專利名稱：一種2-酮基-l-古龍酸發(fā)酵菌種的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及維生素C的制備方法，具體地說是一種2-酮基-L-古龍酸發(fā)酵菌 種的制備工藝。
背景技術(shù)：
目前，我國維生素C生產(chǎn)廠家均采用二歩發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)。其主要特點(diǎn)是第 二步發(fā)酵過程由兩種菌混合培養(yǎng)完成的。其中普通生酮基古龍酸菌將山梨糖轉(zhuǎn) 化2-酮基-L-古龍酸，俗稱小菌，另一種菌為巨大芽孢桿菌，作為小菌的伴生菌， 促進(jìn)小菌生長(zhǎng)與產(chǎn)酸，俗稱大齒。兩種菌共同作用，將山梨糖轉(zhuǎn)化為2-酮基-L-古龍酸。公知的2-酮基-L-古龍酸發(fā)酵菌種制作技術(shù)中在斜面菌種制作時(shí)，大 小菌同時(shí)搭配進(jìn)行混合培養(yǎng)；液體種子培養(yǎng)基配方中，碳源主要采用山梨糖和 葡萄糖，采用該方法制作的菌種，小菌比例偏小，菌種密度低，造成實(shí)際生產(chǎn) 中發(fā)酵周期偏長(zhǎng)，發(fā)酵轉(zhuǎn)化率低，從而影響2-酮基-L-古龍酸的產(chǎn)量，增加能耗 和成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種操作簡(jiǎn)便、能夠縮短發(fā)酵周期的2-酮基-L-古龍酸 發(fā)酵菌種的制備工藝。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是該工藝采用大小菌進(jìn)行混合培養(yǎng)，小菌為普通生 酮基古龍酸菌，大菌為巨大芽孢桿菌，先將小菌單獨(dú)接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng) 16 48小時(shí)，然后再接種大菌，繼續(xù)培養(yǎng)24 72小時(shí)，大小菌的數(shù)量比例控制 為1: 20 40;采用濃度為5 30g/L的蔗糖或濃度為5 20g/L的果糖作為培養(yǎng) 基中的主要碳源，將大小菌混合種子接入其中培養(yǎng)，控制接種種液菌數(shù)為108 10'"個(gè)/ml。
本發(fā)明對(duì)菌種制作方法和種子液體培養(yǎng)基配方進(jìn)行優(yōu)化，改變小菌與大菌
的比例，增加菌種密度，提高菌種活力，從而縮短發(fā)酵周期；本制備工藝不需 要增添新設(shè)備，亦不需要改造原設(shè)備，菌種不變，操作簡(jiǎn)便，易廣泛應(yīng)用。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1:
先將小菌單獨(dú)接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)24小時(shí)，然后再接種大菌，繼續(xù)培 養(yǎng)28小時(shí)，大菌與小菌的數(shù)量比為1:30，在液體種子培養(yǎng)基中用濃度為15g/L 的果糖作為主要碳源，接種種液菌數(shù)為5.5X108f/ml，通過擴(kuò)大培養(yǎng)，接種 到lm3發(fā)酵罐中，發(fā)酵46小時(shí)結(jié)束，發(fā)酵液終點(diǎn)2-酮基-L-古龍酸含量 101. 63mg/ml,發(fā)酵轉(zhuǎn)化率為92. 56%。
實(shí)施例2:
先將小菌單獨(dú)接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)20小時(shí)，然后再接種大菌，繼續(xù)培 養(yǎng)32小時(shí)，大菌與小菌的數(shù)量比為1:28，在液體種子培養(yǎng)基中用濃度為10g/L 的蔗糖作為主要碳源，接種種液菌數(shù)為1.9X109個(gè)/ml，通過擴(kuò)大培養(yǎng)，接種 到50m3發(fā)酵罐中，發(fā)酵45小時(shí)結(jié)束，發(fā)酵液終點(diǎn)2-酮基-L-古龍酸含量 104. 86mg/ml,發(fā)酵轉(zhuǎn)化率為92. 91%。
實(shí)施例3:
先將小菌單獨(dú)接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)32小時(shí)，然后再接種大菌，繼續(xù)培 養(yǎng)34小時(shí)，大菌與小菌的數(shù)量比為1:38，在液體種子培養(yǎng)基中用濃度為15g,/L 的蔗糖作為主要碳源，接種種液菌數(shù)為8.3XlCf個(gè)/ml，通過擴(kuò)大培養(yǎng)，接種 到100m'發(fā)酵罐中，發(fā)酵41小時(shí)結(jié)束，發(fā)酵液終點(diǎn)2_酮基-L-古龍酸含量104. 81mg/ml，發(fā)酵轉(zhuǎn)化率為92. 81%。
本技術(shù)發(fā)酵平均周期縮短15%，發(fā)酵轉(zhuǎn)化率提高2個(gè)百分點(diǎn)，設(shè)備利用率 得到很大提高，成本也大幅下降。
本發(fā)明不限于這些公開的實(shí)施例，本發(fā)明將覆蓋技術(shù)方案所描述的范圍， 以及權(quán)利要求范圍的各種變形和等效變化，在不偏離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的 前提下，對(duì)本發(fā)明所作的本領(lǐng)域技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何修改或改進(jìn)均屬于本 發(fā)明所要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1、一種2-酮基-L-古龍酸發(fā)酵菌種的制備工藝，采用大小菌進(jìn)行混合培養(yǎng)，小菌為普通生酮基古龍酸菌，大菌為巨大芽孢桿菌，其特征在于先將小菌單獨(dú)接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)16～48小時(shí)，然后再接種大菌，繼續(xù)培養(yǎng)24～72小時(shí)，大小菌的數(shù)量比例控制為1∶20～40；采用濃度為5～30g/L的蔗糖或濃度為5～20g/L的果糖作為培養(yǎng)基中的主要碳源，將大小菌混合種子接入其中培養(yǎng)，控制接種種液菌數(shù)為108～1010個(gè)/ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種2-酮基-L-古龍酸發(fā)酵菌種的制備工藝，該制備工藝采用大小菌進(jìn)行混合培養(yǎng)，小菌為普通生酮基古龍酸菌，大菌為巨大芽孢桿菌，先將小菌單獨(dú)接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)16～48小時(shí)，然后再接種大菌，繼續(xù)培養(yǎng)24～72小時(shí)，大小菌的數(shù)量比例控制為1∶20～40；采用濃度為5～30g/L的蔗糖或濃度為5～20g/L的果糖作為培養(yǎng)基中的主要碳源，將大小菌混合種子接入其中培養(yǎng)，控制接種種液菌數(shù)為10⁸～10¹⁰個(gè)/ml。本發(fā)明改變小菌與大菌的比例，增加菌種密度，提高菌種活力，從而縮短發(fā)酵周期；本制備工藝菌種不變，操作簡(jiǎn)便，易廣泛應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12P7/60GK101575588SQ20091014811
公開日2009年11月11日 申請(qǐng)日期2009年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月22日
發(fā)明者吳新莉, 濤 朱, 胡少斌, 訓(xùn) 袁, 紅 陳, 黃建明 申請(qǐng)人:江蘇江山制藥有限公司