專利名稱：自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及自由脂肪酸受體2 (FFAR2)誘導細胞凋亡的用途。
背景技術(shù)：
生物體內(nèi)各種組織細胞通過增殖與凋亡來維持數(shù)量的平衡。一旦這種平衡被打破就會導致一些疾病的產(chǎn)生，如癌癥。細胞凋亡與癌癥之間的關(guān)系為癌癥的治療提供了新思路。近年來的研究發(fā)現(xiàn)細胞凋亡是各種抗癌藥物引發(fā)細胞死亡的主要方式，從而使得細胞凋亡與癌癥之間的關(guān)系及細胞凋亡在癌癥治療中的作用成為抗腫瘤研究的新焦點。細胞死亡一般有兩種方式，即細胞壞死(necrosis)和細胞凋亡(apoptosis)。細胞壞死通常發(fā)生在一群接觸的細胞中，是由各種非生理因素，如局部缺血等引起的難以控制的一種破壞現(xiàn)象。它通過干擾細胞能量代謝，引起細胞滲透壓不平衡，細胞質(zhì)腫脹，最終由溶酶體酶導致細胞結(jié)構(gòu)的不可逆性破壞并誘發(fā)局部的炎癥反應(yīng)。而細胞凋亡是一種主動的、固有的程序化現(xiàn)象。射線、高溫、毒素及各種抗癌藥物等生理性或非生理性的因素都可以引起細胞凋亡。凋亡的細胞由于失去細胞間相互聯(lián)系而與鄰近細胞分離，隨后細胞表面釋放出信號分子被吞噬細胞識別，因此凋亡不損傷周圍的細胞。同時，凋亡一般伴有明顯的形態(tài)學特征，以細胞核的變化為主，表現(xiàn)為核濃縮、細胞漿中細胞器密集、胞膜突出、體積縮小、DNA斷裂及形成凋亡小體。組成人體的正常細胞是一個復(fù)雜和相互依賴的共同管理、相互調(diào)控對方的大環(huán)境。一個細胞通過接收生長或者抑制的信號來調(diào)節(jié)其增殖，從而使每一種組織得以維持一定的大小和形狀。而癌細胞則與之截然相反，它們對于正常控制增殖的信號不敏感，只遵循它們自己內(nèi)在的增殖信號。惡性的腫瘤細胞甚至可以移動、入侵鄰近組織，干擾了機體生存所需的器官和組織，并最終導致機體死亡。長期以來，人們認為腫瘤化療的藥物靶細胞是選擇性地針對快速分裂的細胞，但在臨床上有些現(xiàn)象卻無法解釋。因為可治療的癌癥有時生長緩慢，而對化療有抗藥性的癌癥中也可能在快速分裂。而更多的事實表明，化療可能是在腫瘤細胞中誘導相應(yīng)細胞凋亡，而各種細胞凋亡的閾值不同造成了對不同腫瘤細胞治療的反應(yīng)不同。如有研究表明在體內(nèi)用視黃酸處理后T淋巴細胞凋亡；體內(nèi)對食道癌細胞放療和化療(5-氟尿嘧啶、順鉬，博來霉素)處理后能誘導腫瘤細胞凋亡。因此，誘導細胞凋亡已成為抗腫瘤研究的新焦點。游離脂肪酸(free fatty acids,FFA)是生物體的一種重要能量來源，同時也是一種信號分子，具有多種生理作用。FFA的生理功能及其對機體內(nèi)的營養(yǎng)代謝疾病的調(diào)控作用長期以來受到人們的關(guān)注，但由于FFA的特異性膜受體一直未被發(fā)現(xiàn)，關(guān)于其分子機制的認識無法進一步深入。而最新研究找到并鑒定了 FFA的特異性膜受體，使科學家們重新認識了 FFA在健康人及患者體內(nèi)發(fā)揮作用的分子機制。游離脂肪酸受體(FFAR)屬于G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)家族，而鑒于 目前30%以上的藥物靶標都是GPCR，因此開發(fā)基于FFA受體的高親和力的藥物進而治療如糖尿病等的復(fù)雜的疾病，將有著很大的應(yīng)用潛力。短鏈脂肪酸是腸道菌群消化食物過程的產(chǎn)物，而短鏈脂肪酸亦受體屬于游離脂肪酸受體家族。其中，脂肪酸受體2 (FFAR2)又名GPR43，于1997年首次被克隆，但直到2003年之后才被逐漸重視，之后不斷有重要發(fā)現(xiàn)發(fā)表；尤其是2010年，新發(fā)表論文數(shù)量和質(zhì)量都是歷年之最，足見目前FFAR2的研究已成為國際上一個新的研究熱點。文獻查閱發(fā)現(xiàn)FFAR2在腸道、胃、骨髓、脾臟、外周血單個核細胞、脂肪等組織均有表達，而在免疫相關(guān)組織、腸道、脂肪組織中表達較高，因此目前其研究主要集中在免疫、腸炎、脂肪分化領(lǐng)域。文獻報道，短鏈脂肪酸(Short Chain Fatty Acids, SCFAs)均能一定程度上結(jié)合FFAR2并激活下游信號通路但親和力有明顯差異，具體順序為親和力C2 = C3 > C4 > C5 = C6 (數(shù)字代表短鏈脂肪酸中碳原子數(shù))，而長鏈脂肪酸則不能激活其下游信號通路。在炎癥相關(guān)研究方面，文獻報道在硫酸葡聚糖(Dextran sulphate sodium, DSS)誘導的腸炎模型中，通過在造模小鼠飲水中添加FFAR2激動劑醋酸鈉(Sodium Acetate)能夠顯著抑制腸道炎癥反應(yīng)，并緩解腸道損傷指數(shù)。而FFAR2基因敲除小鼠中，醋酸鈉處理并不能夠顯著緩解DSS誘導的腸炎。上述發(fā)現(xiàn)提示FFAR2與SCFA的相互作用可能將食物、胃腸道微生物代謝、免疫系統(tǒng)及炎癥反應(yīng)在分子機制上的相互作用聯(lián)系起來，并發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。然而，上述研究雖然對FFAR2的功能有重要的提示作用，但是有關(guān)FFAR2的功能及其作用的分子機制方面還有很多有待探索之處。鑒于FFAR2可能發(fā)揮著重要的生理功能，我們利用文獻中報道的FFAR2的配體-醋酸鹽，利用各種細胞株，研究FFAR2的功能。如圖6所示，其為FFAR2的電腦模擬3D結(jié)構(gòu)圖，其具有7次跨膜結(jié)構(gòu)，灰色區(qū)域代表細胞膜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。自由脂肪酸受體2可以誘導細胞的凋亡。本發(fā)明提供一個基因-自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。通過給予自由脂肪酸受體2的配體醋酸鈉與丙酸鈉，發(fā)現(xiàn)該配體能夠顯著減少小鼠免疫細胞株Raw264.7的活細胞數(shù)量；通過在人胚腎細胞株HEK293T中過表達FFAR2基因，發(fā)現(xiàn)該細胞系中活細胞的數(shù)量顯著減少；進一步通過小分子核糖核酸介導的基因沉默技術(shù)(siRNA技術(shù))，減少HEK293T細胞株中的FFAR2后，細胞株中活細胞數(shù)量顯著增加；進一步通過線粒體膜電位檢測試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)，在過表達了 FFAR2的HEK293T細胞中，線粒體膜電位顯著降低，提示該基因能夠誘導細胞凋亡；通過細胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-PI)染色并通過流式細胞儀檢測后，結(jié)果提示在過表達了 FFAR2的HEK293T細胞中凋亡細胞顯著增加；本發(fā)明首次提供自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其對血液系統(tǒng)及其它種類的腫瘤具有潛在的治療作用。


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圖1:FFAR2的配體-醋酸鹽及FFAR2的配體-丙酮酸鹽對Raw264.7細胞生長的影響的不意圖；圖1A是空白組的不意圖；圖1B是25mM的FFAR2的配體_醋酸鹽的不意圖；圖1C是加入25mM的FFAR2的配體-丙酮酸鹽的示意圖；圖1D加入不同濃度的FFAR2的配體-醋酸鹽及FFAR2的配體-丙酮酸鹽的細胞OD值(450nm)的對比圖。圖2:過表達了 hFFAR2的Raw264.7的活細胞數(shù)變化對比圖；圖2A空白組的細胞示意圖；圖2B是過表達了 hFF AR2的Raw264.7的細胞示意圖；圖2C是空白組與過表達了hFFAR2的Raw264.7的細胞與空白組OD值(450nm)的對比示意圖。圖3:通過siRNA技術(shù)減少hFFAR2的表達后HEK293T活細胞變化對比圖；圖3A是空白組的示意圖；圖38是通過siRNA技術(shù)減少hFFAR2的表達后HEK293T活細胞示意圖；圖3C是通過siRNA技術(shù)減少hFFAR2過表達后的HEK293T細胞與空白組OD值(450nm)對比圖。圖4:hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞線粒體膜電位的變化對比圖；圖4A是空白組示意圖；圖48是hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞線粒體膜電位示意圖；圖4C是hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞線粒體膜電位的變化與空白組的對比示意圖。圖5:hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞數(shù)量變化示意圖；圖5A空白組AnnexinV及PI染色雙陽性的示意圖；圖5B是hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞Annexin V及PI染色雙陽性的示意圖；圖5C是hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后AnnexinV及PI染色雙陽性與空白組的對比示意圖。
圖6:FFAR2的電腦模擬3D結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
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下面結(jié)合具體實施方式
，詳細描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施方式僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。本發(fā)明公開了自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，即自由脂肪酸受體2(FTTAR2)可以誘導細胞的凋亡。

1，自由脂肪酸受體2FFAR2的配體-醋酸鹽及丙酮酸鹽顯著減少了 Raw264.7的活細胞數(shù)。如圖1所示，F(xiàn)FAR2的配體-醋酸鹽及丙酮酸鹽對Raw264.7細胞生長的影響的示意圖。為了觀察FFAR2的激活對小鼠免疫細胞株Raw264.7細胞生長的影響，我們通過給予細胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的醋酸鹽與丙酮酸鹽，處理24小時后，通過CCK-8活細胞計數(shù)試劑盒(Cell Counting Kit_8)對處理后細胞計數(shù),觀察其對Raw264.7細胞的影響。實驗數(shù)據(jù)如圖1A-C所示，圖1A是空白組的示意圖；圖1B是25mM的FFAR2的配體-醋酸鹽的示意圖；圖1C是25mM的FFAR2的配體-丙酮酸鹽的示意圖；本實施例中的醋酸鹽為醋酸鈉，丙酮酸鹽為丙酮酸鈉。通過圖1A -1C對比發(fā)現(xiàn)，顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)醋酸鈉與丙酮酸鈉處理后，視野中細胞數(shù)顯著減少。如圖1D所示，其為本發(fā)明加入不同濃度的醋酸鈉和丙酮酸鈉的細胞OD值(450nm)的對比示意圖，醋酸鈉與丙酮酸鈉能夠以濃度依賴性地減少細胞數(shù)，各組活細胞定量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析亦用GraphPad Prism計算,且有統(tǒng)計學意義，'冬p〈0.05，^p<0.01，***/ <% OOlo上述結(jié)果顯示，F(xiàn)FAR2的配體醋酸鹽與丙酮酸鹽處理后，能夠顯著減少小鼠免疫細胞株Raw264.7的細胞數(shù)。實施例1: (I)，Raw264.7小鼠巨噬細胞系用RPMI1640中加入10%熱滅活的胎牛血清培養(yǎng)(均購自Gibco公司)。(2)，醋酸鈉與丙酸鈉均用磷酸緩沖液配制成25M的存儲液，并于實驗中加入對應(yīng)體積的存儲液，得到對應(yīng)濃度。(3)，用醋酸鹽或者丙酸鹽處理24小時后，用顯微鏡觀察細胞形態(tài)(Olympus DP71纖維觀測與拍照系統(tǒng))，放大倍數(shù):200倍。(4)，處理后的活細胞數(shù)量用CCK-8試劑盒定量(杭州碧云天生物技術(shù)研究所)。2，人自由脂肪酸受體2 (hFFAR2)的過表達顯著減少Raw264.7的活細胞數(shù)。
為了研究人的自由脂肪酸受體2 (hFFAR2)對細胞數(shù)量的影響，我們克隆了人的自由脂肪酸受體2 (hFFAR2)基因的cDNA序列(美國公共醫(yī)學圖書館序列號(PubMed):NM_005306.2，mRNA 序列:ATGCTGCCGGACTGGAAGAGCTCCTTGATCCTCATGGCTTACATCATCATCTTCCTCACTGGCCTCCCTG CCAACCTCCTGGCCCTGCGGGCCTTTGTGGGGCGGATCCGCCAGCCCCAGCCTGCACCTGTGCACATCCT CCTGCTGAGCCTGACGCTGGCCGACCTCCTCCTGCTGCTGCTGCTGCCCTTCAAGATCATCGAGGCTGCG TCGAACTTCCGCTGGTACCTGCCCAAGGTCGTCTGCGCCCTCACGAGTTTTGGCTTCTACAGCAGCATCT ACTGCAGCACGTGGCTCCTGGCGGGCATCAGCATCGAGCGCTACCTGGGAGTGGCTTTCCCCGTGCAGTA CAAGCTCTCCCGCCGGCCTCTGTATGGAGTGATTGCAGCTCTGGTGGCCTGGGTTATGTCCTTTGGTCAC TGCACCATCGTGATCATCGTTCAATACTTGAACACGACTGAGCAGGTCAGAAGTGGCAATGAAATTACCT GCTACGAGAACTTCACCGATAACCAGTTGGACGTGGTGCTGCCCGTGCGGCTGGAGCTGTGCCTGGTGCT CTTCTTCATCCCCATGGCAGTCACCATCTTCTGCTACTGGCGTTTTGTGTGGATCATGCTCTCCCAGCCC CTTGTGGGGGCCCAGAGGCGGCGCCGAGCCGTGGGGCTGGCTGTGGTGACGCTGCTCAATTTCCTGGTGT GCTTCGGACCTTACAACGTGTCCCACCTGGTGGGGTATCACCAGAGAAAAAGCCCCTGGTGGCGGTCAAT AGCCGTGGTGTTCAGTTCACTCAACGCCAGTCTGGACCCCCTGCTCTTCTATTTCTCTTCTTCAGTGGTG CGCAGGGCATTTGGGAGAGGGCTGCAGGTGCTGCGGAATCAGGGCTCCTCCCTGTTGGGACGCAGAGGCA AAGACACAGCAGAGGGGACAAATGAGGACAGGGGTGTGGGTCAAGGAGAAGGGATGCCAAGTTCGGACTT CACTACAGAGTAG)。用脂質(zhì)體法(LipoFectamine2000)將hFFAR轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，并用顯微鏡及CCK-8細胞計數(shù)法觀察hFFAR2過表達后對細胞數(shù)量的影響。實驗數(shù)據(jù)如圖2A-C顯微鏡觀察所示(放大200倍)，圖2A空白組的細胞示意圖；圖2B是過表達了 hFFAR2的Raw264.7的細胞示意圖；在冊1(2931'中過表達hFFAR2 24小時后，該細胞系中的細胞數(shù)量明顯減少。如圖2C所示，圖2C是過表達了 hFFAR2的Raw264.7的細胞與空白組OD值(450nm)的對比示意圖。通過CCK-8活細胞計數(shù)，在HEK293T中過表達hFFAR2后，該細胞系中的活細胞數(shù)量顯著減少，且各組活細胞定量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析用GraphPad Prism計算，有統(tǒng)計學意義，***/ 〈() QOl0上述結(jié)果顯示，hFFAR的過表達能夠顯著減少Raw264.7的活細胞數(shù)。實施例2: (I)，HEK293T人胚腎細胞系DMEMl 1995中加入10%的胎牛血清培養(yǎng)(均購自 Gibco 公司)。(2),用脂質(zhì)體法(LipoFectamine2000,購自 Invitrogen 公司)將 hFFAR表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細胞。(3)，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24小時后，用顯微鏡觀察細胞形態(tài)并拍照(Olympus DP71纖維觀測與拍照系統(tǒng))，放大倍數(shù):200倍。(4)，用CCK-8細胞計數(shù)試劑盒觀察hFFAR2過表達24小時后對細胞數(shù)量的影響(杭州碧云天生物技術(shù)研究所)。3，減少hFFAR2的表達能夠顯著增加HEK293T活細胞數(shù)。為了進一步觀察hFFAR2對細胞數(shù)的影響，我們在HEK293T中用小干擾RNA( siRNA)的技術(shù)，檢測了在細胞中減少hFFAR2的表達后，對其活細胞數(shù)量的影響。實驗結(jié)果如圖3A-C所示，圖3A是空白組 的示意圖；圖3B通過siRNA技術(shù)減少hFFAR2的表達后HEK293T活細胞示意圖；顯微鏡觀察顯示(放大200倍)，用siRNA干擾掉FFAR2的表達后24h后(siRNA序列:5' CCGAUAACCAGUUGGACGUtt 及 3' ACGUC CAACUGGUUAUCGGtg)，細胞數(shù)量明顯增力口。圖3C通過siRNA技術(shù)減少hFFAR2的表達后HEK293T細胞與空白組0D(450nm)值的對比圖，通過CCK-8活細胞計數(shù)，在HEK293T中減少hFFAR2后，該細胞系中的活細胞數(shù)量顯著增加，其中各組活細胞定量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析用GraphPad Prism計算，(97，具有統(tǒng)計學意義。 上述結(jié)果顯示，在所述過表達自由脂肪酸受體2的人胚腎細胞株HEK293T中，通過小分子核糖核酸介導的基因沉默技術(shù)減少人胚腎細胞株J1EK293T細胞株中的hFFAR2后，活體細胞數(shù)量增加。實施例3: (I),用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法(LipoFectamine2000,購自Invitrogen公司)，將針對人FFAR2特異的siRNA (購自上海吉凱生物技術(shù)有限公司公司)轉(zhuǎn)染到HEK293細胞中。
(2)，siRNA轉(zhuǎn)染24小時后，用顯微鏡觀察細胞形態(tài)并拍照(Olympus DP71纖維觀測與拍照系統(tǒng))，放大倍數(shù):200倍。(3)，用CCK-8細胞計數(shù)試劑盒(杭州碧云天生物技術(shù)研究所)觀察hFFAR2過表達24小時后對細胞數(shù)量的影響。4，hFFAR2在HEK293T細胞中過表達，能夠顯著抑制細胞線粒體膜電位。線粒體膜電位失調(diào)是細胞凋亡前期的重要標志之一。為了分析hFFAR2對細胞數(shù)影響的機制，進一步通過分析線粒體膜電位的方法，觀察了在HEK293T中過表達hFFAR2對線粒體膜電位的影響。如圖4所示，hFFAR2在HEK293T細胞中過表達前后細胞線粒體膜電位的變化對比圖；如圖4A-C所示，圖4A是空白組示意圖；圖4B是hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞線粒體膜電位示意圖；我們用線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1檢測試劑盒)檢測，用顯微鏡觀察顯示(放大200倍)，在過表達了 hFFAR的細胞中，線粒體膜電位失調(diào)細胞明顯增力口(綠色明顯增加)，線粒體膜電位正常明顯減少(紅色熒光明顯減少)。圖4C是hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞線粒體膜電位的變化與空白組的對比示意圖，在HEK293T中過表達hFFAR2后，同時通過熒光檢測酶標儀分析該細胞系中的紅色熒光與綠色熒光的比值，圖4C顯示，該比值顯著降低(比值低反應(yīng)細胞膜電位不正常)，并對各組線粒體膜電位活性定量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析用GraphPad Prism計算，衫沐p〈0.001。上述結(jié)果顯示，在所述過表達自由脂肪酸受體2的人胚腎細胞株HEK293T中，細胞線粒體膜電位降低，F(xiàn)FAR2的激活能夠顯著促進細胞膜電位的失調(diào)。實施例4: (I),用脂質(zhì)體法(LipoFectamine2000,購自 Invitrogen 公司)將 hFFAR表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細胞。(2)，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24小時后，用JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒(購自杭州碧云天生物技術(shù)研究所)檢測細胞膜電位變化；紅色代表膜電位正常，綠色代表膜電位已被破壞。(3),突光顯微鏡觀察細胞形態(tài)并拍照(Olympus DP71纖維觀測與拍照系統(tǒng))，放大倍數(shù):200倍。(4)，用熒光酶標(購自BioTec公司)儀檢測綠色及紅色熒光強弱，并計算紅光/綠光比值，計算線粒體活性。5，hFFAR2在HEK293T細胞中過表達，能夠顯著增加細胞凋亡。細胞膜狀態(tài)的變換是細胞凋亡的重要標志，凋亡的細胞呈現(xiàn)Annexin V或/與PI染色陽性。我們用Annexin V與PI染色，通過流式細胞術(shù)，觀察了在HEK293T中過表達hFFAR2后，對細胞凋亡的影 響。
如圖5所示，hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞數(shù)量變化示意圖；實驗結(jié)果如圖5A-B所示，圖5A空白組Annexin V及PI染色雙陽性的示意圖；圖5B是hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后細胞Annexin V及PI染色雙陽性的示意圖；流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，在過表達了 hFFAR的細胞中，Annexin V與PI雙陽性的細胞明顯增加。同時圖5C是hFFAR2在HEK293T細胞中過表達后Annexin V及PI染色雙陽性與空白組的統(tǒng)計學結(jié)果對比示意圖，圖5所示，凋亡細胞明顯增多，各組Annexin-V/PI陽性細胞比例的定量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析亦用GraphPad Prism計算，林p〈0.0l。上述結(jié)果顯示，F(xiàn)FAR2過表達能夠顯著促進細胞凋亡在所述過表達自由脂肪酸受體2的人胚腎細胞株HEK293T中，凋亡細胞增加，hFFAR2能夠顯著增加細胞凋亡。實施例5: (1),用脂質(zhì)體法(LipoFectamine2000,購自 Invitrogen 公司)將 hFFAR表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細胞。(2)，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24小時后，用Annexin-V/PI細胞凋亡檢測試劑盒(購自杭州碧云天生物技術(shù)研究所)按照說明書方法染各組細胞。(3)，染色后細胞用流式細胞儀(購自BD FACS CALIBUR)檢測。本發(fā)明公開了自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明顯示了在細胞中過表達FFAR2，能夠顯著增加凋亡細胞的數(shù)量。腫瘤的過度生長及遷移嚴重威脅著患者的生命，誘導腫瘤細胞凋亡是腫瘤治療領(lǐng)域的一個重要方向。FFAR2能夠顯著促進細胞凋亡，具有一定的腫瘤治療的潛在應(yīng)用價值。
權(quán)利要求
1.自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，自由脂肪酸受體2可以誘導細胞的凋亡。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，給予小鼠免疫細胞株Raw264.7自由脂肪酸受體2的配體醋酸鹽與丙酸鹽，小鼠免疫細胞株Raw264.7的活細胞數(shù)量減少。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述丙酮酸鹽和醋酸鹽分別為丙酮酸鈉和醋酸鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，在人胚腎細胞株HEK293T中過表達人的自由脂肪酸受體2，經(jīng)過一定時間后，所述人胚腎細胞株HEK293T細胞系中活體細胞減少。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，在所述過表達人的自由脂肪酸受體2的人胚腎細胞株HEK293T中，通過小分子核糖核酸介導的基因沉默技術(shù)減少人胚腎細胞株HEK293T細胞株中的人的自由脂肪酸受體2后，活體細胞數(shù)量增加。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，在所述過表達人的自由脂肪酸受體2的人胚腎細胞株HEK293T中，細胞線粒體膜電位降低。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，在所述過表達人的自由脂肪酸受 體2的人胚腎細胞株HEK293T中，凋亡細胞增加。
全文摘要
本發(fā)明公開了一個自由脂肪酸受體2(FFAR2)在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。通過給予自由脂肪酸受體2的配體醋酸鈉與丙酸鈉，發(fā)現(xiàn)該配體能夠顯著減少小鼠免疫細胞株Raw264.7的活細胞數(shù)量；通過在人胚腎細胞株HEK293T中過表達FFAR2基因，發(fā)現(xiàn)該細胞系中活細胞的數(shù)量顯著減少；進一步通過小分子核糖核酸介導的基因沉默技術(shù)(siRNA技術(shù))，減少HEK293T細胞株中的FFAR2后，細胞株中活細胞數(shù)量顯著增加；進一步通過線粒體膜電位檢測試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)，在過表達了FFAR2的HEK293T細胞中，線粒體膜電位顯著降低，提示該基因能夠誘導細胞凋亡；通過細胞凋亡檢測試劑盒(AnnexinV-PI)染色并通過流式細胞儀檢測后，結(jié)果提示在過表達了FFAR2的HEK293T細胞中凋亡細胞顯著增加。本發(fā)明公開自由脂肪酸受體2在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其在臨床上對血液系統(tǒng)及其它種類的腫瘤具有潛在的治療作用。
文檔編號A61K31/19GK103212061SQ20121001825
公開日2013年7月24日 申請日期2012年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月20日
發(fā)明者寧光, 石國軍, 顧衛(wèi)瓊, 楊明蘭, 章曉芳 申請人:上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院