本發(fā)明涉及一種果樹生物殺蟲劑的制備方法，屬于殺蟲劑制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
我國作為世界栽培植物的八大起源中心之一，果樹具有栽培歷史悠久、資源豐富、種類品種繁多等顯著特點，已成為我國農(nóng)作物事業(yè)的重要組成部分，然而果樹是害蟲發(fā)生極為頻繁而且相當(dāng)嚴重的植物之一，果樹種類多，品種復(fù)雜，又系多年生植物，為害蟲發(fā)生提供了較為穩(wěn)定的生態(tài)環(huán)境，成為害蟲繁衍與爆發(fā)的有利場所，蟲害對果樹正常新陳代謝造成的干擾，導(dǎo)致果樹從生理機能到組織結(jié)構(gòu)上發(fā)生一系列的變化和破壞，對果品質(zhì)量和產(chǎn)量造成嚴重影響。隨著農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的改變，作物布局和產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，果樹品種的更新，特別是外來品種、引進品種的推廣，使果園害蟲發(fā)生了極大變化，果農(nóng)面臨害蟲侵襲的新挑戰(zhàn)。
現(xiàn)有的果樹殺蟲劑，大多常用單純的人工合成有機物質(zhì)，屬于化學(xué)類殺蟲劑，這類殺蟲劑雖然藥效高，但是其長期使用，會使害蟲產(chǎn)生耐藥性，從而失去效果，并且其殘毒期長，大量農(nóng)藥揮發(fā)到空氣中、流入水體中、沉降聚集在土壤中，污染農(nóng)畜漁果產(chǎn)品，通過食物鏈的富集作用轉(zhuǎn)移到人體內(nèi)，對農(nóng)作物生長環(huán)境及人畜健康有不同程度的不良影響。目前，雖然許多天然無公害的殺蟲劑不斷開發(fā)出來，但是其藥效較低，殺蟲效果不夠理想。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：針對傳統(tǒng)的果樹殺蟲劑長期使用后，會使害蟲產(chǎn)生耐藥性，失去殺蟲效果，且殘毒期長，嚴重影響作物生長環(huán)境和人畜健康的問題。本發(fā)明以果樹主根處土壤作為菌源，避免了對果樹的傷害，利用氧氣增加好氧菌的數(shù)量，利用藜蘆醇對好氧菌進行篩選，獲得目標(biāo)混合菌種，對混合菌種進行優(yōu)化篩選培養(yǎng)，以酪氨酸、卵磷脂作為篩選基質(zhì)，對目標(biāo)混合菌種進行篩選，再以害蟲脫皮粉末作為誘導(dǎo)營養(yǎng)物，對菌種進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得分解害蟲脫皮的酶，隨后與植物提取物混合，從而獲得果樹生物殺蟲劑。本發(fā)明以植物提取物破壞害蟲體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，以獲得酶分解害蟲形成的幾丁質(zhì)，阻止害蟲脫皮變態(tài)過程，使其不能脫皮而死，從而有效解決了對傳統(tǒng)的果樹殺蟲劑長期使用后，會使害蟲產(chǎn)生耐藥性，失去殺蟲效果，且殘毒期長，嚴重影響作物生長環(huán)境和人畜健康的問題，本發(fā)明制備的果樹殺蟲劑不會使害蟲產(chǎn)生耐藥性，殺蟲效果好，且不含有有毒物質(zhì)，不會對農(nóng)作物生長和人畜健康產(chǎn)生影響。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
（1）取距離果樹主根0.4～0.8cm處的土壤，并與其質(zhì)量0.9～1.2倍的質(zhì)量分數(shù)為6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并將容器置于25～32℃條件下，靜置10～12h，每隔30～40min，從容器底部對容器內(nèi)的混合物進行充氧，充氧速度為4mL/min，充氧時間為1～2min；
（2）在上述靜置結(jié)束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液體積1.1～1.5％的藜蘆醇，使用攪拌器對容器中的混合物以150r/min攪拌4～6min，使用50目紗布對容器中的混合物進行過濾，收集過濾液，得混合菌懸液，備用；
（3）按重量份數(shù)計，取50～55份無菌水、20～23份蛋白胨、18～20份酵母浸膏、12～14份葡萄糖、3～6份酪氨酸、2～4份卵磷脂及1～3份磷酸氫二鉀，放入攪拌機中攪拌均勻，并將攪拌混合物放入高溫滅菌鍋中殺菌消毒，得營養(yǎng)液；
（4）按體積比1:3～1:6，將步驟（2）備用的混合菌懸液和營養(yǎng)液混合均勻，放入發(fā)酵罐中，設(shè)定溫度為25～32℃，以1.1m3/min速率向發(fā)酵罐中通入氧氣，以110r/min攪拌發(fā)酵7～8天，每隔50～60min中向發(fā)酵罐中加入營養(yǎng)液質(zhì)量6～8％的害蟲脫皮粉末；
（5）在上述發(fā)酵結(jié)束后，對發(fā)酵罐中的發(fā)酵混合物進行過濾，收集過濾液，放入冷凍離心機中，設(shè)定溫度為2～4℃，以8000r/min離心5～10min，收集上層液，并將上層液進行冷凍濃縮，濃縮至原體積的70～75％，濃縮溫度為2～4℃，收集濃縮物；
（6）按質(zhì)量比1:1:5，取鶴草芽、貫眾和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，設(shè)定溫度為90～95℃，蒸煮4～6h，再自然冷卻至室溫，對蒸煮混合物進行過濾，收集過濾液，并將過濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中去除乙醇，收集剩余液，按質(zhì)量比1:4～1:6，將剩余液和上述濃縮物混合均勻，即可得果樹生物殺蟲劑。
所述的步驟（4）中害蟲脫皮粉末的制備方法為將害蟲脫皮放入45℃烘箱中干燥2～3h，再將干燥后的害蟲脫皮放入碾磨機中碾磨，過200目篩，收集過篩顆粒，即可。
所述的害蟲脫皮來自于果樹害蟲中鱗翅目害蟲和粉虱的脫皮。
所述的步驟（1）中果樹主根為蘋果樹主根、梨樹主根、桃樹主根、柿子樹主根及杏樹主根中的任意一種。
本發(fā)明的應(yīng)用方法：本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑適用于卷蛾科、螟蛾科、天蛾科等鱗翅目害蟲及粉虱。在果樹害蟲初發(fā)期，按質(zhì)量比1:1000～1:2000，將本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑與水進行混合均勻后，利用噴霧器，將殺蟲劑稀釋液均勻的噴灑于果樹的果實、枝、干、葉上，避免在大風(fēng)天或預(yù)計1小時內(nèi)有雨天使用。經(jīng)檢測，本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑藥效持效性達到40～45天，且殺蟲率達到98％以上，不會對作物生長和人體健康產(chǎn)生危害。
本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是：
（1）本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑藥效持效性達到40～45天，其長期使用后，不會使害蟲產(chǎn)生耐藥性，殺蟲率能達到98％以上，具有較高的殺蟲效果；
（2）本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑中不含有有毒物質(zhì)，不會對作物和人體健康產(chǎn)生危害，符合可持續(xù)發(fā)展的要求；
（3）本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑制備步驟簡單，所需成本低，具有廣闊的應(yīng)用前景。
具體實施方式
首先取距離果樹主根0.4～0.8cm處的土壤，并與其質(zhì)量0.9～1.2倍的質(zhì)量分數(shù)為6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并將容器置于25～32℃條件下，靜置10～12h，每隔30～40min，從容器底部對容器內(nèi)的混合物進行充氧，充氧速度為4mL/min，充氧時間為1～2min；在上述靜置結(jié)束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液體積1.1～1.5％的藜蘆醇，使用攪拌器對容器中的混合物以150r/min攪拌4～6min，使用50目紗布對容器中的混合物進行過濾，收集過濾液，得混合菌懸液，備用；按重量份數(shù)計，取50～55份無菌水、20～23份蛋白胨、18～20份酵母浸膏、12～14份葡萄糖、3～6份酪氨酸、2～4份卵磷脂及1～3份磷酸氫二鉀，放入攪拌機中攪拌均勻，并將攪拌混合物放入高溫滅菌鍋中殺菌消毒，得營養(yǎng)液；按體積比1:3～1:6，將備用的混合菌懸液和營養(yǎng)液混合均勻，放入發(fā)酵罐中，設(shè)定溫度為25～32℃，以1.1m3/min速率向發(fā)酵罐中通入氧氣，以110r/min攪拌發(fā)酵7～8天，每隔50～60min中向發(fā)酵罐中加入營養(yǎng)液質(zhì)量6～8％的害蟲脫皮粉末；在上述發(fā)酵結(jié)束后，對發(fā)酵罐中的發(fā)酵混合物進行過濾，收集過濾液，放入冷凍離心機中，設(shè)定溫度為2～4℃，以8000r/min離心5～10min，收集上層液，并將上層液進行冷凍濃縮，濃縮至原體積的70～75％，濃縮溫度為2～4℃，收集濃縮物；接著按質(zhì)量比1:1:5，取鶴草芽、貫眾和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，設(shè)定溫度為90～95℃，蒸煮4～6h，再自然冷卻至室溫，對蒸煮混合物進行過濾，收集過濾液，并將過濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中去除乙醇，收集剩余液，按質(zhì)量比1:4～1:6，將剩余液和上述濃縮物混合均勻，即可得果樹生物殺蟲劑。
其中害蟲脫皮粉末的制備方法為將害蟲脫皮放入45℃烘箱中干燥2～3h，再將干燥后的害蟲脫皮放入碾磨機中碾磨，過200目篩，收集過篩顆粒，即可，害蟲脫皮來自于果樹害蟲中鱗翅目害蟲和粉虱的脫皮。果樹主根為蘋果樹主根、梨樹主根、桃樹主根、柿子樹主根及杏樹主根中的任意一種。
實例1
首先取距離果樹主根0.8cm處的土壤，并與其質(zhì)量1.2倍的質(zhì)量分數(shù)為6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并將容器置于32℃條件下，靜置12h，每隔40min，從容器底部對容器內(nèi)的混合物進行充氧，充氧速度為4mL/min，充氧時間為2min；在上述靜置結(jié)束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液體積1.5％的藜蘆醇，使用攪拌器對容器中的混合物以150r/min攪拌6min，使用50目紗布對容器中的混合物進行過濾，收集過濾液，得混合菌懸液，備用；按重量份數(shù)計，取55份無菌水、23份蛋白胨、20份酵母浸膏、14份葡萄糖、6份酪氨酸、4份卵磷脂及3份磷酸氫二鉀，放入攪拌機中攪拌均勻，并將攪拌混合物放入高溫滅菌鍋中殺菌消毒，得營養(yǎng)液；按體積比1:6，將備用的混合菌懸液和營養(yǎng)液混合均勻，放入發(fā)酵罐中，設(shè)定溫度為32℃，以1.1m3/min速率向發(fā)酵罐中通入氧氣，以110r/min攪拌發(fā)酵8天，每隔60min中向發(fā)酵罐中加入營養(yǎng)液質(zhì)量8％的害蟲脫皮粉末；在上述發(fā)酵結(jié)束后，對發(fā)酵罐中的發(fā)酵混合物進行過濾，收集過濾液，放入冷凍離心機中，設(shè)定溫度為4℃，以8000r/min離心10min，收集上層液，并將上層液進行冷凍濃縮，濃縮至原體積的75％，濃縮溫度為4℃，收集濃縮物；接著按質(zhì)量比1:1:5，取鶴草芽、貫眾和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，設(shè)定溫度為95℃，蒸煮6h，再自然冷卻至室溫，對蒸煮混合物進行過濾，收集過濾液，并將過濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中去除乙醇，收集剩余液，按質(zhì)量比1:6，將剩余液和上述濃縮物混合均勻，即可得果樹生物殺蟲劑。其中害蟲脫皮粉末的制備方法為將害蟲脫皮放入45℃烘箱中干燥3h，再將干燥后的害蟲脫皮放入碾磨機中碾磨，過200目篩，收集過篩顆粒，即可，害蟲脫皮來自于蘋果小卷蛾的脫皮，果樹主根為蘋果樹主根。
本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑適用于蘋果小卷蛾。在蘋果小卷蛾初發(fā)期，按質(zhì)量比1:1000，將本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑與水進行混合均勻后，利用噴霧器，將殺蟲劑稀釋液均勻的噴灑于蘋果樹的果實、枝、干、葉上，避免在大風(fēng)天或預(yù)計1小時內(nèi)有雨天使用。經(jīng)檢測，本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑藥效持效性達到45天，且殺蟲率達到99.0％，不會對作物生長和人體健康產(chǎn)生危害。
實例2
首先取距離果樹主根0.4cm處的土壤，并與其質(zhì)量0.9倍的質(zhì)量分數(shù)為6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并將容器置于25℃條件下，靜置10h，每隔30min，從容器底部對容器內(nèi)的混合物進行充氧，充氧速度為4mL/min，充氧時間為1min；在上述靜置結(jié)束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液體積1.1％的藜蘆醇，使用攪拌器對容器中的混合物以150r/min攪拌4min，使用50目紗布對容器中的混合物進行過濾，收集過濾液，得混合菌懸液，備用；按重量份數(shù)計，取50份無菌水、20份蛋白胨、18份酵母浸膏、12份葡萄糖、3份酪氨酸、2份卵磷脂及1份磷酸氫二鉀，放入攪拌機中攪拌均勻，并將攪拌混合物放入高溫滅菌鍋中殺菌消毒，得營養(yǎng)液；按體積比1:3，將備用的混合菌懸液和營養(yǎng)液混合均勻，放入發(fā)酵罐中，設(shè)定溫度為25℃，以1.1m3/min速率向發(fā)酵罐中通入氧氣，以110r/min攪拌發(fā)酵7天，每隔50min中向發(fā)酵罐中加入營養(yǎng)液質(zhì)量6％的害蟲脫皮粉末；在上述發(fā)酵結(jié)束后，對發(fā)酵罐中的發(fā)酵混合物進行過濾，收集過濾液，放入冷凍離心機中，設(shè)定溫度為2℃，以8000r/min離心5min，收集上層液，并將上層液進行冷凍濃縮，濃縮至原體積的70％，濃縮溫度為2℃，收集濃縮物；接著按質(zhì)量比1:1:5，取鶴草芽、貫眾和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，設(shè)定溫度為90℃，蒸煮4h，再自然冷卻至室溫，對蒸煮混合物進行過濾，收集過濾液，并將過濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中去除乙醇，收集剩余液，按質(zhì)量比1:4，將剩余液和上述濃縮物混合均勻，即可得果樹生物殺蟲劑。其中害蟲脫皮粉末的制備方法為將害蟲脫皮放入45℃烘箱中干燥2h，再將干燥后的害蟲脫皮放入碾磨機中碾磨，過200目篩，收集過篩顆粒，即可，害蟲脫皮來自于梨葉斑蛾的脫皮，果樹主根為梨樹主根。
本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑適用于梨葉斑蛾。在梨樹梨葉斑蛾初發(fā)期，按質(zhì)量比1:2000，將本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑與水進行混合均勻后，利用噴霧器，將殺蟲劑稀釋液均勻的噴灑于梨樹的果實、枝、干、葉上，避免在大風(fēng)天或預(yù)計1小時內(nèi)有雨天使用。經(jīng)檢測，本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑藥效持效性達到40天，且殺蟲率達到98.7％，不會對作物生長和人體健康產(chǎn)生危害。
實例3
首先取距離果樹主根0.6cm處的土壤，并與其質(zhì)量1.1倍的質(zhì)量分數(shù)為6％的葡萄糖溶液混合，放入容器中，并將容器置于30℃條件下，靜置11h，每隔35min，從容器底部對容器內(nèi)的混合物進行充氧，充氧速度為4mL/min，充氧時間為2min；在上述靜置結(jié)束后，向容器中加入上述葡萄糖溶液體積1.2％的藜蘆醇，使用攪拌器對容器中的混合物以150r/min攪拌5min，使用50目紗布對容器中的混合物進行過濾，收集過濾液，得混合菌懸液，備用；按重量份數(shù)計，取52份無菌水、22份蛋白胨、19份酵母浸膏、13份葡萄糖、5份酪氨酸、3份卵磷脂及2份磷酸氫二鉀，放入攪拌機中攪拌均勻，并將攪拌混合物放入高溫滅菌鍋中殺菌消毒，得營養(yǎng)液；按體積比1:4，將備用的混合菌懸液和營養(yǎng)液混合均勻，放入發(fā)酵罐中，設(shè)定溫度為30℃，以1.1m3/min速率向發(fā)酵罐中通入氧氣，以110r/min攪拌發(fā)酵7天，每隔55min中向發(fā)酵罐中加入營養(yǎng)液質(zhì)量7％的害蟲脫皮粉末；在上述發(fā)酵結(jié)束后，對發(fā)酵罐中的發(fā)酵混合物進行過濾，收集過濾液，放入冷凍離心機中，設(shè)定溫度為3℃，以8000r/min離心6min，收集上層液，并將上層液進行冷凍濃縮，濃縮至原體積的72％，濃縮溫度為3℃，收集濃縮物；接著按質(zhì)量比1:1:5，取鶴草芽、貫眾和0.8mol/L乙醇溶液放入蒸煮罐中，設(shè)定溫度為92℃，蒸煮5h，再自然冷卻至室溫，對蒸煮混合物進行過濾，收集過濾液，并將過濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中去除乙醇，收集剩余液，按質(zhì)量比1:5，將剩余液和上述濃縮物混合均勻，即可得果樹生物殺蟲劑。其中害蟲脫皮粉末的制備方法為將害蟲脫皮放入45℃烘箱中干燥3h，再將干燥后的害蟲脫皮放入碾磨機中碾磨，過200目篩，收集過篩顆粒，即可，害蟲脫皮來自于粉虱的脫皮。果樹主根為柿子樹主根。
本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑適用于粉虱。在柿子樹粉虱初發(fā)期，按質(zhì)量比1:1500，將本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑與水進行混合均勻后，利用噴霧器，將殺蟲劑稀釋液均勻的噴灑于柿子樹的果實、枝、干、葉上，避免在大風(fēng)天或預(yù)計1小時內(nèi)有雨天使用。經(jīng)檢測，本發(fā)明制備的果樹生物殺蟲劑藥效持效性達到42天，且殺蟲率達到99.3％，不會對作物生長和人體健康產(chǎn)生危害。