專利名稱：一種快速檢測飼料用非淀粉多糖酶效價(jià)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速檢測飼料用非淀粉多糖酶效價(jià)的方法。
背景技術(shù)：
飼料用非淀粉多糖酶是目前飼料工業(yè)中應(yīng)用最廣的飼料酶，主要包括木聚糖酶、 纖維素酶、葡聚糖酶、果膠酶和甘露聚糖酶，它們少部分以單體酶形式使用，大部分以復(fù)合酶形式使用。在我國，非淀粉多糖酶占飼料酶市場總量的65%左右。在歐洲和北美，非淀粉多糖酶占飼料酶市場總量的70%左右。對(duì)于非淀粉多糖酶的分析測定，無論是單體酶還是復(fù)合酶，都很繁瑣，而且分析數(shù)據(jù)的實(shí)用性和重復(fù)性也不理想。目前，實(shí)驗(yàn)室的分析底物都是純度比較高而且容易溶于水的聚合物，但是它們實(shí)際的天然底物都是不溶于水的聚合物，而且這些聚合物往往相互交聯(lián)在一起，組成成分也比較復(fù)雜。非淀粉多糖酶對(duì)天然底物的降解效率很差，往往只有可溶性底物的5 10%左右，而且很難準(zhǔn)確定量。動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)雖然直觀，可靠性也比較好，但是試驗(yàn)的時(shí)間太長(至少需要2個(gè)月)，成本也很高，在實(shí)際生產(chǎn)過程中很難推廣，對(duì)于科研過程中要求的快速分析要求甚遠(yuǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種快速檢測飼料用非淀粉多糖酶效價(jià)的方法。本發(fā)明提供的檢測飼料用非淀粉多糖酶效價(jià)的方法，包括如下步驟以本發(fā)明提供的不含淀粉的麥麩為底物，將其與待測飼料用非淀粉多糖酶混勻進(jìn)行酶解反應(yīng)，反應(yīng)完畢后測定剩余所述底物的干重，按照如下公式計(jì)算得到降解效率，根據(jù)所得降解效率評(píng)價(jià)所述待測非淀粉多糖酶的效價(jià)
^酶解反應(yīng)前的底物干重-酶解反應(yīng)后的乘1J余底物干重ιηηο/
降解效率=-祐如匕認(rèn)十& 丁去-X100% ο
酶解反應(yīng)目ij的底物干重該方法所述酶解反應(yīng)步驟中，酶解溫度選擇飼養(yǎng)動(dòng)物消化道的溫度。本發(fā)明提供的麥麩制備方法，包括如下步驟將麥麩原料浸泡、洗凈后，剔除其中完整的麥粒，再與水混勻后進(jìn)行糊化反應(yīng)，加入α -淀粉酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完畢后再與糖化酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完畢后得到所述不含淀粉的麥麩。上述方法的所述糊化反應(yīng)步驟中，溫度為95 100°C，時(shí)間為10 15分鐘；所述加入α -淀粉酶進(jìn)行反應(yīng)步驟中，溫度為65 70°C ;時(shí)間為25 30分鐘；所述與糖化酶進(jìn)行反應(yīng)步驟中，溫度為95 100°C，時(shí)間為60分鐘。所述α -淀粉酶的酶活為4000u/g ;所述糖化酶的酶活為80000u/g。所述制備不含淀粉的麥麩的方法，還包括如下步驟在所述與糖化酶進(jìn)行反應(yīng)完畢后，將產(chǎn)物自然冷卻至室溫后水洗并常溫干燥，得到所述不含淀粉的麥麩。所述水洗次數(shù)為3 4次，所述干燥步驟中，時(shí)間為20 24小時(shí)。
按照上述方法制備得到的不含淀粉的麥麩，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述不含淀粉的麥麩中，淀粉的質(zhì)量百分含量不超過O. 01 %，含水量為8. 0%。本發(fā)明提供的快速檢驗(yàn)飼料用非淀粉多糖酶效價(jià)的方法，以消除淀粉的麥麩為分析底物，在設(shè)定的溫度和溶液中加入需要分析的飼料用非淀粉多糖酶。這種飼料酶可以是單體酶，也可以是復(fù)合酶。經(jīng)過設(shè)定的反應(yīng)時(shí)間以后，經(jīng)過濾洗滌、干燥，測定殘留底物的干重，計(jì)算降解效率，以此作為主要指標(biāo)評(píng)價(jià)比較所分析酶的效價(jià)。這種試驗(yàn)方法不僅可以快速檢測單酶在實(shí)驗(yàn)室配制緩沖液中的效價(jià)，也可以快速檢測復(fù)合酶在實(shí)驗(yàn)室配制的緩沖液中的效價(jià)。不僅可以快速檢測單酶在動(dòng)物消化液中的效價(jià)，也可以快速檢測復(fù)合酶在動(dòng)物消化液中的效價(jià)。該方法直觀、簡便，不需要很精密的分析儀器，而且能同時(shí)檢驗(yàn)動(dòng)物消化道的環(huán)境對(duì)酶蛋白作用效果的影響，從而能更客觀全面地反映這些飼料酶的實(shí)際效價(jià)。飼料生產(chǎn)企業(yè)和養(yǎng)殖戶可以參照上述方法對(duì)非淀粉多糖酶的效價(jià)進(jìn)行分析和比較，適用于飼料用非淀粉多糖酶的研究、生產(chǎn)和應(yīng)用，特別適用于畜禽和水產(chǎn)飼料中非淀粉多糖酶效價(jià)的快速檢測。


圖I為緩沖液中的麥麩降解效果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。所述方法如無特別說明均為常規(guī)方法。所述原料如無特別說明均能從公開商業(yè)途徑而得。實(shí)施例I :稱取IOkg普通商品麥麩，用60kg清水在常溫(20 30°C )浸泡24小時(shí)，清洗其中的泥渣和其它可溶性雜物，撇除漂浮的皮殼和麥秸等粗纖維。用清水反復(fù)清洗3次，然后再過濾、擠壓，獲得潔凈的麥麩，其含水量為65%，總重量為25kg。將所得麥麩分批平攤在托盤上，挑除其中沒有破碎的麥粒。這部分沒有破碎的麥粒雖然很少，但是對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精度有影響，所以必須剔除。在容量為100升的不銹鋼容器中，加入上述獲得的清潔麥麩， 再加入45kg蒸餾水，然后通蒸汽加熱升溫至98°C，保持12分鐘，充分糊化麥麩中殘留的淀粉。然后冷卻至65°C，加入10克淀粉液化酶(α -淀粉酶，酶活為4000u/g，購自北京東華強(qiáng)盛生物工程有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為107658305。)，保持30分鐘。然后逐步加熱至95°C， 再加入20克糖化酶(酶活為80000u/g，購自北京東華強(qiáng)盛生物工程有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為1003301)，保溫60分鐘，以充分糖化殘留的淀粉成為溶解于水的葡糖糖和麥芽糖。自然冷卻至室溫，過濾，擠壓，獲得渣濾，再用蒸餾水清洗濾渣3次，以充分濾除殘留的葡萄糖和麥芽糖，獲得純凈的麥麩，其含水量為65%，重量為22kg。把含水量為65%的22kg麥麩分批平攤在托盤上進(jìn)行常溫氣流干燥，24小時(shí)以后基本達(dá)到恒重，得到純麥麩7. 6kg，含水量為8. 0%，殘余淀粉含量不超過O. 01 %，分裝在密封在容器中，于4°C冰箱中保存。實(shí)施例2取12個(gè)500ml的三角瓶，在每個(gè)三角瓶中加入250ml緩沖液(pH值為5. 5，在 5000ml蒸餾水中加入4. 5ml冰醋酸和34. 85克無水醋酸鈉，徹底溶解，醋酸根離子的濃度為
O.lmol/L)，接著再各加入10克實(shí)施例I制備所得的麥麩，其含水量為8. O %、淀粉含量不超過O. 01 %，在37°C恒溫放置在水浴中，然后在這12個(gè)三角瓶中加入等量的待分析飼料酶 A。每隔30分鐘抽取一個(gè)三角瓶，用8層醫(yī)用紗布進(jìn)行過濾，時(shí)間不超過2分鐘。過濾結(jié)束后，用250ml蒸餾水清洗，3次過后取過濾渣，平攤在不銹鋼托盤上，80°C氣流干燥8小時(shí)至恒重，再常溫冷卻2小時(shí)，然后稱重，按照如下公式計(jì)算得到降解效率，根據(jù)所得降解效率評(píng)價(jià)待分析飼料酶A的效價(jià)
權(quán)利要求
1.一種檢測飼料用非淀粉多糖酶效價(jià)的方法，包括如下步驟以權(quán)利要求7或8所述不含淀粉的麥麩為底物，將其與待測飼料用非淀粉多糖酶混勻進(jìn)行酶解反應(yīng)，反應(yīng)完畢后測定剩余所述底物的干重，按照如下公式計(jì)算得到降解效率，根據(jù)所得降解效率評(píng)價(jià)所述待測非淀粉多糖酶的效價(jià)攸礎(chǔ)袖去—酶解反應(yīng)前的底物干重-酶解反應(yīng)后的剩余底物干重I ΛΛ0/酶解反應(yīng)前的底物干重Χ O。
2.一種制備不含淀粉的麥麩的方法，包括如下步驟將麥麩原料浸泡、洗凈后，剔除其中完整的麥粒，再與水混勻后進(jìn)行糊化反應(yīng)，加入α -淀粉酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完畢后再與糖化酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完畢后得到所述不含淀粉的麥麩。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述糊化反應(yīng)步驟中，溫度為95 100°C，時(shí)間為10 15分鐘；所述加入α -淀粉酶進(jìn)行反應(yīng)步驟中，溫度為65 70°C ;時(shí)間為25 30分鐘；所述與糖化酶進(jìn)行反應(yīng)步驟中，溫度為95 100°C，時(shí)間為60分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于所述α-淀粉酶的酶活為4000u/g ； 所述糖化酶的酶活為80000u/g。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的方法，其特征在于所述制備不含淀粉的麥麩的方法， 還包括如下步驟在所述與糖化酶進(jìn)行反應(yīng)完畢后，將產(chǎn)物自然冷卻至室溫后水洗并常溫氣流干燥，得到所述不含淀粉的麥麩。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述水洗次數(shù)為3 4次，所述干燥步驟中，時(shí)間為20 24小時(shí)。
7.權(quán)利要求2-6任一所述方法制備得到的不含淀粉的麥麩。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的麥麩，其特征在于所述不含淀粉的麥麩中，淀粉的質(zhì)量百分含量不超過O. 01 %。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測飼料用非淀粉多糖酶效價(jià)的方法。該方法，包括如下步驟以本發(fā)明提供的不含淀粉的麥麩為底物，將其與待測飼料用非淀粉多糖酶混勻進(jìn)行酶解反應(yīng)，反應(yīng)完畢后測定剩余所述底物的干重，計(jì)算降解效率，根據(jù)所得降解效率評(píng)價(jià)所述待測非淀粉多糖酶的效價(jià)。該方法不僅可以快速檢測單酶在實(shí)驗(yàn)室配制緩沖液中的效價(jià)，也可以快速檢測復(fù)合酶在實(shí)驗(yàn)室配制的緩沖液中的效價(jià)。不僅可以快速檢測單酶在動(dòng)物消化液中的效價(jià)，也可以快速檢測復(fù)合酶在動(dòng)物消化液中的效價(jià)。
文檔編號(hào)G01N5/04GK102590013SQ20121000852
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月12日
發(fā)明者劉緒同, 曹云鶴, 王園, 王春林, 陸文清 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)