專利名稱：實(shí)時定量檢測人類vstm1基因表達(dá)水平的引物及探針的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種實(shí)時定量檢測人類VSTMl基因表達(dá)水平的引物及探針。
背景技術(shù)：
白血病是ー種造血干/祖細(xì)胞發(fā)生惡性病變的異質(zhì)性造血系統(tǒng)腫瘤，以異常造血細(xì)胞的惡性増殖、分化受阻、凋亡受抑并造成正常造血干/祖細(xì)胞受抑為特征，是導(dǎo)致青少年死亡的最常見的惡性腫瘤，發(fā)病機(jī)制至今尚不明確。分子生物學(xué)的進(jìn)展已證明基因異常是白血病形成的基礎(chǔ)，2008年WHO發(fā)布的白血病和淋巴瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)基因異常在血液惡性腫瘤診斷、分層及預(yù)后中的重要性。急性髓性白血病(acute myeloid leukemia, AML)相關(guān)的染色體易位造成的癌基因活化,如AMLl/ETO、PML/RARa、CBFb/MYHll等，已為人們所認(rèn)知并在臨床診斷、靶向治療中發(fā)揮重要作用。但細(xì)胞癌基因的活化僅代表參與腫瘤發(fā)生的基因變化之一，另ー種變化是抑癌基因的失活。抑癌基因正常時起抑制細(xì)胞増殖和腫瘤發(fā)生的作用。許多腫瘤均發(fā)現(xiàn)抑癌基因的兩個等位基因缺失或失活，失去細(xì)胞增生的陰性調(diào)節(jié)因素，導(dǎo)致腫瘤克隆的増殖和/或生存優(yōu)勢。目前存在的問題是，尚不能證明已發(fā)現(xiàn)的抑癌基因在AML發(fā)病機(jī)制中的普遍意義，而隨著人類基因組計(jì)劃順利完成，有可能在大多數(shù)人類白血病中找到更多的診斷及藥物作用靶點(diǎn)。雖然人類基因組全部序列已確定，但許多基因的功能仍然ー無所知。根據(jù)2010年發(fā)表的人類轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫Η-Invitational Database (H-InvDB)的統(tǒng)計(jì),在目前已注釋的35，303個人類編碼基因中，有功能報道的只有13，314個。因此，大量人類新發(fā)現(xiàn)的基因的功能、其在腫瘤病理機(jī)制中的作用及其開發(fā)應(yīng)用仍有待于科學(xué)工作者的努力發(fā)掘。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種實(shí)時定量檢測人類VSTMl基因表達(dá)水平的引物及探針。本發(fā)明保護(hù)ー種試劑盒，包括特異性引物對甲和探針甲；所述特異性引物對甲為序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的引物對；所述探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。具體來說，所述探針甲的5’末端標(biāo)記有熒光基團(tuán)(如FAM熒光基團(tuán))，3’端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)(如BHQ熒光淬滅基團(tuán)或TAMRA熒光淬滅基團(tuán))。所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(C)或(d): (a)輔助診斷腫瘤患者；(b)輔助評價腫瘤患者的療效；(c)輔助鑒定腫瘤細(xì)胞系；(d)定量檢測VSTMl基因的表達(dá)量。所述VSTMl基因可如序列表的序列7、序列表的序列9、序列表的序列10、序列表的序列11、序列表的序列12、序列表的序列13或GENBANK ACCESSION NO. NM_198481. 3所不。所述試劑盒還可包括陽性質(zhì)粒；所述陽性質(zhì)粒為含有VSTMl基因或其片段的重組質(zhì)粒。所述陽性質(zhì)粒具體可為含有序列7所示的VSTMl基因片段的重組質(zhì)粒。所述陽性質(zhì)粒更具體可為將PMD18-T載體與序列表的序列7所示的VSTMl基因片段連接得到的重組質(zhì)粒。 所述(a)和/或所述(b)和/或所述(C)中，所述腫瘤為淋巴腫瘤或血液腫瘤。
所述(a)和/或(b)中，所述腫瘤患者具體可為血液腫瘤患者或淋巴腫瘤患者(淋巴瘤患者)，所述血液腫瘤患者更具體可為急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者或慢性髓性白血病(CML)患者，所述急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者具體可為M0/M1、M2、M3、M4、M5或M6亞型，所述初治慢性髓性白血病(CML)患者的亞型具體可為CML-慢性期患者或CML-加速/急變期患者。
所述(c)中，所述腫瘤細(xì)胞系具體可為淋巴腫瘤細(xì)胞系或血液腫瘤細(xì)胞系，所述淋巴腫瘤細(xì)胞系更具體可為Raji細(xì)胞，所述血液腫瘤細(xì)胞系具體可為K562細(xì)胞、MEG-Ol細(xì)胞、NB4細(xì)胞、HL60細(xì)胞、6T-CEM細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞或KG-I細(xì)胞。本發(fā)明還保護(hù)特異性引物對甲和探針甲在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述特異性引物對甲為序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的引物對；所述探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。具體來說，所述探針甲的5’末端標(biāo)記有熒光基團(tuán)(如FAM熒光基團(tuán))，3’端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)(如BHQ熒光淬滅基團(tuán)或TAMRA熒光淬滅基團(tuán))。所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(C)或(d): (a)輔助診斷腫瘤患者；(b)輔助評價腫瘤患者的療效；(c)輔助鑒定腫瘤細(xì)胞系；(d)定量檢測VSTMl基因的表達(dá)量。所述(a)和/或所述(b)和/或所述(C)中，所述腫瘤為淋巴腫瘤或血液腫瘤。所述(a)和/或(b)中，所述腫瘤患者具體可為血液腫瘤患者或淋巴腫瘤患者(淋巴瘤患者)，所述血液腫瘤患者更具體可為急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者或慢性髓性白血病(CML)患者，所述急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者具體可為M0/M1、M2、M3、M4、M5或M6亞型，所述初治慢性髓性白血病(CML)患者的亞型具體可為CML-慢性期患者或CML-加速/急變期患者。所述(c)中，所述腫瘤細(xì)胞系具體可為淋巴腫瘤細(xì)胞系或血液腫瘤細(xì)胞系，所述淋巴腫瘤細(xì)胞系更具體可為Raji細(xì)胞，所述血液腫瘤細(xì)胞系具體可為K562細(xì)胞、MEG-Ol細(xì)胞、NB4細(xì)胞、HL60細(xì)胞、6T-CEM細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞或KG-I細(xì)胞。本發(fā)明還保護(hù)特異性引物對甲、探針甲和陽性質(zhì)粒在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述特異性引物對甲為序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的引物對；所述探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述陽性質(zhì)粒為含有VSTMl基因或其片段的重組質(zhì)粒。具體來說，所述探針甲的5’末端標(biāo)記有熒光基團(tuán)(如FAM熒光基團(tuán))，3’端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)(如BHQ熒光淬滅基團(tuán)或TAMRA熒光淬滅基團(tuán))。所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(C)或(d): (a)輔助診斷腫瘤患者；(b)輔助評價腫瘤患者的療效；(c)輔助鑒定腫瘤細(xì)胞系；(d)定量檢測VSTMl基因的表達(dá)量。所述陽性質(zhì)粒具體可為含有序列7所示的VSTMl基因片段的重組質(zhì)粒。所述陽性質(zhì)粒更具體可為將PMD18-T載體與序列表的序列7所示的VSTMl基因片段連接得到的重組質(zhì)粒。所述(a)和/或所述(b)和/或所述(C)中，所述腫瘤為淋巴腫瘤或血液腫瘤。所述(a)和/或(b)中，所述腫瘤患者具體可為血液腫瘤患者或淋巴腫瘤患者(淋巴瘤患者)，所述血液腫瘤患者更具體可為急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者或慢性髓性白血病(CML)患者，所述急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者具體可為M0/M1、M2、M3、M4、M5或M6亞型，所述初治慢性髓性白血病(CML)患者的亞型具體可為CML-慢性期患者或CML-加速/急變期患者。所述(c )中，所述腫瘤細(xì)胞系具體可為淋巴腫瘤細(xì)胞系或血液腫瘤細(xì)胞系，所述淋巴腫瘤細(xì)胞系更具體可為Raji細(xì)胞，所述血液腫瘤細(xì)胞系具體可為K562細(xì)胞、MEG-Ol細(xì)胞、NB4細(xì)胞、HL60細(xì)胞、6T-CEM細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞或KG-I細(xì)胞。VSTMl (V-set and transmembrane domain containing I)基因在血液腫瘤的病理機(jī)制中可能發(fā)揮重要作用，該基因不僅參與正常造血細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展，而且可能與白血病細(xì)胞分化阻滯、異常增殖及不能適時凋亡有關(guān)，在髓系白血病病理機(jī)制中發(fā)揮重要作用。目前，國內(nèi)外尚缺乏實(shí)時定量檢測人類新基因VSTMl表達(dá)水平的引物對及探針。本發(fā)明提供的引物對和探針，可以用于定量檢測VSTMl基因表達(dá)水平，從而用于 血液腫瘤細(xì)胞系的輔助鑒定或血液腫瘤患者(特別是白血病患者)的輔助診斷，將在醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。


圖I為內(nèi)參對照質(zhì)粒的RQ-PCR熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2為陽性對照質(zhì)粒的RQ-PCR熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖3為實(shí)施例5的結(jié)果。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。TRIzol kits :購自Invitrogen公司。RNAsin :購自華美生物技術(shù)公司。dNTP :購自Pharmecia公司。Mo-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、5X標(biāo)準(zhǔn)緩沖液購自Promega公司。DNA連接酶購自TakaRa公司。Universal PCR Master mix :購自天根生物技術(shù)有限公司。PhusionHigh-Fidelity PCR Kit :購自 New England Biolabs 公司。診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)FAB(French American British)分型標(biāo)準(zhǔn)[參照文獻(xiàn)Bennett JM, Catovsky D,DanielMT, et al.Proposals for the classification ofthe acute leukaemias. French American British (FAB)co-operative group. Br JHaematol. 1976，33(4) :451-458.]。統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS軟件v. 13. 0。計(jì)量資料采用方差分析。p〈0. 05被認(rèn)為是有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)施例I、特異性引物對和探針的設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)針對VSTMl基因(NCBI基因庫序列號NM_198481. 3)的特異性引物對甲(由上游引物VSTMl-FP和下游引物VSTMl-RP組成，革巴序列為137bp)和探針甲(探針VSTMl-probe)上游引物VSTMl-FP (序列表的序列 I) :5’ -GCCGAGGCAGATTTATCCAA-3’ ；下游引物VSTMl-RP (序列表的序列 2) :5’ -CCTGGGTGGTGTCTGAAGCT-3’ ；探針VSTMl-probe (5，— 3，)FAM-CTCGACGGCAGACCCCCAAGG-BHQ (核苷酸序列為序列表的序列 3)。
設(shè)計(jì)針對ABLl基因(內(nèi)參基因；NCBI基因庫序列號NM_005157)設(shè)計(jì)的特異性引物對乙(由上游弓I物ABLl-F和下游弓I物ABLl-R組成，靶序列為124bp )和探針乙(探針ABLl-T-probe)上游引物ABLl-F (序列表的序列 4) :5’ -TGGAGATAACACTCTAAGCATAACTAAAGGT-3’
下游引物ABLl -R (序列表的序列 5) :5’ -GATGTAGTTGCTTGGGACCCA-3’ ；探針ABLl-T-probe (5，—3，):FAM-CCATTTTTGGTTTGGGCTTCACACCATT-TAMRA (核苷酸序列為序列表的序列 6)。分別合成特異性引物對甲、探針甲、特異性引物對乙和探針乙。可參考文獻(xiàn)合成GabertJ, Beillard E, van der Velden VH, etal.Standardization and quality control studies of'real-time'quantitativereverse transcriptase polymerase chain reaction of fus ion gene transcriptsfor residual disease detection in leukemia —a Europe Against Cancer program.Leukemia. 2003，17:2318-57.。VSTMl基因目前發(fā)現(xiàn)五個剪切體,依次為vl至v5,vl和v2是最主要的形式，vl至v5的序列依次如序列表的序列9、序列表的序列10、序列表的序列11、序列表的序列12和序列表的序列13所示。本發(fā)明的提供的特異性引物對甲和探針甲針對五個剪切體的共同區(qū)域，即該5個剪切體均可檢測到。實(shí)施例2、相關(guān)質(zhì)粒的制備一、陽性對照質(zhì)粒(含有VSTMl基因片段的質(zhì)粒)的制備以VSTMl基因表達(dá)陽性的正常人(志愿者)的骨髓單個核細(xì)胞的cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。PCR擴(kuò)增所用的引物對如下上游引物5’-GTGAGAAGGAAACTGCAAGAGTGGG-3’ ；下游引物5，-TTGATATGGACGAAGAGCAAGGAAA-3，。測序結(jié)果表明，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的核苷酸序列如序列表的序列7所示(993bp)。將所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物插入PMD18-T質(zhì)粒(pMD18_T載體系統(tǒng)，上海皓嘉公司，產(chǎn)品目錄號D101A)，得到陽性對照質(zhì)粒(骨架質(zhì)粒為pMD18-T質(zhì)粒，在ECOR V位點(diǎn)插入序列7所示的VSTMl基因片段)。二、內(nèi)參對照質(zhì)粒(含有ABL基因片段的質(zhì)粒)的制備以正常人(志愿者)的骨髓單個核細(xì)胞的cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)
增產(chǎn)物。PCR擴(kuò)增所用的引物對如下上游引物5’-TGGAGATAACACTCTAAGCATAACTAAAGGT-3’ ；下游引物5’ -GATGTAGTTGCTTGGGACCCA-3 ’。測序結(jié)果表明，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的核苷酸序列如序列表的序列8所示(124bp)。將所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物插入pMD18-T質(zhì)粒(pMD18_T載體系統(tǒng)，上海皓嘉公司，產(chǎn)品目錄號D101A)，得到內(nèi)參對照質(zhì)粒(骨架質(zhì)粒為pMD18-T質(zhì)粒，在ECOR V位點(diǎn)插入序列8所示的ABL基因片段)。
實(shí)施例3、檢測陽性對照質(zhì)粒的靈敏度檢測將實(shí)施例2得到的陽性對照質(zhì)粒用滅菌雙蒸注射用水進(jìn)行10倍梯度稀釋，得到各個稀釋液(每微升分別含有10' IO6, ΙΟ5、104、IO3, IO2UO1UO0個拷貝的VSTMl基因片段)；將實(shí)施例2得到的內(nèi)參對照質(zhì)粒用滅菌雙蒸注射用水進(jìn)行10倍梯度稀釋，得到各個稀釋液(每微升分別含有ΙΟ6、ΙΟ5、ΙΟ4、103、IO2UO1UO0個拷貝的ABL基因片段);通過測定吸光度值計(jì)算VSTMl基因片段或ABL基因片段的拷貝數(shù)。將各個陽性對照質(zhì)粒稀釋液采用實(shí)施例I得到的特異性引物對甲和探針甲在熒光實(shí)時定量PCR儀(美國ABI公司7500-FAST型)上進(jìn)行RQ-PCR。將各個內(nèi)參對照質(zhì)粒采用實(shí)施例I得到的特異性引物對乙和探針乙在熒光實(shí)時定量PCR儀(美國ABI公司7500-FAST型)上進(jìn)行RQ-PCR。PCR反應(yīng)體系(10 μ I):上游引物O. 4 μ M，下游引物O. 4 μ M，探針O. 25 μ M，2XTaqMan通用PCR公共體系5 μ I (ABI公司，美國)，質(zhì)粒I μ I ;其余為去離子水。PCR 反應(yīng)條件50°C 2min, I 個循環(huán)；95°C IOmin, I 個循環(huán)；95°C 15s,60°C lmin, 50個循環(huán)。內(nèi)參對照質(zhì)粒RQ-PCR熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖I (閾值為O. 082)，函數(shù)為Iog10ABLl= (Ct-38. 47) /-3. 22，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到O. 99以上，檢測內(nèi)參基因的靈敏度達(dá)10個拷貝。陽性對照質(zhì)粒的RQ-PCR熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2 (閾值為O. 082)，函數(shù)為Iog10VSTMl= (Ct-39. 03)/-3. 51，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到O. 99以上，檢測VSTMl基因片段的靈敏度可達(dá)10個拷貝。實(shí)施例4、檢測細(xì)胞系及白血病患者實(shí)施例4中所用的各個細(xì)胞系如下K562細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫，產(chǎn)品目錄號為TCHul91 ；MEG-01細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫，產(chǎn)品目錄號為TCHul97 Jurkat細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫，產(chǎn)品目錄號為TCHu123 ;HL60細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫，產(chǎn)品目錄號為TCHu23 ;6T-CEM細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫，產(chǎn)品目錄號為TCHu2 ;KG_1細(xì)胞購自中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫，產(chǎn)品目錄號為KCB 200552YJ ；NB4細(xì)胞購自北京欣興唐生物科技有限公司，產(chǎn)品目錄號為CL007 ；Raji細(xì)胞購自北京欣興唐生物科技有限公司，產(chǎn)品目錄號為CL009 ;單個核細(xì)胞I :某個健康人(志愿者)的骨髓單個核細(xì)胞；單個核細(xì)胞2 :另一個健康人(志愿者)的骨髓單個核細(xì)胞。一、試劑盒的組裝試劑盒由如下組件組成實(shí)施例I制備的針對VSTMl基因的特異性引物對甲和探針甲、針對ABLl基因的特異性引物對乙和探針乙；實(shí)施例2制備的陽性對照質(zhì)粒和內(nèi)參對照質(zhì)粒。二、應(yīng)用步驟一的試劑盒檢測細(xì)胞系分別檢測各個細(xì)胞系中的VSTMl基因的表達(dá)水平。每個細(xì)胞系樣本皆重復(fù)檢測3次。步驟如下I、提取各個細(xì)胞的總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA。2、以cDNA為模板，用特異性引物對甲和探針甲在熒光實(shí)時定量PCR儀(美國ABI 公司7500-FAST型)上進(jìn)行RQ-PCR ；以cDNA為模板，用特異性引物對乙和探針乙在熒光實(shí)時定量PCR儀(美國ABI公司7500-FAST型)上進(jìn)行RQ-PCR。分析每批RQ-PCR結(jié)果時閾值均固定為O. 082。PCR反應(yīng)體系和PCR反應(yīng)條件同實(shí)施例3。分別用陽性對照質(zhì)粒和內(nèi)參對照質(zhì)粒制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到各細(xì)胞系中VSTMl基因和ABLl基因的拷貝數(shù)。以VSTMl基因的拷貝數(shù)與ABLl基因的拷貝數(shù)的比值表示VSTMl基因的相對表達(dá)水平(％)。結(jié)果見表I。表I在血液腫瘤細(xì)胞系中VSTMl基因的相對表達(dá)水平(均值土標(biāo)準(zhǔn)差)
權(quán)利要求
1.ー種試劑盒，包括特異性引物對甲和探針甲；所述特異性引物對甲為序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的引物對；所述探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。
2.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(c)或(d) : Ca)輔助診斷腫瘤患者；(b)輔助評價腫瘤患者的療效；(c)輔助鑒定腫瘤細(xì)胞系；(d)定量檢測VSTMl基因的表達(dá)量。
3.如權(quán)利要求I或2所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括陽性質(zhì)粒；所述陽性質(zhì)粒為含有VSTMl基因或其片段的重組質(zhì)粒。
4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述陽性質(zhì)粒為含有序列7所示的VSTMl基因片段的重組質(zhì)粒。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述陽性質(zhì)粒為將PMD18-T載體與序列表的序列7所示的VSTMl基因片段連接得到的重組質(zhì)粒。
6.如權(quán)利要求I至5中任一所述的試劑盒，其特征在于所述(a)和/或所述(b)和/或所述(C)中，所述腫瘤為淋巴腫瘤或血液腫瘤。
7.特異性引物對甲和探針甲在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述特異性引物對甲為序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的引物對；所述探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。
8.特異性引物對甲、探針甲和陽性質(zhì)粒在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述特異性引物對甲為序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的引物對；所述探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述陽性質(zhì)粒為含有VSTMl基因或其片段的重組質(zhì)粒。
9.如權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征在于所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(C)或(d) : Ca)輔助診斷腫瘤患者；(b)輔助評價腫瘤患者的療效；(C)輔助鑒定腫瘤細(xì)胞系；(d)定量檢測VSTMl基因的表達(dá)量。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述(a)和/或所述(b)和/或所述(C)中，所述腫瘤為淋巴腫瘤或血液腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種實(shí)時定量檢測人類VSTM1基因表達(dá)水平的引物及探針。本發(fā)明提供了一種試劑盒，包括特異性引物對甲和探針甲；所述特異性引物對甲為序列表的序列1所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的引物對；所述探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(c)或(d)(a)輔助診斷腫瘤患者；(b)輔助評價腫瘤患者的療效；(c)輔助鑒定腫瘤細(xì)胞系；(d)定量檢測VSTM1基因的表達(dá)量。本發(fā)明提供的引物對和探針，可以用于定量檢測VSTM1基因表達(dá)水平，從而用于血液腫瘤細(xì)胞系的輔助鑒定或血液腫瘤患者(特別是白血病患者)的輔助診斷，將在醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。
文檔編號C12N15/11GK102649979SQ201210151188
公開日2012年8月29日 申請日期2012年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月15日
發(fā)明者冷馨, 李金蘭, 謝敏, 阮國瑞, 陳珊珊, 韓文玲, 馬大龍, 黃曉軍 申請人:北京大學(xué)人民醫(yī)院