一種全緣葉細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種全緣葉細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 全緣葉細(xì)筒苣苔為苦苣苔科細(xì)筒苣苔屬多年生草本植物，根狀莖近圓柱形，葉片 草質(zhì)，基部近圓形或淺心形，邊緣全緣，花冠紫色，花期6月，果期6月。中國特有珍稀植物，特 產(chǎn)廣西龍州，生于石灰?guī)r山地林下巖壁上，海拔約為530m。
[0003] 全緣葉細(xì)筒苣苔分布區(qū)域極其狹窄，目前僅在廣西龍州地區(qū)石灰?guī)r山陡崖上發(fā)現(xiàn) 少量植株，由于生長環(huán)境惡劣缺少水肥，加之其種子細(xì)小，萌發(fā)需要的溫度范圍、濕度范圍 和土壤酸堿度范圍比較小，自然界難以進(jìn)行有性繁殖，急需建立有效的繁育和保護(hù)體系，本 發(fā)明旨在通過組織培養(yǎng)技術(shù)葉片兩步成苗法對全緣葉細(xì)筒苣苔種質(zhì)資源進(jìn)行有效的繁育 和保護(hù)，是目前對全緣葉細(xì)筒苣苔育苗最便捷、穩(wěn)定的手段，可以節(jié)約大量的人力、物力和 場地，便于種質(zhì)交換和轉(zhuǎn)移，避免有害病蟲的人為傳播。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的在于提供一種全緣葉細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗法，能夠短時(shí)間內(nèi)提 供大量優(yōu)質(zhì)適合栽培的全緣葉細(xì)筒苣苔種苗。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案： 全緣葉細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗法，其特征在于： (1) 葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng):取全緣葉細(xì)筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，無菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,無菌水2~3次，0.1% Hgch 3min，無菌水2~3次沖 洗干后切分為0.5 cmX I cm大小接種在誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，在溫度為22~26°C，光照強(qiáng)度 1800~26001ux，光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽； (2) 不定芽壯苗生根培養(yǎng):選擇全緣葉細(xì)筒苣苔葉片分化1~1.5個(gè)月，具有2片以上葉 子、高1.5~3cm不定芽接種到壯苗生根培養(yǎng)基，在溫度為22~26° C，光照強(qiáng)度2000~28001UX， 光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，1~2個(gè)月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。
[0006] 采用本發(fā)明方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量全緣葉細(xì)筒苣 苔的優(yōu)質(zhì)種苗，并減少了配制培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)瓶的步驟，節(jié)約了大量人力物力，因此簡單易行、 生產(chǎn)成本降低，有效解決了全緣葉細(xì)筒苣苔規(guī)?；缂胺N質(zhì)資源保存問題。
【具體實(shí)施方式】
[0007] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說明。
[0008] 全緣葉細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗法法，包括以下步驟： (1)葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng):取全緣葉細(xì)筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，無菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,無菌水2~3次，0.1% Hgch 3min，無菌水2~3次沖 洗干后切分為0.5 cmX I cm大小接種在誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，在溫度為22~26°C，光照強(qiáng)度 1800~26001ux，光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽。
[0009] 表1不同激素對不定芽數(shù)的影響

注:芽增殖倍數(shù)=(30天后芽數(shù)一接種時(shí)芽數(shù))/接種時(shí)芽數(shù) (2)不定芽壯苗生根培養(yǎng):選擇全緣葉細(xì)筒苣苔葉片分化1~1.5個(gè)月高1.5~3cm不定芽 接種到壯苗生根培養(yǎng)基，在溫度為22~26° C，光照強(qiáng)度2000~28001UX，光照時(shí)間為8~10小時(shí)/ 天的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，1~2個(gè)月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。
[0010] 表2不同激素水平對不定芽生根效果的影響

當(dāng)無菌苗每株生根4條以上、根長達(dá)2.5~4cm時(shí)，打開瓶蓋，在室內(nèi)煉苗3~4天后，將組培 苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去培養(yǎng)基，將其移栽至滅菌的栽培基質(zhì)中。
[0011] 備注：6-BA(6-芐氨基嘌呤），NAA(萘乙酸），KT(激動(dòng)素），IAA(B引噪乙酸），AC (活性炭）。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種全緣葉細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗法，其特征在于： (1) 葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng):取全緣葉細(xì)筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，無菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,無菌水2~3次，0.1% Hgcl2 3min，無菌水2~3次沖 洗干后切分為0.5 cmX 1 cm大小接種在誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，在溫度為22~26°C，光照強(qiáng)度 1800~26001ux，光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽； (2) 不定芽壯苗生根培養(yǎng):選擇全緣葉細(xì)筒苣苔葉片分化1~1.5個(gè)月，具有2片以上葉 子、高1.5~3cm不定芽接種到壯苗生根培養(yǎng)基，在溫度為22~26° C，光照強(qiáng)度2000~28001UX， 光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，1~2個(gè)月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。
【專利摘要】一種全緣葉細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗法：取全緣葉細(xì)筒苣苔幼嫩葉片作為外植體進(jìn)行滅菌處理，然后將其切分后接種到誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，1~1.5個(gè)月后選擇幼嫩葉片上分化出的具有2片以上葉子、高1.5~3cm的無菌芽苗轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基上；當(dāng)無菌苗每株生根4條以上、根長達(dá)2.5~４cm時(shí)，打開瓶蓋，在室內(nèi)煉苗３~４天后，將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去培養(yǎng)基，將其移栽至滅菌的栽培基質(zhì)中。采用本發(fā)明方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量全緣葉細(xì)筒苣苔的優(yōu)質(zhì)種苗，并減少了配制培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)瓶的步驟，節(jié)約了大量人力物力，因此簡單易行、生產(chǎn)成本降低，有效解決了全緣葉細(xì)筒苣苔規(guī)?；缂胺N質(zhì)資源保存問題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105706930
【申請?zhí)枴緾N201610108544
【發(fā)明人】李翠, 張占江, 呂惠珍, 繆劍華, 韋瑩, 韋坤華, 李林軒, 王一諾, 肖冬
【申請人】廣西壯族自治區(qū)藥用植物園