專利名稱：預防鴨瘟的蜂膠注射液及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種動物預防醫(yī)藥領域，具體為一種預防動物疫病發(fā)生的注射液的制備方法。
背景技術：
鴨瘟是由病毒引起的急烈性傳染病，涉及面廣、發(fā)病率高，死亡率有時在90 %以上，給飼養(yǎng)單位或個人帶來極大的經濟損失，同時，由于對病亡的鴨處理不當，往往造成病毒的漫延，產生更大的惡果。目前預防鴨瘟主要疫苗存在的問題是免疫期短(一般為3個月左右)、使用次數多、產生作用的時間長(14天)，保護率低(50-80%)等問題，因此，給家禽飼養(yǎng)業(yè)帶來的危害深重，且造成經濟損失。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種預防鴨瘟的注射液，該注射液對鴨瘟具有較好的預防效果。為實現上述目的，本發(fā)明的技術方案為
預防鴨瘟的蜂膠注射液，所述預防鴨瘟的蜂膠注射液由蜂膠水溶液、接種鴨瘟病毒并感染后死亡的鴨胚勻漿組織和滅活液組成，所述蜂膠水溶液、鴨胚勻漿組織的重量比為 8-9 1-2，所述蜂膠水溶液為體積分數為0. 1-2% ；所述滅活劑為青霉素、鏈霉素和福爾馬林液，預防鴨瘟的蜂膠注射液中每毫升含有2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素，所述福爾馬林在預防鴨瘟的蜂膠注射液中體積分數為0. 4%。
本發(fā)明的目的之二在于提供一種預防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，該方法操作簡單，適用于大規(guī)模生產。為實現上述目的，本發(fā)明的技術方案為
所述的預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液的制備方法，具體包括以下步驟a將接種鴨瘟種毒并感染死亡后鴨胚制成鴨胚勻漿組織，與蜂膠及水介質混合均勻，得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，所述鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中蜂膠與水介質組成體積濃度為0. 1-2%的蜂膠水溶液，所述蜂膠水溶液與鴨胚勻漿組織的體積比為8-9:1-2 ；
b在步驟a所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預防鴨瘟的蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分數為0. 4%的福爾馬林液， 37-39°C滅活，得預防鴨瘟的蜂膠注射液。進一步，所述的預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液的制備方法，所述鴨瘟種毒具體為
a在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內臟，放入組織搗碎機中搗碎； b取占總量為10-20%的被搗碎的鴨組織與占總重量為80-90%的濃度為0.8 %的生理鹽水混合，形成混合組織懸液；c將混合組織懸液放入離心機中，在離心20-40分鐘后取其上清液； d在其上清液中，按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素的配比加入青霉素和鏈霉素，得鴨瘟種毒；
進一步，所述的預防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，步驟a中所述死亡的鴨內臟為心、 肝、脾、肺和腦中任一種或多種。進一步，所述鴨瘟種毒接種于9-12日齡的鴨胚尿囊中的劑量為0. lmL。用本發(fā)明所述制備方法制成的預防鴨瘟蜂膠注射液對于預防鴨瘟具有顯著效果， 保護率提高到90-100%，保護期延長到6-12個月，產生作用時間縮短到5天，僅需一次注射即可達到預期效果。
具體實施例方式實施例1
在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機中搗碎，取占總重量的10%的被搗碎的鴨組織，占總重量的90%濃度為0. 8 %的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中在4 000轉/分條件下離心20分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8%的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0. 1毫升劑量的鴨瘟種毒稀釋液接種于9日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48 小時出血、水腫等特征死亡的鴨胚，放入組織搗碎機中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計取 10份的鴨勻漿組織與90份的蜂膠水溶液混合，蜂膠終濃度達到0. 1 %，形成混合組織懸液， 并將其放入離心機中，在4000轉/分條件下離心20分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分數為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實施例2
在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機中搗碎，取占總重量的15%的被搗碎的鴨組織，占總重量的85%濃度為0. 8%的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中在4000轉/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8 %的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0. 1毫升劑量的鴨瘟稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80小時出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計取15份的鴨勻漿組織與85份得蜂膠水溶液混合，蜂膠終濃度達到2%，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中，在4 000轉/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分數為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實施例3在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機中搗碎，取占總重量的20%的被搗碎的鴨組織，占總重量的80%濃度為0.8 %的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中在4 000轉/分條件下離心20分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8%的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0. 1毫升劑量的鴨瘟種毒稀釋液接種于12日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48 小時出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計取20 份的鴨勻漿組織與80份蜂膠水溶液混合，蜂膠終濃度達到1%，形成混合組織懸液，并其放入離心機中，在4 000轉/分條件下離心40分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分數為0. 4%的福爾馬林液， 37-39°C滅活，得預預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實施例4
在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機中搗碎，取占總重量的15%的被搗碎的鴨組織，占總重量的85%濃度為0. 8%的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中在4000轉/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8 %的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟種稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80 小時出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計取15 份的鴨勻漿組織與85份水介質混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中，在4 000 轉/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000 單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分數為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實施例5
在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機中搗碎，取占總重量的15%的被搗碎的鴨組織，占總重量的85%濃度為0. 8%的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中在4000轉/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8 %的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟種毒稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80 小時出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計取15 份的鴨勻漿組織與85份蜂膠水溶液混合，蜂膠終濃度達到3%，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中，在4 000轉/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分數為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實施例6在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機中搗碎，取占總重量的15%的被搗碎的鴨組織，占總重量的85%濃度為0. 8%的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中在4000轉/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8 %的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0. 1毫升劑量的鴨瘟稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80小時出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計取15份的鴨勻漿組織與85份白油乳化液混合，白油乳化液終濃度達到2%，形成混合組織懸液，并將其放入離心機中，在4 000轉/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分數為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預預防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實施例7鴨瘟病毒的檢測
取實施例1-6中的勻漿組織用TRIzol Reagent DNA提取試劑盒進行病毒 DNA 的提取，以如 SEQ ID N0:1 5’ -AGTCGTCGCAGTTTGTG-3，所示的，SEQ ID NO:2 5’ -GGTGTTGTTCTACGCCTTT-3’所示的引物[李子劍等鴨瘟病毒基因組核酸的提取方法比較。山東師范大學學報(自然科學版)2008,1 :134-136]，應用PCR的方法進行鴨瘟病毒的檢測，檢測結果均為陽性。實施例8無菌檢測
取實施例1-6制備的注射液分別接種于普通肉湯培養(yǎng)基和血瓊脂平板，經37°C培養(yǎng)M 小時，按常規(guī)方法觀察，雜菌檢測為陰性。實施例9安全試驗
選用未免疫的11日齡的肉鴨，每組10只，按實施例1-6制備的注射液劃分，6組和生理鹽水空白組，共計7組；每只注射lmL，隔離飼養(yǎng)15天，每日作體溫、呼吸、精神、食欲、糞便、 等臨床觀測，注射上述疫苗后，免疫注射組均未引起疫苗發(fā)病與死亡，注射部位未見明顯的病理變化，無不良反應，精神、食欲佳。實施例10抗體檢測
選用未免疫的11日齡的肉鴨，每組10只，按實施例1-6制備的注射液劃分，6組和生理鹽水空白組，共計7組；
檢測方法間接ELISA方法[馬秀麗，宋敏訓，王莉莉等，間接ELISA檢測鴨瘟抗體的研究和應用。山東農業(yè)科學，20051 :62-64]。結果詳見表1。
權利要求
1.預防鴨瘟的蜂膠注射液，其特征在于，所述預防鴨瘟的蜂膠注射液由蜂膠水溶液、 接種鴨瘟病毒并感染后死亡的鴨胚勻漿組織和滅活液組成，所述蜂膠水溶液、鴨胚勻漿組織的重量比為8-9 :1_2，所述蜂膠水溶液為體積分數為0. 1-2% ；所述滅活劑為青霉素、鏈霉素和福爾馬林液，預防鴨瘟的蜂膠注射液中每毫升含有2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素，所述福爾馬林在預防鴨瘟的蜂膠注射液中體積分數為0. 4%。
2.權利要求1所述的預防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟a將接種鴨瘟種毒并感染死亡后鴨胚制成鴨胚勻漿組織，與蜂膠及水介質混合均勻， 得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，所述鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中蜂膠與水介質組成體積濃度為0. 1-2%的蜂膠水溶液，所述蜂膠水溶液與鴨胚勻漿組織的體積比為8-9:1-2 ；b在步驟a所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預防鴨瘟的蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分數為0. 4%的福爾馬林液， 37-39°C滅活，得預防鴨瘟的蜂膠注射液。
3.根據權利要求2所述的預防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，其特征在于，所述鴨瘟種毒具體為a在無菌條件下取因患鴨瘟的死亡的鴨內臟，放入組織搗碎機中搗碎； b取占總量為10-20%的被搗碎的鴨組織與占總重量為80-90%的濃度為0.8 %的生理鹽水混合，形成混合組織懸液；c將混合組織懸液放入離心機中，在離心20-40分鐘后取其上清液； d在其上清液中，按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素的配比加入青霉素和鏈霉素，得鴨瘟種毒。
4.根據權利要求2所述的預防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，其特征在于，步驟a中所述死亡的鴨內臟為心、肝、脾、肺和腦中任一種或多種。
5.根據權利要求3所述的預防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，其特征在于所述鴨瘟種毒接種于9-12日齡的鴨胚尿囊中的劑量為0. lmL。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種動物預防醫(yī)藥領域，具體為一種預防動物疫病發(fā)生的注射液的制備方法，所述預防鴨瘟的蜂膠注射液由蜂膠水溶液、接種鴨瘟病毒并感染后死亡的鴨胚勻漿組織和滅活液組成；其制備方法為在鴨胚勻漿組織蜂膠混合液加入滅活液，得預防鴨瘟的蜂膠注射液；用本發(fā)明所述制備方法制成的預防鴨瘟蜂膠注射液對于預防鴨瘟具有顯著效果，保護率提高到90-100％，保護期延長到6-12個月，產生作用時間縮短到5天，僅需一次注射即可達到預期效果。
文檔編號A61K35/407GK102258539SQ20111017712
公開日2011年11月30日 申請日期2011年6月28日 優(yōu)先權日2011年6月28日
發(fā)明者付利芝, 彭祥偉, 楊金龍, 殷素會, 粟劍 申請人:重慶市畜牧科學院