. 5 3. 0h，之后取下燒瓶，并在該燒瓶中按煙末質(zhì)量的1/2 1/4的量加入無水硫酸鈉，密封過夜后，將其放在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上使萃取液濃縮至體積為1 2mL，過0. 45Mffl的濾膜，濾液為待測溶液，備用；
2)烤煙GC/MS指紋圖譜的獲得將步驟1)的待測溶液用GC/MS儀器分析，GC/MS儀器分析條件為色譜柱HP-5MS ；載氣He ；流速0. 8-1.0 mL/min ；進(jìn)樣口溫度200 2400C ；檢測器溫度220 - 2800C ；分流比8 15:1 ；進(jìn)樣量1 5μ1 ；程序升溫第一分鐘從50°C開始，之后以2 4°C /min的升溫速度升至180°C，再以3 6°C /min的升溫速度升至270°C ；MS條件為電離電壓60 - 80ev ；離子源溫度為180 220°C ；傳輸線溫度 230 270°C，使用Wiley7與Mainlib圖譜庫進(jìn)行檢索，得到烤煙GC/MS指紋圖譜；
3)GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫的建立根據(jù)Wiley7與Mainlib圖譜庫檢索的結(jié)果， 在步驟2)得到的指紋圖譜中挑選出60%以上樣品共有的峰，建立GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫；
4)根據(jù)步驟3)建立的GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫，對烤煙指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫進(jìn)行聚類分析，判定煙草品質(zhì)級別。對步驟2)所述方法可靠性的檢驗(yàn)取步驟1)的待測溶液一份，按步驟2)的GC/ MS條件連續(xù)進(jìn)樣六次，選取其主要的20個(gè)峰，使此20個(gè)峰的峰面積占總峰面積比>80%，考察烤煙GC/MS指紋圖譜的精密度，要求保留時(shí)間RSD<0. 1%，各單峰與總峰面積比RSD均小于 5% ；取步驟1)的待測溶液一份，按步驟2)的GC/MS條件，分別于0h,4h,8h, 12h,24h,48h進(jìn)樣檢測，選取其主要的20個(gè)峰，且此20個(gè)峰的峰面積占總峰面積比>80%，考察烤煙GC/MS 指紋圖譜的穩(wěn)定性，要求保留時(shí)間RSD<0. 1%，各單峰與總峰面積比RSD<6%，且樣品在48h內(nèi)的穩(wěn)定性達(dá)到分析要求；取步驟1)的待測溶液5份，分別按步驟2)的GC/MS條件進(jìn)樣，考察烤煙GC/MS指紋圖譜的重現(xiàn)性，選取其主要的20個(gè)峰，此20個(gè)峰的峰面積占總峰面積比 >80%，保留時(shí)間RSD<0. 1%，各單峰與總峰面積比RSD<20%。本發(fā)明方法涉及在烤煙品質(zhì)分類、品牌煙葉識別及烤煙配方打葉中煙葉質(zhì)量控制中的應(yīng)用。本發(fā)明具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果本發(fā)明針對烤煙的致香成分，采用超純水體系同時(shí)蒸餾萃取方法提取煙草樣品，采用GC/MS技術(shù)獲得指紋圖譜，再以聚類分析實(shí)現(xiàn)煙草在品質(zhì)上的分類，獲得的GC/MS指紋圖譜具有基線分離好、特征峰多、峰響應(yīng)度高的特點(diǎn)，本發(fā)明的核心是將建立的烤煙GC/MS指紋圖譜及其配套分析技術(shù)應(yīng)用于烤煙品質(zhì)分級、產(chǎn)地識別和配方打葉中煙葉質(zhì)量的控制。本發(fā)明所提出的煙草品質(zhì)分級新技術(shù)，能全部或部分替代煙草人工評吸，提高煙草品質(zhì)分級、打葉配方的效率和科學(xué)性，對提高煙草生產(chǎn)水平和經(jīng)濟(jì)效益具有十分重要的意義。從根本上解決了一直以來依靠人工的感官評吸和主要化學(xué)成分分析所帶來的下列問題人工評吸工作量大，且結(jié)果易受人的主觀影響，以及化學(xué)分析雖是烤煙品質(zhì)分析的基本方法，但化學(xué)分析的指標(biāo)有限，烤煙作為植物性原料，成分十分復(fù)雜，如已經(jīng)探明的煙草香氣成分就高達(dá)5000種以上，所以化學(xué)分析也并不足以反映烤煙的品質(zhì)，在應(yīng)用中有嚴(yán)重的局限性等。本發(fā)明提供的烤煙GC/MS指紋圖譜的建立方法，是一種對成分復(fù)雜樣品也能進(jìn)行很好分析的手段，它的整體性和模糊性，既能反映樣本的整體信息，且工作量并不大。更重要的是它如同人的指紋一樣具有唯一性，能達(dá)到區(qū)分不同產(chǎn)區(qū)、不同等級、不同品質(zhì)的烤煙。所以，如果采用科學(xué)的方法對烤煙指紋圖譜進(jìn)行表征和分析，就可以實(shí)現(xiàn)對烤煙品質(zhì)的科學(xué)分類。


圖1 烤煙香氣成分GC-MS指紋圖譜總離子圖。圖2 云南烤煙8批次樣品香氣成分GC-MS指紋圖譜及其共有模式。圖3 2009年云南省典型產(chǎn)區(qū)C3F等級煙葉共有峰指紋圖譜聚類分析。圖4 2009年云南省典型產(chǎn)區(qū)B2F等級煙葉共有峰指紋圖譜聚類分析。圖5 2009年云南省典型產(chǎn)區(qū)X2F等級煙葉共有峰指紋圖譜聚類分析。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但不限于實(shí)施例。實(shí)施例1
本發(fā)明所述的一種烤煙GC/MS指紋圖譜的建立方法，經(jīng)過下列步驟實(shí)現(xiàn)
1)待測溶液制備在蒸餾萃取裝置一端連接500mL的平底燒瓶，在該平底燒瓶中裝入 20. OOg煙末，并加入350mL純水及0. 3mL濃度為4gL/mL的丙酸苯乙酯，并以可控制電壓的電熱套進(jìn)行加熱；在蒸餾萃取裝置另一端連接IOOmL的燒瓶，在該燒瓶中放入50mL 二氯甲烷，將該燒瓶置于水浴鍋上加熱，在56°C水浴溫度下蒸餾萃取2.證，取下IOOmL的燒瓶，并在其中加入5g無水硫酸鈉，密封過夜，再放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至lmL，過0. 45Mffl的濾膜， 濾液為待測溶液；
2)烤煙GC/MS指紋圖譜的獲得將步驟1)的待測溶液用GC/MS儀器分析，GC/MS儀器分析條件為色譜柱HP-5MS的規(guī)格為30mX0. 25mmX0. 25um ；載氣He ；流速0. 8mL/min ； 進(jìn)樣口溫度220°C ；檢測器溫度250°C ；分流比10 1 ；進(jìn)樣量 μ1 ；程序升溫第Imin為 50°C，之后以3°C /min的升溫速度升至180°C，再以5°C /min的升溫速度升至270°C ；MS條件為電離電壓70ev ；離子源溫度為200°C;傳輸線溫度250°C;使用Wiley7與Mainlib圖譜庫進(jìn)行檢索，建立烤煙GC/MS指紋圖譜，所建立的烤煙GC/MS指紋圖譜的方法科學(xué)可靠， 所獲取的GC/MS圖譜不僅基線平穩(wěn)、響應(yīng)峰多、分離度好，而且穩(wěn)定、重復(fù)性好，如圖1 ；
3)GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫的建立根據(jù)Wiley7與Mainlib圖譜庫檢索的結(jié)果， 在步驟2)得到的指紋圖譜中挑選出60%以上樣品共有的峰，建立GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫，若兩個(gè)峰未能完全的分開且在各樣品中有相當(dāng)好的對應(yīng)，則將其合并，如H1、H2、H3 分別是三甲基二氫萘和三甲基四氫萘酚、9 一甲基一順式十氫一 1，8 —二酮與二氫獼猴桃內(nèi)酯、菲和肉豆蔻酸的加和，此外，有若干組峰，含量比較小且緊密相連，也將其合并為一個(gè)指標(biāo)，如H4、H5、H6三組，如此一來，經(jīng)簡化得到44個(gè)峰建立共有峰數(shù)據(jù)庫(表1)，其中8號峰為內(nèi)標(biāo)峰丙酸苯乙酯，以丙酸苯乙酯為參照峰計(jì)算各峰的相對保留時(shí)間α ；
4)根據(jù)步驟3)建立的GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫，對烤煙指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫進(jìn)行聚類分析，判定煙草品質(zhì)級別。實(shí)施例2
供試煙葉品種Κ326，等級為C3F，分別取自云南省15個(gè)不同煙葉產(chǎn)區(qū)。所有煙樣在 2009年采集，經(jīng)統(tǒng)一復(fù)烤后制成煙絲。將煙絲樣品在40°C下烘干，用植物粉碎機(jī)粉碎，過60 目篩，用塑料袋密封，置于超低溫冰箱(_80°C)中保存待測，測定方法如下
1)待測溶液制備在蒸餾萃取裝置一端連接500mL的平底燒瓶，在該平底燒瓶中裝入 20. OOg煙末，并加入450mL純水及0. 6mL濃度為4gL/mL的丙酸苯乙酯，并用可控制電壓的電熱套加熱該平底燒瓶；在蒸餾萃取裝置另一端連接IOOmL的燒瓶，在該燒瓶中放入SOmL 二氯甲烷，將該燒瓶置于水浴鍋上加熱，在60°C水浴溫度下蒸餾萃取3. 0h，取下IOOmL的燒瓶，并在其中加入IOg無水硫酸鈉，密封過夜，再放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至lmL，過0. 45Mffl的濾膜，濾液為待測溶液；
2)將步驟1)的待測溶液用GC/MS儀器分析，GC/MS儀器分析條件為色譜柱HP_5MS 的規(guī)格為:30mX0. 25mmX0. 25um ；載氣=He ；流速1. OmL/min ；進(jìn)樣口溫度240°C ；檢測器溫度280°C;分流比15 :1 ；進(jìn)樣量5μ1 ；程序升溫第Imin為50°C，之后以2V Mn的升溫速度升至180°C，再以6°C /min的升溫速度升至270°C ；MS條件為電離電壓70ev ；離子源溫度為220°C ；傳輸線溫度270°C ；使用Wiley7與Mainlib圖譜庫進(jìn)行檢索，建立烤煙 GC/MS指紋圖譜；
3)GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫的建立根據(jù)圖譜庫檢索的結(jié)果，在步驟2)得到的指紋圖譜中挑選出60%以上樣品共有的峰，建立GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫，若兩個(gè)峰未能完全的分開且在各樣品中有相當(dāng)好的對應(yīng)，則將其合并，如H1、H2、H3分別是三甲基二氫萘和三甲基四氫萘酚、9 一甲基一順式十氫一 1，8 —二酮與二氫獼猴桃內(nèi)酯、菲和肉豆蔻酸的加和，此外，有若干組峰，含量比較小且緊密相連，也將其合并為一個(gè)指標(biāo)，如H4、H5、H6三組，如此一來，經(jīng)簡化得到44個(gè)峰建立共有峰數(shù)據(jù)庫(表1)，其中8號峰為內(nèi)標(biāo)峰丙酸苯乙酯，以丙酸苯乙酯為參照峰計(jì)算各峰的相對保留時(shí)間α ；
4)根據(jù)步驟3)建立的GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫，對烤煙指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫進(jìn)行聚類分析，判定煙草品質(zhì)級別，具體是以挑選出的共有峰的峰面積比為指標(biāo)，進(jìn)行聚類分析(最短距離法)(圖3)，通過聚類分析圖3可以看出，在距離為0. 1左右時(shí)，可以將2009 年云南省各個(gè)產(chǎn)區(qū)C3F等級煙葉分成4類第一類煙葉產(chǎn)區(qū)是麒麟、沾益、保山、景東、祿勸、 麗江、紅河；第二類是昭通、臨滄、羅平、文山、楚雄；第三類是宣威、馬龍；富源區(qū)別于其它產(chǎn)地自成一類。實(shí)施例3
供試煙葉品種Κ326，等級為B2F，分別取自云南省17個(gè)不同煙葉產(chǎn)區(qū)。按照實(shí)施例1 的制備方法和分析方法進(jìn)行分析，得出不同樣品的聚類圖(圖4)。通過聚類分析圖4可以看出，在距離為0. 05左右時(shí)，可以將2009年云南省各個(gè)產(chǎn)區(qū)B2F等級煙葉分成6類第一類煙葉產(chǎn)區(qū)是師宗、羅平、紅河；第二類是普洱、文山、陸良、 臨滄；第三類是大理、昭通、保山；第四類是尋甸、楚雄、富源、沾益；第五類是麒麟、玉溪；另外富源為第六類。實(shí)施例4
供試煙葉品種K326，等級為X2F，分別取自云南省13個(gè)不同煙葉產(chǎn)區(qū)。按照實(shí)施例1 的制備方法和分析方法進(jìn)行分析，得出不同樣品的聚類圖(圖5)。通過聚類分析圖5可以看出，可以將云南省各個(gè)產(chǎn)區(qū)X2F等級煙葉分成4類第一類煙葉產(chǎn)區(qū)是大理、麒麟、普洱、宣威、昭通、楚雄；第二類是玉溪、羅平、富源；第三類是馬龍、保山、臨滄；祿勸單成一類。
表1云南烤煙GC/MS指紋圖譜共有峰列表
權(quán)利要求
1.一種烤煙GC/MS指紋圖譜的建立方法，其特征在于經(jīng)過下列步驟1)待測液制備在與蒸餾萃取裝置一端相連的平底燒瓶中加入煙末，按15 30的液固比v/g加入純水，再按0. 015 0. 030的液固比v/g加入濃度為4pL/mL的丙酸苯乙酯， 進(jìn)行加熱；在與蒸餾萃取裝置另一端相連的燒瓶中，按2 4的液固比v/g加入二氯甲烷， 并將該燒瓶置于溫度為陽 60°C的水浴鍋上加熱，進(jìn)行蒸餾萃取2. 5 3. 0h，之后取下燒瓶，并在該燒瓶中按煙末質(zhì)量的1/2 1/4的量加入無水硫酸鈉，密封過夜后，將其放在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上使萃取液濃縮至體積為1 2mL，過0. 45Mffl的濾膜，濾液為待測溶液，備用；2)烤煙GC/MS指紋圖譜的獲得將步驟1)的待測溶液用GC/MS儀器分析，GC/MS儀器分析條件為色譜柱HP-5MS ；載氣He ；流速0. 8-1.0 mL/min ；進(jìn)樣口溫度200 2400C ；檢測器溫度220 - 2800C ；分流比8 15:1 ；進(jìn)樣量1 5μ1 ；程序升溫第一分鐘從50°C開始，之后以2 4°C /min的升溫速度升至180°C，再以3 6°C /min的升溫速度升至270°C ；MS條件為電離電壓60 - 80ev ；離子源溫度為180 220°C ；傳輸線溫度 230 270°C，使用Wiley7與Mainlib圖譜庫進(jìn)行檢索，得到烤煙GC/MS指紋圖譜；3)GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫的建立根據(jù)圖譜庫檢索的結(jié)果，在步驟2)得到的指紋圖譜中挑選出60%以上樣品共有的峰，建立GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫；4)根據(jù)步驟3)建立的GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫，對烤煙指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫進(jìn)行聚類分析，判定煙草品質(zhì)級別。
2.一種如權(quán)利要求1所述的方法在烤煙品質(zhì)分類、品牌煙葉識別及烤煙配方打葉中煙葉質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種烤煙GC/MS指紋圖譜的建立方法，經(jīng)過待測液制備、烤煙GC/MS指紋圖譜的獲得、GC/MS指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫的建立，對烤煙指紋圖譜共有峰數(shù)據(jù)庫進(jìn)行聚類分析，從而判定煙草品質(zhì)級別。本發(fā)明能客觀的反應(yīng)烤煙的內(nèi)在品質(zhì)，取代傳統(tǒng)的人工評吸和普通化學(xué)測定方法。不僅降低評吸人員的工作強(qiáng)度，還使煙草品質(zhì)的評價(jià)更具科學(xué)性，對提高烤煙生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。本發(fā)明的特征是，針對烤煙的致香成分，采用超純水體系同時(shí)蒸餾萃取方法提取、GC/MS檢測，獲得基線分離好、特征峰多、峰響應(yīng)度高的GC/MS指紋圖譜。本發(fā)明的核心是將建立的烤煙GC/MS指紋圖譜及其配套分析技術(shù)應(yīng)用于烤煙品質(zhì)分級、產(chǎn)地識別和配方打葉中的煙葉質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/88GK102495163SQ20111036563
公開日2012年6月13日 申請日期2011年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月17日
發(fā)明者何云燕, 何結(jié)望, 劉磊, 尹曉東, 曹林海, 李琳, 涂書新, 矣躍平, 袁仕信, 閻鐵軍 申請人:云南省煙草煙葉公司