本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種桃葉衛(wèi)矛葉片再生植株的生產(chǎn)方法。

二技術(shù)背景

桃葉衛(wèi)矛因其木材材質(zhì)好、種子含油高、觀賞價值高、人工林栽植面積大，已經(jīng)成為21世紀(jì)改善人類生存環(huán)境，滿足人類生活需求最有潛力的園林樹種之一。

桃葉衛(wèi)矛繁殖一般采用播種、扦插、分株繁殖等方法，但由于受種子園數(shù)量以及產(chǎn)量所限制，所獲得的優(yōu)質(zhì)苗木非常少，繁殖速度比較慢，播種繁殖種子的采集時間要求很強(qiáng)，采種后預(yù)處理復(fù)雜，后期管理要求高，在生產(chǎn)上很難采用種子繁殖的方法大規(guī)模培育苗木，如何利用植物組織培養(yǎng)的方法，進(jìn)行優(yōu)質(zhì)苗木的選育，成為桃葉衛(wèi)矛繁殖過程中關(guān)注的焦點(diǎn)。

三

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明需要解決的問題是針對桃葉衛(wèi)矛優(yōu)質(zhì)苗木繁育中的需求，發(fā)明了一種桃葉衛(wèi)矛葉片再生植株的生產(chǎn)方法，為桃葉衛(wèi)矛優(yōu)質(zhì)苗木的繁育和品種改良提供生產(chǎn)和研究材料。

本發(fā)明所述桃葉衛(wèi)矛葉片再生植株的生產(chǎn)方法由以下步驟構(gòu)成：

(1)外植體的選擇與消毒：

選擇生長健壯無病害的桃葉衛(wèi)矛的幼嫩葉片作為外植體，將材料經(jīng)流水沖洗1h，去除表面雜物，在無菌操作工作臺上，先用滅菌的無菌水沖洗3遍，再用75％無水乙醇消毒30s，接著用無菌水沖洗3遍，然后用0.1％氯化汞消毒處理3-6min，最后用滅菌的無菌水沖洗4遍；

(2)愈傷組織的誘導(dǎo)：

在超凈工作臺上，將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊，接種于誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基上(配方為：MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂；Ph調(diào)為5.8)，葉的背面緊貼培養(yǎng)基，每瓶接種3-4塊，誘導(dǎo)光照條件14h/d，光照強(qiáng)度2000lux，溫度23-28℃；

(3)不定芽的誘導(dǎo)：

將經(jīng)過繼代培養(yǎng)1次后的黃綠色愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基上(配方為：MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂；Ph調(diào)為5.8)，誘導(dǎo)光照條件14h/d，光照強(qiáng)度2000lux，溫度23-28℃；

(4)根的誘導(dǎo)：

經(jīng)過不定芽誘導(dǎo)得到再生芽，待再生芽長到4-5片葉子，長度0.8-1.2cm高時轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根(配方為：1/2MS+1.5mg/LIBA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂；Ph調(diào)為5.8)，誘導(dǎo)光照條件14h/d，光照強(qiáng)度2000lux，溫度23-28℃；。

本發(fā)明所述桃葉衛(wèi)矛葉片再生植株培養(yǎng)周期為55-65天。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是：本發(fā)明使用桃葉衛(wèi)矛葉片作為材料，取材方便，數(shù)量充足，接種后在較短時間內(nèi)形成愈傷組織直至生根形成幼苗植株，所得植株生長健壯，平均根長均明顯增大。繁殖系數(shù)為8.2，培養(yǎng)條件可人為控制。利用本方法，可以提高桃葉衛(wèi)矛幼苗繁殖系數(shù)和成活率，培養(yǎng)周期短，變異少，培養(yǎng)條件可人為控制，操作方法簡單，為桃葉衛(wèi)矛葉片作為優(yōu)良的科研材料進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和品種改良等研究奠定基礎(chǔ)，從而為桃葉衛(wèi)矛大面積生產(chǎn)組培苗提供保障。為桃葉衛(wèi)矛的大規(guī)模生產(chǎn)提供了優(yōu)質(zhì)的組培苗。

四附圖說明

圖1桃葉衛(wèi)矛葉片外植體

圖2桃葉衛(wèi)矛再生植株的愈傷組織

圖3桃葉衛(wèi)矛再生植株的叢生芽

圖4桃葉衛(wèi)矛再生植株的生根幼苗

五具體實(shí)施方式

1，繁殖材料的選擇

試驗(yàn)材料取自金陵科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)站的兩年生桃葉衛(wèi)矛葉片。

2，繁殖材料的消毒

將材料經(jīng)流水沖洗1h去除表面雜物，在無菌操作工作臺上，先用無菌水沖洗3遍，再用75％無水乙醇消毒30s，接著無菌水沖洗3遍，然后用0.1％氯化汞消毒處理5-7min，最后用滅菌的無菌水沖洗4遍；見附圖1。

3，愈傷組織的誘導(dǎo)

在超凈工作臺上，將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊，接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，葉的背面緊貼培養(yǎng)基，每瓶接種3-4塊，誘導(dǎo)光照條件14h/d，光照強(qiáng)度2000lux，溫度23-28℃；見附圖2

4，不定芽的誘導(dǎo)

將經(jīng)過連續(xù)繼代培養(yǎng)2-3次后的黃綠色愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)光照條件14h/d，光照強(qiáng)度2000lux，溫度23-28℃；見附圖3

5，根的誘導(dǎo)

經(jīng)過不定芽誘導(dǎo)得到再生芽，待再生芽長到4-5片葉子，長度1cm高時可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，誘導(dǎo)光照條件14h/d，光照強(qiáng)度2000lux，溫度23-28℃。幼苗生根情況，見附圖4。