專利名稱：丹參與三七不同提取部位及其組合抑制平滑肌細(xì)胞增生和防治冠狀動(dòng)脈術(shù)后再狹窄的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及丹參三七超聲、熱回流提取，提取物經(jīng)SP825大孔樹(shù)脂進(jìn)行醇水梯度洗脫的方法，以及50%洗脫部位、95%洗脫部位、50% +95%組合、50% +80% +95%組合及其單體組合等在抑制平滑肌細(xì)胞增生和預(yù)防冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張成形術(shù)(PTCA)術(shù)后再狹窄的用途。
背景技術(shù)：
三七為五加科多年生草本植物三七[Panax Notoginseng (Burk.)F.H.Chen]的根，具有活血化淤、消腫定痛的功效，皂苷類是其主要有效成分，如人參皂苷Rbl、Rgl。三七主要含有多種與人參皂苷類似的成分，如人參皂苷Rbl，Rd, Rgl，三七皂苷Rl，R2等皂苷類成分，總皂苷為其主要有效成分。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)對(duì)其化學(xué)和藥理進(jìn)行了廣泛的研究，證實(shí)三七總皂苷(PNS)具有實(shí)驗(yàn)性治療心肌缺血、心律失常，降低動(dòng)脈血壓，抗衰老及改善物質(zhì)代謝；對(duì)中樞神經(jīng)有抑制和鎮(zhèn)痛作用。丹參為唇形科植物丹參[Slauia miltiorrhiza Bunge]的干燥根及根莖。具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩之功?，F(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究表明，丹參能夠增加冠狀動(dòng)脈血流量、降血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循環(huán)作用。心血管疾病嚴(yán)重威脅著人類的健康，是全球范圍內(nèi)造成死亡人數(shù)最多的疾病。根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)2004年約有1710萬(wàn)人死于心血管疾病，占全球死亡人數(shù)的29%。其中約有720萬(wàn)人死于冠心病。冠心病(coronary artery heart disease),簡(jiǎn)稱CHD,是一種最常見(jiàn)的心臟病，是指因冠狀 動(dòng)脈狹窄、供血不足而引起的心肌機(jī)能障礙和(或)器質(zhì)性病變，故又稱缺血性心臟病(IHD)。癥狀表現(xiàn)胸腔中央發(fā)生一種壓榨性的疼痛，并可遷延至頸、頜、手臂、后背及胃部。發(fā)作的其他可能癥狀有眩暈、氣促、出汗、寒顫、惡心及昏厥。嚴(yán)重患者可能因?yàn)樾牧λソ叨劳觥?009年中國(guó)衛(wèi)生部第四次國(guó)家衛(wèi)生服務(wù)調(diào)查顯示，心臟病、腦血管病和高血壓等循環(huán)系統(tǒng)疾病明顯增加，總病例數(shù)達(dá)到1.14億，其中腦血管病患者從500萬(wàn)增長(zhǎng)到1300萬(wàn)，高血壓患者從1400萬(wàn)增長(zhǎng)到7300萬(wàn)，而從2009至2025年中國(guó)65歲以上老年人口占總?cè)丝诒壤龑?%上升到12%，中國(guó)循環(huán)系統(tǒng)疾病未來(lái)前景極其嚴(yán)峻，勢(shì)必構(gòu)成醫(yī)療支出的巨大負(fù)擔(dān)。根據(jù)最新出版的《中國(guó)心血管病報(bào)告2008-2009》數(shù)據(jù)顯示:中國(guó)心血管病(冠心病、腦卒中、心衰、高血壓等)現(xiàn)患病人數(shù)2.3億，每十個(gè)成年人中有2人是心血管病。其中高血壓2億，腦卒中700萬(wàn)、心肌梗死200萬(wàn)、心衰420萬(wàn)、肺心病500萬(wàn)，風(fēng)心病250萬(wàn)，先心病200萬(wàn)。估計(jì)中國(guó)每年死于心血管病的約300萬(wàn)人，其中一半與高血壓有關(guān)。中國(guó)總死亡人數(shù)中，每死亡3個(gè)人中就有I人是心血管病。中國(guó)每天心血管病死亡8200多人，估算每10秒就有I人死于心血管病。中國(guó)心血管病死亡率高居首位,高于腫瘤及其他疾病。每年消耗很大的國(guó)家財(cái)力和人力資源。采用外科手術(shù)已能對(duì)冠狀動(dòng)脈疾病做有效的治療。尤其是冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張成形術(shù)的快速發(fā)展，其對(duì)冠心病的治療價(jià)值已經(jīng)得到眾多隨機(jī)臨床機(jī)制試驗(yàn)的證實(shí)。冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張術(shù)成行術(shù)是從內(nèi)部將動(dòng)脈狹窄部位擴(kuò)張，恢復(fù)正常血液流量。但是經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張成形術(shù)(PTCA)術(shù)后3-6個(gè)月約有30% -50%的患者會(huì)出現(xiàn)血管內(nèi)膜增生再狹窄，極大地影響了 PTCA的遠(yuǎn)期療效。PTCA術(shù)后再狹窄的防治已經(jīng)成為當(dāng)今世界上心血管疾病防治研究中最重要的課題之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于建立三七與丹參超聲提取物經(jīng)不同濃度乙醇洗脫的方法及其洗脫部位在抑制平滑肌細(xì)胞增生和預(yù)防PTCA術(shù)后再狹窄的預(yù)防與治療的用途。本實(shí)驗(yàn)室模擬PTCA術(shù)后血管再狹窄，用球囊損傷SD大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈作為模型，在動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，證明丹參三七提取物不同洗脫部位及其不同濃度組合對(duì)大鼠血管內(nèi)膜增生的抑制；不同提取物中主要有效單體組合也能有效抑制大鼠血管內(nèi)膜增生，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明所用丹參、三七為常用中藥，所用提取物的洗脫部位為丹參三七提取物過(guò)SP825打孔樹(shù)脂，用不同濃度乙醇洗脫。所用單體組合人參皂苷Rbl，Rgl，丹參酮IIA(可用丹參酮IIA磺酸鈉代替)可以是從三七丹參藥材中提取的單體化合物，也可以化學(xué)合成，還可以是主要成分為這些單體的提取物。在實(shí)際生產(chǎn)中可以通過(guò)改變優(yōu)化提取工藝提高主要有效成分含量，減少用藥量和提高療效。復(fù)方丹參片在目前生產(chǎn)工藝內(nèi)可以制備成除片劑之外的劑型，如滴丸劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑等；三七丹參提取物不同乙醇洗脫部位及其中含有的主要有效單體人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、丹參酮IIA也可以制成各種不同的劑型，通過(guò)不同的給藥途徑用于PTCA術(shù)后再狹窄的預(yù)防和治療。 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):1、發(fā)現(xiàn)了三七、丹參的提取方法及其不同乙醇洗脫部位的洗脫方法。2、發(fā)現(xiàn)了三七、丹參的不同乙醇洗脫部位及其組合對(duì)血管術(shù)后損傷再狹窄的治療作用，可以很好地抑制血管內(nèi)膜的增厚和官腔狹窄，這些作用有助于提高冠狀動(dòng)脈成形術(shù)的遠(yuǎn)期療效，改善患者生活質(zhì)量。3、發(fā)現(xiàn)了人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、丹參酮IIA不同組合可以有效地抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖及治療血管術(shù)后內(nèi)膜球囊損傷再狹窄。4、本實(shí)驗(yàn)所得出提取部位及其組合以及有效單體組合，可以使用藥量比復(fù)方丹參片等中藥用藥量減少。


圖1:三七和丹參超聲和熱回流法提取各部位薄層圖。圖2:三七和丹參超聲和熱回流法提取各部位高效液相色譜圖。圖3:不同濃度的三七和丹參提取物洗脫部位對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管內(nèi)膜增生的影響。圖4:不同丹參、三七提取物不同洗脫部位組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管內(nèi)膜增生的影響。圖5:不同丹參、三七提取物及其單體有效成分組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管內(nèi)膜增生的影響。圖6:三七和丹參提取洗脫方法流程圖。圖7.不同濃度的三七和丹參提取物洗脫部位對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中MDA檢測(cè)結(jié)果。圖8.不同濃度的三七和丹參提取物洗脫部位對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中NO檢測(cè)結(jié)果。圖9.不同濃度的三七和丹參提取物洗脫部位對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中SOD檢測(cè)結(jié)果。圖10.不同濃度丹參和三七提取物不同洗脫部位組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中MDA檢測(cè)結(jié)果。圖11.不同濃度丹參和三七提取物不同洗脫部位組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中NO檢測(cè)結(jié)果。圖12.不同濃度丹參和三七提取物不同洗脫部位組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中SOD檢測(cè)結(jié)果。圖13.不同丹參、三七提 取物及其單體有效成分組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中MDA檢測(cè)結(jié)果。圖14.不同丹參、三七提取物及其單體有效成分組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中NO檢測(cè)結(jié)果。圖15.不同丹參、三七提取物及其單體有效成分組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管球囊損傷各組血清中SOD檢測(cè)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施案例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明:下面通過(guò)以下實(shí)施例來(lái)闡述本發(fā)明所述三七丹參提取物不同洗脫部位及其組合，以及其有效單體不同組合對(duì)抑制血管內(nèi)膜增厚作用的評(píng)價(jià)，但并不限于以下途徑。這些生物實(shí)驗(yàn)主要包括:1.三七丹參提取物不同洗脫部位的洗脫方法的建立及優(yōu)化。2.不同濃度三七丹參提取物不同洗脫部位及其配伍對(duì)SD大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷再狹窄的治療作用。
3.不同濃度三七丹參提取物不同洗脫部位中有效單體組合對(duì)SD大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷再狹窄的治療作用。4.不同濃度三七丹參提取物及其單體有效成分組合對(duì)SD大鼠動(dòng)脈血管內(nèi)膜增生的影響。[實(shí)施例一]三七丹參提取物不同洗脫部位的洗脫方法的建立及優(yōu)化。1.三七和丹參藥材飲片的購(gòu)買(mǎi)(購(gòu)自北京同仁堂藥材公司大柵欄店精品部)。2.三七丹參提取洗脫方法。附圖6。3.大孔樹(shù)脂處理:將SP825大孔樹(shù)脂用95%的乙醇浸泡3d，使其充分膨脹，濕法裝柱，然后用95%的乙醇洗至流出液加適量水無(wú)白色渾濁現(xiàn)象。再用蒸餾水洗盡乙醇，直至流出液無(wú)渾濁為止。4.分別取三七和丹參各150g，按上圖方法進(jìn)行超聲提??；另取一份按上圖進(jìn)行熱回流提取。5.提取物回收乙醇后，SP825大孔樹(shù)脂洗脫，濕法上樣，按上圖洗脫方法進(jìn)行不同濃度乙醇溶液洗脫。6.回收不同濃度乙醇洗脫部位溶液，冷凍干燥，計(jì)算提取率(洗脫部位重量/三七丹參原藥材總重量)，單位:g。7.高效液相色譜法條件設(shè)置:以C18為固定相，乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫，流速為lml/min，進(jìn)樣量為20 μ 1，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，柱溫為25°C。
權(quán)利要求
1.丹參與三七超聲提取物經(jīng)SP825大孔樹(shù)脂在50%、80 %、95 %濃度乙醇洗脫，所得50^^80^^95%洗脫部位的新方法建立。其特征在于超聲后提取物上大孔樹(shù)脂乙醇洗脫，較通常所用熱回流法，能提高不同洗脫部位的提取率，且洗脫部位有效單體含量更高。其中50 %洗脫部位主要含有人參皂苷Rgl，80 %洗脫部位主要含有人參皂苷Rbl，95 %洗脫部位主要含有丹參酮ΠΑ。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，各洗脫部位能夠用于抑制血管平滑肌細(xì)胞的增生和防治擴(kuò)張成形術(shù)后再狹窄相關(guān)疾病的新用途，其特征在于:抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖，防治血管球囊損傷其官腔變小，對(duì)術(shù)后血管再狹窄相關(guān)疾病起到預(yù)防和治療作用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，丹參與三七50%、80%、95%洗脫部位在150mg/kg劑量時(shí)，對(duì)大鼠球囊損傷再狹窄治療效果最佳。
4.根據(jù)權(quán)利要求2、3的應(yīng)用，丹參與三七50%、80%、95%洗脫部位兩兩組合，三者組合具有抑制平滑肌細(xì)胞增生的作用，治療預(yù)防血管術(shù)后再狹窄的作用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的應(yīng)用，人參皂苷Rgl，人參皂苷Rbl，丹參酮IIA為各洗脫部位的有效單體成分，單獨(dú)使用各單體及其兩兩組合，三者組合具有抑制平滑肌細(xì)胞增生，治療預(yù)防血管術(shù)后再狹窄的作用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、5所述的制劑，活性成分為人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、丹參酮IIA，其中丹參酮I I A可用其磺酸鈉鹽等易容鹽類代替。
7.根據(jù)權(quán)利要求2-4的應(yīng)用，含有有效劑量的三七與丹參提取物的組分及其組合可以和一種或多種符合藥典規(guī)定的其它藥用成分及藥用賦形劑制成制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、5的應(yīng)用，含有有效單體及其組合可以和一種或多種符合藥典規(guī)定的其它藥用成分及藥用賦形劑制成制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求7、8的應(yīng)用，其藥物成分可用包括含有1%-99%的洗脫部位及其組合，有效單體及其組合和99% -1 %的藥用賦形劑及其它可用組方的藥物制成口服及其他劑型。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的口服及其他劑型包括:片劑，丸劑，膠囊劑，軟膠囊劑，顆粒齊U，滴丸，緩釋制劑，控釋制劑，注射劑及其他適宜的劑型。
全文摘要
丹參與三七不同提取部位及其組合抑制平滑肌細(xì)胞增生和防治冠狀動(dòng)脈術(shù)后再狹窄的用途。本發(fā)明涉及三七與丹參的提取工藝、提取物不同洗脫部位及其組合在抑制血管平滑肌細(xì)胞增生和防治冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張形成術(shù)后再狹窄的用途。實(shí)驗(yàn)證明丹參三七提取物中50％、95％、50％+95％組合、50％+80％+95％組合可以有效抑制血管平滑肌的增生，防治球囊損傷術(shù)后血管內(nèi)膜的增厚；其中50％+95％組合、50％+80％+95％組合抑制血管平滑肌的增生，防治球囊損傷術(shù)后血管內(nèi)膜的增厚優(yōu)于各部位單獨(dú)給藥。
文檔編號(hào)A61K36/537GK103191187SQ20121000292
公開(kāi)日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2012年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月6日
發(fā)明者王升啟, 王云飛, 潘從澤, 苗雨瑞, 洪婷, 鄭冰清 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所