專利名稱：鐵皮石斛蒴果快繁育苗方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，尤其涉及一種珍稀瀕危中藥材鐵皮石斛蒴果的快繁育 苗方法。
背景技術：
鐵皮石斛是《中國藥典》收載的主要品種之一，藥用價值高、保健功能強，主要成分 為多糖、石斛堿、氨基酸和微量元素等，具有滋陰清熱、益胃生津、清嗓明目、增強人體免疫 力、抗衰老、抗腫瘤等功效。在《神農本草經》、《本草綱目》和《綱目拾遺》中早有記載，贊鐵 皮石斛是“滋陰補益珍品”，道家經典《道藏》稱其為我國“九大仙草”之首。多年來，由于產 區(qū)藥農毀滅性采挖，使野生鐵皮石斛資源瀕臨滅絕，國家已將鐵皮石斛列為二類重點保護 的珍稀瀕危物種，并鼓勵人工大面積栽培鐵皮石斛，變野生為家種，以保障鐵皮石斛資源的 可持續(xù)性利用和發(fā)展。本發(fā)明運用現代生物組培繁育技術，在不破壞石斛野生資源的前提下，快速擴繁 優(yōu)質鐵皮石斛種苗；一顆鐵皮石斛蒴果通過公司自創(chuàng)的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)方法，通過5 6月的組培培養(yǎng)可快繁培育出10萬株以上石斛組培苗，煉苗移栽成活率達到96%以上。 而目前國內很多科研單位和公司采用野生鐵皮石斛的莖段和莖尖進行組培育苗研究，比 如“一種鐵皮石斛快繁的組培方法”(申請?zhí)?008101108704. 5)、“一種鐵皮石斛莖尖組 培快速繁殖的育苗方法”(申請?zhí)?200710066480. 1)、“一種應用鐵皮石斛激素自養(yǎng)型莖 尖培養(yǎng)生產藥材的方法”(申請?zhí)?02136925. 9)、“一種鐵皮石斛的培育方法”(申請?zhí)?200410017380. 6)等。本發(fā)明的目的在于利用現代生物技術，在不破壞野生石斛資源的前提下，提高鐵 皮石斛種苗的擴繁速度和生產量，變野生為家種，實施人工大面積栽培，對瀕危緊缺藥用植 物資源再生和持續(xù)利用具有十分積極的影響。

發(fā)明內容
為了實現這一目的，發(fā)明人經過試驗，成功完成了可用于鐵皮石斛的組織培養(yǎng)基 質配方及其培養(yǎng)方法研制，對組織培養(yǎng)基質配方和生產工藝進行了試驗和完善，特別是對 基本培養(yǎng)基、細胞分裂素、生長素和有機添加物的篩選和用量，進行了多次研究和試驗，獲 得了獨創(chuàng)的培養(yǎng)配方和培養(yǎng)方法，取得了良好效果，解決了鐵皮石斛組培苗生產過程中出 現的問題，完成了鐵皮石斛蒴果快繁育苗生產技術的發(fā)明研究。鐵皮石斛蒴果快繁育苗方法分為三個階段1、將新鮮的未裂開的果實或儲存的種子經過消毒處理程序，播入1/2MS基本培養(yǎng) 基 +NAA (α -萘乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁 15% (V/V) + 蛋白胨 0. 1 5g/L+ 瓊脂 5g/L 的培養(yǎng)基里，進行種子萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22 25°C，每日光照10-12小時，光強1800 25001x，約10 15天種胚開始萌動，15 25天種胚膨大，逐漸萌發(fā)形成綠色的原球莖；2、將原球莖轉入MS基本培養(yǎng)基+BA (6-芐基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA ( α -萘乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V)+蛋白胨0. 1 5g/L+瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里進 行原球莖增殖、分化培養(yǎng)，約25天可觀察到瓶內原球莖重疊堆積在培養(yǎng)基中，并有葉原莖 和小苗出現，將小苗轉入同樣的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2個月，將小苗培養(yǎng)成中苗，苗高3cm左右 同時伴隨有部分新的原球莖產生；3、將中苗轉入MS基本培養(yǎng)基+ΝΑΑ(α-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/ V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L+蛋白胨0. 1 5g/L的壯苗培養(yǎng)基里，繼續(xù)培養(yǎng)，約1. 5 個月可培養(yǎng)出5cm高以上的大苗，大苗可出瓶煉苗、移栽。上述的鐵皮石斛蒴果快繁育苗方法中，所提到的對于鐵皮石斛各生長過程培養(yǎng)基 質的配方是(1)種胚誘導培養(yǎng)基1/2MS基本培養(yǎng)基+ΝΑΑ( α -萘乙酸)0. 01 0. 5mg/ L+ 土豆汁15% (V/V)+蛋白胨0. 1 5g/L+瓊脂5g/L ； (2)原球莖增殖與分化培養(yǎng)基MS 基本培養(yǎng)基+BA(6-芐基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA(a -萘乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土 豆汁20 % (V/V)+蛋白胨0. 1 5g/L+瓊脂5g/L ； (3)壯苗生根培養(yǎng)基MS基本培養(yǎng)基 +離六(0-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/V) +土豆汁10% (V/V) +瓊脂6g/L+蛋 白胨0. 1 5g/L。采用本發(fā)明所提供的鐵皮石斛蒴果快繁育苗方法，可有效解決鐵皮石斛種苗的來 源和種苗的地道性，從鐵皮石斛種子到培養(yǎng)成大苗，只需5 6個月，大大縮短了種苗組培 時間和成本，與傳統種苗擴繁相比，種苗的擴繁速度和生產量都有了較大的提高，實現鐵皮 石斛產業(yè)化發(fā)展。本發(fā)明研究結果對解決鐵皮石斛變野生為家種，實施人工大面積栽培中，所面臨 的種苗來源緊缺等問題，起到了關鍵性的作用，為盡快推動鐵皮石斛產業(yè)化、規(guī)?；l(fā)展， 提供了科學依據和有力保證。本發(fā)明具有良好的社會效益、經濟效益和生態(tài)效益。
具體實施例方式實施例1 鐵皮石斛蒴果快繁育苗方法將收集的鐵皮石斛種源在每年4 5月開花時進行異花授粉，在當年的10月底蒴 果成熟后進行采收，放在干凈的培養(yǎng)皿里，放于冰箱內保存。a、將新鮮的未裂開的果實或儲存的種子經過消毒處理程序，播入1/2MS基本培養(yǎng) 基 +NAA (α -萘乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁 15% (V/V) + 蛋白胨 0. 1 5g/L+ 瓊脂 5g/L 的培養(yǎng)基里，進行種子萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22 25°C，每日光照10-12小時，光強1800 25001x，約15天種胚開始萌動，25天種胚膨大，逐漸萌發(fā)形成綠色的原球莖；b、將原球莖轉入MS基本培養(yǎng)基+BA (6-芐基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA ( α -萘 乙酸0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V)+蛋白胨0. 01 5g/L+瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里進 行原球莖增殖、分化培養(yǎng)，約25天可觀察到瓶內原球莖重疊堆積在培養(yǎng)基中，并有葉原莖 和小苗出現，將小苗轉入同樣的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，2個月將小苗培養(yǎng)成中苗，苗高3cm左右 同時伴隨有部分新的原球莖產生；C、將中苗轉入MS基本培養(yǎng)基+ΝΑΑ(α-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/ V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L+蛋白胨0. 1 5g/L的壯苗培養(yǎng)基里，繼續(xù)培養(yǎng)，約1. 5 個月可培養(yǎng)出5cm高以上的大苗，大苗可出瓶煉苗、移栽。
權利要求
一種鐵皮石斛蒴果快繁育苗方法，其特征在于該方法在不破壞野生石斛資源前提下，可大量快速培育出鐵皮石斛試管苗，包括下列步驟完成①將新鮮的未裂開的果實或儲存的種子經過消毒處理程序，播入1/2MS基本培養(yǎng)基+NAA(α 萘乙酸)0.01～0.5mg/L+土豆汁15％(V/V)+蛋白胨0.1～5g/L+瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里，進行種子萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22～25℃，每日光照10 12小時，光強1800～2500lx，約10～15天種胚開始萌動，15～25天種胚膨大，逐漸萌發(fā)形成綠色的原球莖；②將原球莖轉入MS基本培養(yǎng)基+BA(6 芐基腺嘌呤)0.01～0.5mg/L+NAA(α 萘乙酸)0.01～0.5mg/L+土豆汁20％(V/V)+蛋白胨0.1～5g/L+瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里進行原球莖增殖、分化培養(yǎng)，約25天可觀察到瓶內原球莖重疊堆積在培養(yǎng)基中，并有葉原莖和小苗出現，將小苗轉入同樣的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2個月，將小苗培養(yǎng)成中苗，苗高3cm左右同時伴隨有部分新的原球莖產生；③將中苗轉入MS基本培養(yǎng)基+NAA(α 萘乙酸)0.01～0.5mg/L+香蕉汁15％(V/V)+土豆汁10％(V/V)+瓊脂6g/L+蛋白胨0.1～5g/L的壯苗培養(yǎng)基里，繼續(xù)培養(yǎng)，約1.5個月可培養(yǎng)出5cm高以上的大苗，大苗可出瓶煉苗、移栽。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術領域，尤其涉及一種珍稀瀕危中藥材鐵皮石斛蒴果的快繁育苗方法。本發(fā)明的目的在于利用現代生物技術，在不破壞野生石斛資源的前提下，快速擴繁優(yōu)質鐵皮石斛種苗。一顆鐵皮石斛蒴果通過5～6月的組培培養(yǎng)可快繁培育出10萬株以上石斛組培苗，煉苗移栽成活率達到96％以上。本發(fā)明了提高鐵皮石斛種苗的擴繁速度和生產量，變野生為家種，實施人工大面積栽培，對瀕危緊缺藥用植物資源再生和持續(xù)利用具有十分積極的影響。
文檔編號A01H4/00GK101933456SQ20091009467
公開日2011年1月5日 申請日期2009年6月29日 優(yōu)先權日2009年6月29日
發(fā)明者彭貴湖, 徐金富 申請人:西雙版納增靚生物科技有限公司