一種檵木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種檵木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括種子的消毒、無菌苗的獲得、腋芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根誘導(dǎo)、煉苗移栽等步驟。本發(fā)明方法以檵木為材料，通過對比分析不同的激素配比對檵木快速繁殖的影響，以期為該植物快繁體系的建立以及種質(zhì)遺傳改良等奠定一定的基礎(chǔ)。
【專利說明】
一種繼木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及組培條件下檻木組培的培養(yǎng)，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。【背景技術(shù)】
[0002]檻木，Zo_r〇j〇eta_/? cAiflaosis (R.Br.) Oliv?，金縷梅科，又稱白花檻木，灌木， 稀為小喬木，高達(dá)12米，徑30厘米;小枝有銹色星狀毛，4種及1變種，分布于亞洲東部的亞熱帶地區(qū)，我國有3種及1變種，產(chǎn)長江中下游及其以南、北回歸線以北地區(qū)。喜陰植物，但不排斥陽光，常用做綠化苗木，比如蘺笆，綠化帶，多生于山野及丘陵灌叢中?；ê纹に睾彤愰纹ぼ?葉含沒食子酸、鞣質(zhì)、黃酮類(主要是槲皮素)。根、葉、花果均能入藥，能解熱止血、通經(jīng)活絡(luò)、收斂止血，清熱解毒，止瀉。目前主要采用播種或扦插的方法進(jìn)行繁殖，繁殖率普遍較低，組織培養(yǎng)可以為檻木的繁殖提供新的途徑，但至今尚未見報道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供檻木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，本發(fā)明以檻木為材料，通過對比分析不同的激素配比對檻木快速繁殖的影響，以期為該植物快繁體系的建立以及種質(zhì)遺傳改良等奠定一定的基礎(chǔ)。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案:選用檻木的種子，先用自來水沖洗lh左右，然后用50%(v/v)硫酸在30°C下水浴lOmin， 自來水沖洗5min后用研缽研磨5min以去除種皮，清水沖洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液處理 20S，再用0.1%(w/v)升汞溶液消毒8min，無菌水漂洗5遍，每次3min，接種在改良⑶+ZT2mg/L +NAA0.05mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗培養(yǎng)，將誘導(dǎo)出來的無菌苗切去根部接入培養(yǎng)基改良GD+6-BA2 ? 0mg/L+NAA0 ? 5mg/L+IBA0 ? 15g/L+Ce(N〇3)2〇 ? 5-1 ? 0mg/L+ Na2M〇040.5-1.0mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)，無菌苗和叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為自然光照，溫度25 °C，濕度65%，增殖培養(yǎng)繼代2次后接入MS+2,4-D0.02mg/L+維生素B2 1-1.5g/L+ABT0.3-0.5g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，條件為附加蔗糖 2%，瓊脂0.6%，光照強度80001x，光照10h/d，溫度25°C，濕度65%，直到幼苗長成(約3-4周)， 待根長至4cm，根數(shù)大于3，將帶根幼苗洗去根部殘留培養(yǎng)基后，移栽到含黃心土:花卉營養(yǎng)土(1:2)的營養(yǎng)缽中，前一周內(nèi)用大燒杯罩苗，以保持濕度，有利于保持組培苗的馴化，待幼苗生長健壯后，定植于溫室。
[0005]采用本發(fā)明制備的檻木，組培成活率高，遺傳性狀穩(wěn)定，生長周期短。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實施方式。【具體實施方式】
[0007]實施例1選取檻木的種子，先用自來水沖洗lh左右，然后用50%(v/v)硫酸在30°C下水浴10min，自來水沖洗5min后用研缽研磨5min以去除種皮，清水沖洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液處理20S，再用0.1%(w/v)升汞溶液消毒8min，無菌水漂洗5遍，每次3min，接種在改良⑶+ZT2mg/L+NAA0.05mg/L+30g/L蔗糖+7g/lJ京脂培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗培養(yǎng)，將誘導(dǎo)出來的無菌苗切去根部接入培養(yǎng)基改良GD+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.15g/L+Ce (NO3)20.5mg/L+Na2MoO40.5mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)，無菌苗和叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為自然光照，溫度25°C，濕度65%，增殖培養(yǎng)繼代2次后接入MS+2，4-D0.02mg/L+維生素B2 lg/L+ABT0.3g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，條件為附加蔗糖2%，瓊脂0.6%，光照強度80001x，光照10h/d，溫度25°C，濕度65%，直到幼苗長成(約3-4周)，待根長至4cm，根數(shù)大于3，將帶根幼苗洗去根部殘留培養(yǎng)基后，移栽到含黃心土:花卉營養(yǎng)土(1:2)的營養(yǎng)缽中，前一周內(nèi)用大燒杯罩苗，以保持濕度，有利于保持組培苗的馴化，待幼苗生長健壯后，定植于溫室，30天后成活率89%。
[0008]實施例2
選取檻木的種子，先用自來水沖洗Ih左右，然后用50%(v/v)硫酸在30°C下水浴lOmin，自來水沖洗5min后用研缽研磨5min以去除種皮，清水沖洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液處理20S，再用0.1%(w/v)升汞溶液消毒8min，無菌水漂洗5遍，每次3min，接種在改良⑶+ZT2mg/L+NAA0.05mg/L+30g/L蔗糖+7g/lJ京脂培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗培養(yǎng)，將誘導(dǎo)出來的無菌苗切去根部接入培養(yǎng)基改良GD+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.15g/L+Ce (NO3) 2l.0mg/L+Na2MoOU.0mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)，無菌苗和叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為自然光照，溫度25°C，濕度65%，增殖培養(yǎng)繼代2次后接入MS+2，4-D0.02mg/L+維生素B2 1.5g/L+ABT0.5g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，條件為附加蔗糖2%，瓊脂0.6%，光照強度8000Ix，光照10h/d，溫度25°C，濕度65%，直到幼苗長成(約3_4周)，待根長至4cm，根數(shù)大于3，將帶根幼苗洗去根部殘留培養(yǎng)基后，移栽到含黃心土:花卉營養(yǎng)土(1:2)的營養(yǎng)缽中，前一周內(nèi)用大燒杯罩苗，以保持濕度，有利于保持組培苗的馴化，待幼苗生長健壯后，定植于溫室，30天后成活率91%。
[0009]實施例3
選取檻木的種子，先用自來水沖洗Ih左右，然后用50%(v/v)硫酸在30°C下水浴lOmin，自來水沖洗5min后用研缽研磨5min以去除種皮，清水沖洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液處理20S，再用0.1%(w/v)升汞溶液消毒8min，無菌水漂洗5遍，每次3min，接種在改良⑶+ZT2mg/L+NAA0.05mg/L+30g/L蔗糖+7g/lJ京脂培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗培養(yǎng)，將誘導(dǎo)出來的無菌苗切去根部接入培養(yǎng)基改良GD+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.15g/L+Ce (NO3) 2l.0mg/L+Na2MoO40.5mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)，無菌苗和叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為自然光照，溫度25°C，濕度65%，增殖培養(yǎng)繼代2次后接入MS+2，4-D0.02mg/L+維生素B2 lg/L+ABT0.5g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，條件為附加蔗糖2%，瓊脂0.6%，光照強度80001x，光照10h/d，溫度25°C，濕度65%，直到幼苗長成(約3-4周)，待根長至4cm，根數(shù)大于3，將帶根幼苗洗去根部殘留培養(yǎng)基后，移栽到含黃心土:花卉營養(yǎng)土(1:2)的營養(yǎng)缽中，前一周內(nèi)用大燒杯罩苗，以保持濕度，有利于保持組培苗的馴化，待幼苗生長健壯后，定植于溫室，30天后成活率92%。
【主權(quán)項】
1.一種檻木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征是:檻木的種子經(jīng)消毒處理，接種在改良⑶+ZT2mg/L+NAA0.05mg/L+30g//L蔗糖+7g/l瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗培養(yǎng)，將誘導(dǎo)出來的無菌苗切去根部接入培養(yǎng)基改良GD+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.15g/L+Ce(N03)20.5-1.0mg/L+Na2Mo040.5-1.0mg/L+蔗糖15mg/L+7g/L瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)繼代2次后接入MS+2，4-D0.02mg/L+維生素B2 1-1.5g/L+ABT0.3-0.5g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，待根長至4cm，根數(shù)大于3時取出煉苗移栽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檻木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征是:所述的消毒處理為:選用檻木的種子，先用自來水沖洗Ih左右，然后用50%(v/v)硫酸在30 °C下水浴1min，自來水沖洗5min后用研缽研磨5min以去除種皮，清水沖洗，消毒用75%(v/v)酒精溶液處理20S，再用0.l%(w/v)升萊溶液消毒8min，無菌水漂洗5遍，每次3min。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檻木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征是:無菌苗和叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為自然光照，溫度25°C，濕度65%。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檻木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征是:生根誘導(dǎo)的條件為附加蔗糖2%，瓊脂0.6%，光照強度80001x，光照10h/d，溫度25°C，濕度65%。5.A根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檻木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征是:煉苗移栽的方法為直到幼苗長成(約3-4周)，將帶根幼苗洗去根部殘留培養(yǎng)基后，移栽到含黃心土:花卉營養(yǎng)土(1:2)的營養(yǎng)缽中，前一周內(nèi)用大燒杯罩苗，以保持濕度，有利于保持組培苗的馴化，待幼苗生長健壯后，定植于溫室。
【文檔編號】A01H4/00GK106069760SQ201610455632
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月22日
【發(fā)明人】楊成東
【申請人】南京澤朗生物科技有限公司