本發(fā)明屬于預(yù)防與診斷醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，具體涉及一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝及其試劑盒。

背景技術(shù)：

1、化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence?immune?assay，clia)，是將化學(xué)發(fā)光與免疫分析有效結(jié)合的一種檢測(cè)方法，主要是在抗原或抗體上利用標(biāo)記物進(jìn)行直接標(biāo)記，待抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)后生成免疫復(fù)合物，在發(fā)光底物的氧化下形成處于激發(fā)狀態(tài)的中間體，通過發(fā)射光子來釋放能量以達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。該技術(shù)具有靈敏度高、檢測(cè)穩(wěn)定性高、檢測(cè)范圍寬、操作簡(jiǎn)單、標(biāo)記物儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)，高靈敏度的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)已被廣大研究人員所認(rèn)可，正逐漸替代傳統(tǒng)的生物檢測(cè)技術(shù)。

2、吖啶酯是一類可用作化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的化學(xué)物質(zhì)，在堿性溶液中，吖啶酯體系加入激發(fā)劑h2o2溶液0.4s后發(fā)射光強(qiáng)度達(dá)到最大，半衰期為0.9s左右，2s內(nèi)發(fā)光基本結(jié)束，可實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)的目的，且具有靈敏度高、反應(yīng)過程不需要催化劑、干擾小、背景低等優(yōu)勢(shì)。另外，吖啶酯作為標(biāo)記物具有非特異性結(jié)合少、與大分子偶聯(lián)不影響光量和光強(qiáng)度高的特點(diǎn)。在化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)中，吖啶酯先標(biāo)記抗原/抗體，再利用鏈酶親和素磁珠微粒、生物素標(biāo)記抗原/抗體和待測(cè)樣本中的抗原/抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，利用磁場(chǎng)分離技術(shù)和發(fā)光促進(jìn)劑進(jìn)行發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)。

3、在免疫反應(yīng)過程中，吖啶酯標(biāo)記抗原/抗體的純度對(duì)試劑的性能影響較大，常用脫鹽、透析等方式對(duì)吖啶酯標(biāo)記的抗原/抗體進(jìn)行純化。吖啶酯標(biāo)記抗原/抗體過程中會(huì)存在未與抗原或抗體偶聯(lián)的吖啶酯，這些游離的吖啶酯以及一些雜質(zhì)會(huì)通過脫鹽或透析等方式除去，但仍有一小部分游離吖啶酯存在在吖啶酯標(biāo)記的抗體中，且這些游離的吖啶酯在免疫反應(yīng)中會(huì)吸附在磁珠或反應(yīng)杯上，這些游離的吖啶酯對(duì)試劑性能的影響較??；另外，由于吖啶酯需要在有機(jī)溶劑中才能溶解，對(duì)標(biāo)記的抗原或抗體有一定的誘導(dǎo)變性的作用，吖啶酯標(biāo)記會(huì)導(dǎo)致部分抗原/抗體的部分位點(diǎn)暴露，這些位點(diǎn)的暴露使得吖啶酯抗體會(huì)非特異性吸附在試劑組分的磁珠或反應(yīng)杯上，這些吖啶酯抗體使用常用的純化方式不能完全去除，繼而會(huì)導(dǎo)致試劑本底升高、靈敏度變差等問題。因此，需要一種有效的方法來降低吖啶酯抗體的非特異性吸附。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明公開了一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝及其試劑盒，以解決現(xiàn)有技術(shù)中由于吖啶酯抗體的非特異性吸附導(dǎo)致的本底偏高、靈敏度差的問題。

2、本申請(qǐng)的第一方面，提供一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝，包括：

3、制備吖啶酯標(biāo)記抗體以及磁流體，所述磁流體中包含磁性微粒；

4、將所述磁流體加入到離心管中，在所述離心管靠近底部的一側(cè)放置磁性件；

5、待所述磁流體分層后，棄去位于上層的第一上清液；

6、向所述離心管中加入吖啶酯標(biāo)記抗體，混勻后靜置反應(yīng)；

7、分離磁性微粒與位于上層的第二上清液，所得第二上清液即為純化的吖啶酯標(biāo)記抗體。

8、可選的，制備吖啶酯標(biāo)記抗體的步驟包括：

9、將吖啶酯和抗體混合，同時(shí)加入第一緩沖液，混勻后水浴反應(yīng)，獲得第一反應(yīng)體系；

10、向所述第一反應(yīng)體系加入第二緩沖液，混勻后水浴反應(yīng)，獲得第一標(biāo)記抗體；

11、對(duì)所述第一標(biāo)記抗體進(jìn)行脫鹽柱純化，再對(duì)純化后的第一標(biāo)記抗體離心，獲得吖啶酯標(biāo)記抗體。

12、可選的，所述第一緩沖液為碳酸鹽緩沖液，所述第一緩沖液的ph值為7.5±0.2，濃度為20mmol/l。

13、可選的，所述第二緩沖液為tris鹽酸緩沖液，所述第二緩沖液的ph值為7.4±0.2，濃度為20mmol/l。

14、可選的，所述磁流體的ph值小于8.0。

15、可選的，利用化學(xué)共沉淀法制備所述磁流體。

16、可選的，制備磁流體的步驟包括：

17、將六水三氯化鐵晶體和四水氯化亞鐵晶體加入純水，超聲分散；

18、在分散后的溶液中加入氨水和油酸進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后獲得反應(yīng)液；

19、通過磁吸分離出第三上清液，向剩余的反應(yīng)液中加入鹽酸溶液，攪拌靜置，獲得磁流體。

20、本申請(qǐng)的第二方面，提供一種乙肝表面抗原檢測(cè)試劑盒，包括第一方面任意一種實(shí)現(xiàn)方式提供的一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝制備的吖啶酯標(biāo)記抗體。

21、可選的，所述試劑盒還包括：鏈酶親和素磁珠微粒組分、生物素標(biāo)記抗體組分、校準(zhǔn)品l以及校準(zhǔn)品h。

22、本申請(qǐng)通過磁流體預(yù)先吸附這些具有非特異性的吖啶酯標(biāo)記抗體，減少免疫反應(yīng)過程中吖啶酯標(biāo)記抗體與磁珠和反應(yīng)杯的非特異性吸附，進(jìn)而降低本底值、提升試劑的靈敏度。

技術(shù)特征：

1.一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝，其特征在于，包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝，其特征在于，制備吖啶酯標(biāo)記抗體的步驟包括：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝，其特征在于，所述第一緩沖液為碳酸鹽緩沖液，所述第一緩沖液的ph值為7.5±0.2，濃度為20mmol/l。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝，其特征在于，所述第二緩沖液為tris鹽酸緩沖液，所述第二緩沖液的ph值為7.4±0.2，濃度為20mmol/l。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝，其特征在于，所述磁流體的ph值小于8.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝，其特征在于，利用化學(xué)共沉淀法制備所述磁流體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝，其特征在于，制備磁流體的步驟包括：

8.一種乙肝表面抗原檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的一種吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝制備的吖啶酯標(biāo)記抗體。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種乙肝表面抗原檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：鏈酶親和素磁珠微粒組分、生物素標(biāo)記抗體組分、校準(zhǔn)品l以及校準(zhǔn)品h。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物的純化工藝及其試劑盒，該純化工藝包括以下步驟：制備吖啶酯標(biāo)記抗體以及磁流體，所述磁流體中包含磁性微粒；將所述磁流體加入到離心管中，在所述離心管靠近底部的一側(cè)放置磁性件；待所述磁流體分層后，棄去位于上層的第一上清液；向所述離心管中加入吖啶酯標(biāo)記抗體，混勻后靜置反應(yīng)；分離磁性微粒與位于上層的第二上清液，所得第二上清液即為純化的吖啶酯標(biāo)記抗體。本申請(qǐng)通過磁流體預(yù)先吸附這些具有非特異性的吖啶酯標(biāo)記抗體，減少免疫反應(yīng)過程中吖啶酯標(biāo)記抗體與磁珠和反應(yīng)杯的非特異性吸附，進(jìn)而降低本底值、提升試劑的靈敏度。

技術(shù)研發(fā)人員：陳娜,崔松松,董傲
受保護(hù)的技術(shù)使用者：基蛋生物科技股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15