本發(fā)明涉及一種營養(yǎng)素組合物，更準(zhǔn)確地說，本發(fā)明涉及一種對維生素d、k及葉酸營養(yǎng)素缺乏人群實施精準(zhǔn)營養(yǎng)補充的營養(yǎng)素組合物，該營養(yǎng)素組合物適于制成營養(yǎng)補充劑或保健食品。
背景技術(shù)：
維生素d是一種脂溶性維生素，為固醇類衍生物，有五種化合物，與健康關(guān)系較密切的是維生素d2和d3，存在于部分天然食物中，受紫外線照射后人體內(nèi)的膽固醇可轉(zhuǎn)化為維生素d。維生素d受體存在于身體大部分組織中，許多常見病包括一些常見腫瘤、糖尿病、老年癡呆、心血管疾病和骨質(zhì)疏松癥都與維生素d缺乏有關(guān)。維生素d缺乏已成為公共衛(wèi)生問題。維生素d是維持骨骼健康必不可少物質(zhì)之一，促進鈣磷吸收、骨基質(zhì)鈣化，使骨質(zhì)堅硬，亦刺激成骨細(xì)胞中的骨橋蛋白和堿性磷酸酶合成，抑制成骨細(xì)胞凋亡，有利骨形成。維生素d缺乏可導(dǎo)致兒童生長遲緩、骨骼畸形，即兒童佝僂病，補充維生素d則可預(yù)防或治療佝僂病，故維生素d又稱抗佝僂病維生素。維生素d缺乏導(dǎo)致或加劇成人骨量減少和骨質(zhì)疏松癥，甚至引起骨軟化和肌無力，增加骨折風(fēng)險。
葉酸屬于b族維生素，為機體細(xì)胞生長和繁殖的必需物質(zhì)。葉酸經(jīng)二氫葉酸還原酶及維生素b12的催化后形成四氫葉酸，后者與多種一碳單位(包括-ch3、-ch2、-cho等)結(jié)合成四氫葉酸類輔酶，傳遞一碳單位，參與體內(nèi)很多重要反應(yīng)。葉酸缺乏可導(dǎo)致脫氧核糖核酸(dna)合成障礙，進而細(xì)胞分裂、繁殖受阻。亞甲基四氫葉酸還原酶(mthfr)基因多態(tài)性可能導(dǎo)致我國人群對葉酸利用能力的相對不足：mthfr是5,10-亞甲基四氫葉酸還原為5-甲基四氫葉酸的關(guān)鍵酶,如基因突變則使酶活性顯著下降，影響外源性葉酸活化為5-甲基四氫葉酸，一碳單位傳遞受阻，則hcy不能順利轉(zhuǎn)化為蛋氨酸，形成高hcy血癥。mthfrc677t有三種基因型，即純合野生型(cc)、雜合型(ct)和純合突變型(tt)，tt型酶活性只有cc型30％。我國人群tt基因型頻率平均23.2％，顯著高于歐美國家，加之高溫烹調(diào)蔬菜的習(xí)慣，葉酸缺乏率(65％)明顯高于歐美國家。
維生素k是一類具有萘醌(naphthoquinone)基團(2-甲基-1，4萘醌)的衍生物，又名凝血維生素或抗出血維生素。1960年，研究發(fā)現(xiàn)其除凝血功能之外，尚有促進骨形成、抑制骨吸收的作用，能防治多種原因引起的骨質(zhì)疏松癥：維生素k通過促進成骨細(xì)胞分泌的骨鈣素γ-梭基谷氨酸化而與骨形成密切相關(guān)。維生素k可促進骨礦化，影響骨鈣素的生物合成與生物活性，是骨鈣素中谷氨酸γ位梭化的重要輔酶。部分老年性骨質(zhì)疏松性骨折患者血中維生素k水平明顯低下。維生素k攝人量長期低下者，其股骨頸骨折的危險性增高。接受抗凝治療者，其脊椎骨折的發(fā)生率遠遠超過預(yù)測值，治療時間愈長，其危險性亦愈高。有些老年人血中骨鈣素水平雖然高值，但其與經(jīng)磷灰石的結(jié)合能力卻下降。骨鈣素在血中呈現(xiàn)高值的女性患者骨折的危險性高。這種情況在給予維生素k以后，可以得到改善。
骨質(zhì)疏松以骨量減少、骨組織的微觀結(jié)構(gòu)退化為特征，使骨的脆性增加及骨折的危險性增加的一種全身性骨骼疾病。隨著社會人口的老齡化，該病的發(fā)病率正日益上升，成為嚴(yán)重影響我國老年人健康的重要疾病。骨質(zhì)疏松已在世界常見病、多發(fā)病中位居第7位，多發(fā)生于老年人和多種慢性疾病病人，對病人造成生理、心理及社會功能等諸多方面的影響，越來越受到人們的關(guān)注。骨質(zhì)疏松可導(dǎo)致疼痛、骨折、骨骼變形等問題，威脅老年人的健康和生活質(zhì)量，髖部骨折作為骨質(zhì)疏松的最嚴(yán)重后果，甚至可以引起患者死亡。
同型半胱氨酸(homocysteine，hcy)是一種含硫氨基酸，是蛋氨酸代謝過程的中間產(chǎn)物。研究發(fā)現(xiàn)，高hcy血癥不僅是心血管疾病的危險因素(致病機制包括損傷血管內(nèi)皮、促進血管平滑肌細(xì)胞增殖及動脈硬化等)，同時也是骨質(zhì)疏松性骨折的一個危險因素。高hcy血癥可妨礙膠原蛋白纖維與組織的連接，從而促進骨質(zhì)疏松癥發(fā)生，據(jù)推算19％老年性骨折與高hcy水平有關(guān)。人體血hcy水平取決于遺傳、飲食等因素，葉酸攝入不足可以使血hcy升高，維生素b12是hcy代謝的輔助因子，如果缺乏則同樣會促使高hcy血癥形成。
目前市場上復(fù)合維生素產(chǎn)品眾多，但由于成分多、每種元素含量較低，缺乏針對性，消費者難以選擇，實際保健效果尚難預(yù)料。因此，本發(fā)明旨在開發(fā)一種新的營養(yǎng)素組合物，可針對老年人營養(yǎng)素缺乏特點，輔助保護老年人骨骼健康、預(yù)防心腦血管疾病，是對現(xiàn)有市場多種維生素產(chǎn)品的優(yōu)化，符合精準(zhǔn)營養(yǎng)的趨勢。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種對維生素d、k及葉酸缺乏的人群實施精準(zhǔn)營養(yǎng)補充的營養(yǎng)素組合物；特別是針對營養(yǎng)素缺乏的中老年人，提供一種對中老年人骨骼有輔助保護作用、對心腦血管疾病有預(yù)防作用的營養(yǎng)補充劑或保健食品。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
一種營養(yǎng)素組合物，由以下成分組成：
(1)維生素d
(2)葉酸
(3)維生素k
(4)保健食品可接受的輔料。
本發(fā)明所述的營養(yǎng)素組合物中，維生素d含量為2～100μg，優(yōu)選2～20μg；所述葉酸含量為30～2000μg，優(yōu)選30～1200μg；所述維生素k含量為10～500μg，優(yōu)選15～100μg。
本發(fā)明所述的維生素d包括維生素d2和維生素d3，以及其他各組來源的各種維生素d形式。
本發(fā)明所述的葉酸包括葉酸、5-甲基四氫葉酸、甲酰四氫葉酸鈣、l-甲基葉酸、亞葉酸、左亞葉酸鈣、葉酸鹽、葉酸或葉酸鹽的活性代謝物和可在體內(nèi)釋放/生成葉酸的物質(zhì)，即包括人工合成及植物提取物來源的各種葉酸形式。
本發(fā)明所述維生素k包括植物來源的k1、微生物來源的k2，以及人工合成的k3和k4，優(yōu)選植物來源的k1和微生物來源的k2。
本發(fā)明所述的營養(yǎng)素組合物可制成普通片劑、咀嚼片劑、軟膠囊劑、硬膠囊劑、粉劑及顆粒劑等口服劑型。
在本發(fā)明中，所述的保健食品可接受的輔料選自填充劑(分散劑)、助懸劑、潤濕劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、矯味劑、穩(wěn)定劑、包埋物、包衣預(yù)混劑、食用色素中的一種或幾種組合。
其中，本發(fā)明所述的填充劑(分散劑)包括淀粉、可溶性淀粉、糊精、麥芽糊精、馬鈴薯淀粉、玉米淀粉、小麥淀粉、d-甘露糖醇、磷酸氫鈣、無水磷酸氫鈣、麥芽糖、木糖醇、山梨糖醇、微晶纖維素、異麥芽酮糖、乳粉、低取代羥丙纖維素、蔗糖、葡萄糖、乳糖、預(yù)膠化淀粉、食用植物油、聚乙二醇等的一種或幾種。
本發(fā)明所述的助懸劑包括蜂蠟、蟲蠟、卵磷脂、單硬脂酸甘油酯、乙基纖維素等其中的一種或幾種，所述的潤濕劑包括純化水和乙醇，所述的粘合劑包括羥丙基甲基纖維素、聚維酮、羥丙纖維素、羧甲纖維素鈉、淀粉、甲基纖維素、乙基纖維素、明膠、聚乙二醇、預(yù)膠化淀粉、蔗糖、葡萄糖等其中一種或幾種。
本發(fā)明所述的崩解劑包括淀粉、羧甲淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、低取代羥丙纖維素、碳酸氫鈉與枸櫞酸等其中的一種或幾種，所述的潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、二氧化硅、氫化植物油、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、山崳酸甘油酯、硬脂富馬酸鈉等其中的一種或幾種。
本發(fā)明所述的矯味劑包括水果粉、食用香精、高倍甜味劑、酸味劑等其中的一種或幾種，所述的水果粉包括橙粉、檸檬粉、櫻桃粉、蘋果粉、草莓粉、草莓粉、獼猴桃粉、橘粉、沙棘果粉、青梅果粉、芒果果粉、桑葚果粉、山楂果粉、西瓜果粉、菠蘿果粉、藍莓果粉、水蜜桃果粉、哈密瓜果粉、葡萄果粉、香草果粉、石榴果粉、玫瑰果粉等其中的一種或幾種。
本發(fā)明所述的食用香精包括香草香精、甜橙香精、牛奶香精、蘋果香精、葡萄香精、草莓香精、菠蘿香精、水蜜桃香精、哈密瓜香精、檸檬香精、櫻桃香精、甜玉米香精、香蕉香精、提子香精、葡萄香精、玫瑰香精、黑加侖香精、青蘋果香精、芒果香精、青芒果香精、桔子香精、香橙香精、雪梨香精、草莓香精、青梅香精、藍莓香精、楊梅香精、柚子香精、菠蘿香精、番石榴香精、百香果香精、奇異果香精、櫻桃香精、獼猴桃香精、西瓜香精、木瓜香精、哈密瓜香精、榴蓮香精、荔枝香精、山楂香精、橄欖香精、桑葚香精等其中的一種或幾種。
本發(fā)明所述的高倍甜味劑包括三氯蔗糖、阿斯巴甜、羅漢果甜苷、紐甜、甜菊苷，所述的酸味劑包括檸檬酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、酒石酸和富馬酸，所述的食用色素包括焦糖色、梔子黃、姜黃色素和葉綠素、辣椒橙、辣椒紅、葡萄皮紅、胭脂紅及其鋁色淀、日落黃及其鋁色淀、亮藍及其鋁色淀、靛藍及其鋁色淀、甜菜紅、天然莧菜紅、梔子藍、植物炭黑、氧化鐵黑、氧化鐵紅、黑豆紅、喹啉黃、番茄紅素、紅曲紅、黃氧化鐵、可可殼色、紅花黃、紅曲黃色素等的一種或幾種。
本發(fā)明所述的穩(wěn)定劑包括維生素e、二丁基羥基甲苯(bht)、丁基羥基茴香醚(bha)、維生素c，所述的包埋物包括β-環(huán)糊精、α-環(huán)糊精、γ-環(huán)糊精、糊精、淀粉、食用變性淀粉、蔗糖、麥芽糊精、阿拉伯樹膠等其中的一種或幾種。
本發(fā)明所述的營養(yǎng)素組合物根據(jù)目標(biāo)人群營養(yǎng)素缺乏特點，篩選功能協(xié)同的維生素進行科學(xué)組方，實施精準(zhǔn)營養(yǎng)補充，從而確保產(chǎn)品的功效，通過補充最佳劑量維生素d、葉酸、維生素k，特別是針對容易缺乏上述維生素的中老年人，輔助防治中老年人骨質(zhì)疏松癥，兼輔助預(yù)防心血管疾病的功能。
適量針對性補充維生素d、葉酸和維生素k，不僅促進鈣磷吸收，促進骨基質(zhì)鈣化，使骨質(zhì)堅硬，還可使血漿hcy水平降低，保護血管內(nèi)皮，增加骨密度，三者共同發(fā)揮對中老年人骨質(zhì)疏松癥和心血管疾病的預(yù)防作用以及對這一人群骨骼、心血管系統(tǒng)的保健作用，并且該營養(yǎng)素組合物作用效果顯著強于組成成分的單獨或聯(lián)用的作用效果。
與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，本發(fā)明所述的產(chǎn)品是一種效果更佳、更精準(zhǔn)的維生素功能保健食品。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方式作進一步描述，以下實施例中所列活性維生素的量均以有效成分計。
具體實施方式
實施例1：本發(fā)明所述保健食品的片劑制備(1000片量)
配方：
制備方法：取聚維酮k30用50％乙醇溶液配制成粘合劑，再將維生素d加入粘合劑中攪拌均勻，備用。另取維生素k、5-甲基四氫葉酸、三氯蔗糖與預(yù)膠化淀粉混合、過篩，再加入牛奶香精、羧甲淀粉鈉、糊精混合，加入配制好的含有維生素d粘合劑制軟材，24目篩制粒，55℃干燥2h，24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混合，壓片。將包衣預(yù)混劑配制成溶液，素片包衣，即制得本發(fā)明所述保健食品的片劑。
實施例2：本發(fā)明所述保健食品的片劑制備(1000片量)
配方：
制備方法：取聚維酮k30用50％乙醇溶液配制成粘合劑，再將維生素d加入粘合劑中攪拌均勻，備用。另取維生素k、葉酸、三氯蔗糖與預(yù)膠化淀粉混合、過篩，再加入牛奶香精、羧甲淀粉鈉、糊精混合，加入配制好的含有維生素d粘合劑制軟材，24目篩制粒，55℃干燥2h，24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混合，壓片。將包衣預(yù)混劑配制成溶液，素片包衣，即制得本發(fā)明所述保健食品的片劑。
為了證明本發(fā)明保健品有預(yù)防心腦血管疾病的作用，我們設(shè)計了以下實驗，主要是對實驗動物hcy及血管內(nèi)皮因子et-1和no的水平，考察本發(fā)明保健品的功效作用。
取本實施例2制得的保健食品，進行安全性毒理學(xué)評價和藥效學(xué)試驗。
急性毒性：取本實施例1所制片劑，按劑量5g/kg給予20只sd大鼠(雌雄各半)，按照40ml/kg的體積灌胃給予，給藥1次，連續(xù)觀察14天，sd大鼠一般狀況未見異常，實驗結(jié)果表明該保健品對sd大鼠的最大耐受量大于5g/kg。
本發(fā)明保健品降低hcy，保護血管內(nèi)皮的藥效學(xué)研究：
實驗動物：雄性sd大鼠，spf級，6周齡，體重在200g±20g,購自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，許可證號scx(粵)2013-0002。
飼料：正常對照組(c)喂飼飼料采用標(biāo)準(zhǔn)ain93m配方純化飼料，其他試驗組飼料均在ain93m基礎(chǔ)上制備的葉酸缺乏純化飼料。
實驗方法：80只雄性sd大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，按照體重隨機選取10只喂飼標(biāo)準(zhǔn)ain93m純化飼料作為正常對照組，其余動物喂飼葉酸缺乏的純化模型飼料4周后，采血檢測hcy。根據(jù)hcy水平，將模型動物隨機分成5組，每組9-10只，繼續(xù)葉酸缺乏飼料喂養(yǎng),一組作為模型組，另4組分別為保健品高中低劑量組和葉酸組，也繼續(xù)喂飼葉酸缺乏飼料，灌胃給藥(給藥劑量見表1)，連續(xù)給藥8周，眼眶采血，檢測大鼠hcy水平、et-1及no水平。
統(tǒng)計分析：試驗數(shù)據(jù)采用graphpadprism5統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計處理；數(shù)據(jù)結(jié)果均以
實驗結(jié)果：見表1。結(jié)果表明，本發(fā)明維生素保健品具有顯著降低大鼠血hcy作用，并能夠顯著提高no水平、降低et-1水平，顯示良好的降hcy、血管內(nèi)皮保護的作用，保健品中高劑量組的作用效果，較單獨葉酸組有進一步改善的作用。
表1.本發(fā)明保健食品對大鼠的降hcy、血管保護作用
模型組與對照組比較，*p<0.05，**p<0.01；與模型組比較，#p<0.05，##p<0.01
實施例3：本發(fā)明所述保健食品的軟膠囊制備(1000粒量)
配方：
制備方法：將蜂蠟加入大豆油中，50℃加熱，使蜂蠟溶解，放置至室溫，取維生素d、葉酸、維生素k加入大豆油中制成混懸液，備用。另取明膠、純化水、焦糖色、對羥基苯甲酸酯配制成膠液，將制得的混懸物用壓丸機壓丸制成軟膠囊，經(jīng)定型，洗丸和干燥處理后，即制得本發(fā)明所述的保健食品的軟膠囊劑。
實施例4：本發(fā)明所述保健食品的軟膠囊制備(1000粒量)
配方：
制備方法：將蜂蠟加入大豆油中，50℃加熱，使蜂蠟溶解，放置至室溫，取維生素d、葉酸、維生素k加入大豆油中制成混懸液，備用。另取明膠、純化水、焦糖色、對羥基苯甲酸酯配制成膠液，將制得的混懸物用壓丸機壓丸制成軟膠囊，經(jīng)定型，洗丸和干燥處理后，即制得本發(fā)明所述的保健食品的軟膠囊劑。
實施例5：本發(fā)明所述保健食品的硬膠囊劑制備(1000粒量)
配方：
制備方法：將葉酸與20％微晶纖維素混合，過篩，再加入維生素d干粉、維生素k混合，將所得的原料混合物與剩余量的微晶纖維素等量遞增混合，再加入乳糖、硬脂酸鎂混合，然后采用全自動膠囊填充機進行填充，經(jīng)拋光處理后即制得本發(fā)明所述保健食品的硬膠囊劑。
實施例6：本發(fā)明所述保健食品的硬膠囊劑制備(1000粒量)
配方：
制備方法：將葉酸與20％微晶纖維素混合，過篩，再加入維生素d干粉、維生素k混合，將所得的原料混合物與剩余量的微晶纖維素等量遞增混合，再加入乳糖、硬脂酸鎂混合，然后采用全自動膠囊填充機進行填充，經(jīng)拋光處理后即制得本發(fā)明所述保健食品的硬膠囊劑。
實施例7：本發(fā)明所述保健食品的顆粒劑制備(1000份量)
配方：
制備方法：將蔗糖粉碎過100目篩備用；取聚維酮k30用50％乙醇溶液配制成粘合劑，再將維生素d加入粘合劑中攪拌均勻，備用。另取維生素k、葉酸與蔗糖混合、過篩，再加入蘋果粉、蘋果香精、羧甲淀粉鈉、麥芽糊精混合，加入配制好的含有維生素d粘合劑制軟材，24目篩制粒，55℃干燥2h，24目篩整粒，即制得本發(fā)明所述保健食品的顆粒劑。
實施例8：本發(fā)明所述保健食品的咀嚼片制備(1000片量)
配方：
制備方法：取羥丙甲纖維素e5用60％乙醇溶液配制成粘合劑，再將維生素d加入粘合劑中攪拌均勻，備用。另取維生素k、葉酸與微晶纖維素混合、過篩，再加入甜菊苷、檸檬香精、奶粉、木糖醇混合，加入配制好的含有維生素d粘合劑制軟材，24目篩制粒，55℃干燥2h，24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混合，壓片即制得本發(fā)明所述保健食品的咀嚼片。
為了證明本發(fā)明保健品對骨質(zhì)疏松的治療和預(yù)防功效，我們設(shè)計了以下實驗，主要是對實驗動物股骨干重(wb)、右股骨密度(bmdf)及l(fā)2～l4骨密度(bmdl)的含量，考察本發(fā)明保健品(實施例8所制)的功效作用。
實驗方法：雌性sd大鼠，21-22月齡(老年)，體重(420±20)g；選取雌性sd大鼠18只，3月齡，體重(300±20)g作為陰性對照組。老年雌性sd大鼠隨機分為4組：老年大鼠組、維生素d+葉酸+維生素k(3+80+20)μg/kg/d，維生素d3μg/kg/d，維生素k20μg/kg/d，每組12只，陰性對照組和老年模型組每日灌胃相應(yīng)體積溶媒，12周后頸椎脫臼處死動物，剝離雙側(cè)股骨、脛骨和腰椎(l2-4)仔細(xì)剔除結(jié)締組織，進行相關(guān)指標(biāo)測定。
統(tǒng)計分析：試驗數(shù)據(jù)采用graphpadprism5統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計處理；數(shù)據(jù)結(jié)果均以
實驗結(jié)果：見表2。
表2.本發(fā)明保健品對大鼠股骨質(zhì)量、密度及椎骨密度的影響
老年組與陰性對照組比較，*p<0.05，**p<0.01；與對老年組比較，#p<0.05，##p<0.01。
結(jié)果顯示，維生素d、e及本發(fā)明保健品均可使老年雌性大鼠的骨重及松質(zhì)骨密度均有所改善，其中保健品,較單獨的維生素組效果有進一步的改善，可見組方各成分間具有協(xié)同作用。另外，安全性毒理學(xué)試驗表明本保健品安全、無毒副作用。