專利名稱：雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物及制備方法及其用途的制作方法
雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物及制備方法及其用途技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于藥用真菌領(lǐng)域，尤其是指一種白耙齒菌菌質(zhì)提取物及制備方法及其用途。
背景技術(shù)：
白祀齒菌ZrjDejr Iacteus Fr.屬擔(dān)子菌綱多孔菌目齒菌科祀齒菌屬的一種真菌，別名白囊孔。該菌種保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號是CGMCC No. 1016。其子實體生于闊葉樹的枯立木和枯倒木上。形態(tài)特征擔(dān)子果(子實體)平伏，擴展，白色，軟革質(zhì)；有時倒生，呈復(fù)瓦狀疊生，扇形，有狹小的基部；蓋面乳白色， 有短絨毛，絹絲樣光澤，有環(huán)紋，邊緣薄，下彎，波狀至淺裂。菌肉白色。刺呈耙齒狀，短，不整齊，白色至黃白色，孢子橢圓形，平滑，無色，囊狀體棒形或紡錘形，有時披有結(jié)晶，主要分布于長白山林區(qū)和黑龍江、河北、山西、甘肅、江西、福建、云南和西藏等省區(qū)。
白耙齒菌的藥用在歷史上僅限于民間采集野生子實體，其子實體生于闊葉樹的枯立木和枯倒木上。比較難采集到，因此子實體比較稀缺，無法大量收集。
慢性腎小球腎炎是由多種原發(fā)性腎小球病理損害導(dǎo)致的，以蛋白尿、血尿、水腫、 高血壓為常見的臨床表現(xiàn)的一類疾病。是腎科常見病與多發(fā)病。其中絕大多數(shù)患者具有不同程度的腎功能損害，且呈進行性加重，漸進性的轉(zhuǎn)為腎功能衰竭。因而，及時有效地治療慢性腎小球腎炎是科研工作者的重要課題。
80年代-90年代，長春中醫(yī)學(xué)院宋啟印教授首次研究開發(fā)應(yīng)用白耙齒菌液體發(fā)酵的方法生產(chǎn)白耙齒菌多糖治療慢性腎小球腎炎，即目前市場上的中成藥“益腎康”膠囊。益腎康膠囊，主要成份是耙齒菌多糖的粗提物。內(nèi)容物為褐色至深褐色的粉末；味微酸澀。具有清利濕熱之功效。用于慢性腎小球腎炎屬下焦?jié)駸嶙C者。但患者服用偶見胃脘不適，口干，納差，惡心。
目前藥用真菌的生產(chǎn)一般有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種形式。國內(nèi)外較多應(yīng)用液體發(fā)酵生產(chǎn)是借鑒抗生素的生產(chǎn)工藝，應(yīng)用發(fā)酵罐優(yōu)點是有較高的機械化與自動化，生產(chǎn)規(guī)模大。但因藥用真菌自身一般不產(chǎn)生抗生素，或產(chǎn)生的抗生素抑菌作用較弱，不能對細菌等其他微生物產(chǎn)生很好的拮抗作用，因此在發(fā)酵過程中易污染雜菌而倒灌，造成重大損失。其生產(chǎn)設(shè)備投資巨大，耗能也較多，生產(chǎn)成本較高。
藥用真菌的固體發(fā)酵最早見于2000年前中藥“六神曲”和“半夏曲”的生產(chǎn)，是利用自然界的霉菌進行發(fā)酵，其作用是產(chǎn)生消食和胃的功能。其工藝一直沿用至今，但“六神曲”和“半夏曲”的發(fā)酵不是純種發(fā)酵，工藝不好控制。近幾年來隨著生物技術(shù)的發(fā)展，采用純種接種，建立科學(xué)可控的質(zhì)量監(jiān)控體系，其發(fā)酵過程的穩(wěn)定性得到了很好地解決。南京中醫(yī)藥大學(xué)莊毅教授于上世紀80年代研究以藥用真菌“槐耳robiniophila Murr. 為發(fā)酵菌種，在以農(nóng)副產(chǎn)品為營養(yǎng)基質(zhì)上進行固體發(fā)酵，其藥用菌質(zhì)稱”槐耳菌質(zhì)”。開發(fā)出具有抗腫瘤功效的新藥“槐耳沖劑”，同時提出藥用真菌新型雙向性固體發(fā)酵工程理論。藥用真菌新型雙向性固體發(fā)酵工程(以下簡稱“雙向發(fā)酵”)其原理為選定特定的發(fā)酵菌種，用3特定的中藥材作為藥性基質(zhì)，再用農(nóng)副產(chǎn)品作為營養(yǎng)基質(zhì)(合稱全性基質(zhì))，雙方共構(gòu)成一個發(fā)酵組合，在特定條件下進行雙向發(fā)酵，發(fā)酵產(chǎn)品成為藥性菌質(zhì)，它是生物技術(shù)的一個新起點。它可以改變原藥的性能、增強藥效及擴大適應(yīng)癥。發(fā)酵后的產(chǎn)物比進行發(fā)酵的兩種物質(zhì)單獨使用的藥效大，即“1+1 > 2”。
卞寒iiHordeum vulgare)為禾本科一年生草本植物的種子,既是食品又是藥品， 《本草綱目》記載“大麥味甘、性平、有去食療脹、消積進食、平胃止渴、消暑除熱、益氣調(diào)中、 寬胸大氣、補虛劣、壯血脈、益顏色、實五臟、化谷食之功”。現(xiàn)代研究證明，大麥茶含有人體所需的17種微量元素，19種以上氨基酸，富含多種維生素及不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)和膳食纖維。用以治食積不化，脘悶腹脹，泄瀉等脾胃虛弱之癥。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物及制備方法及其用途，以解決白耙齒菌液體培養(yǎng)提取物使患者產(chǎn)生胃脘不適、口干、納差、惡心等副作用的問題。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案是雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物的制備方法是(1)白耙齒菌以母種進行液體培養(yǎng)得到對數(shù)生長期的種子，將該種子在無菌條件下接種到有大麥培養(yǎng)基的種子瓶中；(2)種子瓶發(fā)酵培養(yǎng)在溫度22°C-26°C，空氣濕度65%-70%環(huán)境下發(fā)酵7-9天；(3)發(fā)酵瓶發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)在溫度22°C-26°C，空氣濕度65%-70%環(huán)境下發(fā)酵18-21 天，得到白耙齒菌的菌質(zhì)；(4)該菌質(zhì)以80°C 90°C熱水提取2 3次，第一次3小時，第二次2小時，第三次I小時，合并濾液，濃縮成60°C時測相對密度I. 05^1. 10的清膏，50°C 55°C減壓干燥，粉碎成細粉。
本發(fā)明所述的大麥培養(yǎng)基是將重量比為95%-97%的大麥粒浸泡，使含水量達到 50-55%，加入重量比1%-2%的石膏粉，重量比2%-3%的蔗糖。
通過雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物的制備方法得到的白耙齒菌菌質(zhì)提取物在制備治療慢性腎小球腎炎屬下焦?jié)駸嶙C者的藥物中應(yīng)用。
本發(fā)明利用大麥作為藥性基質(zhì)兼營養(yǎng)基質(zhì)(稱全性基質(zhì))，接種具有治療腎小球腎炎作用的白耙齒菌，雙方共構(gòu)成一個發(fā)酵組合，在特定條件下進行雙向發(fā)酵，發(fā)酵產(chǎn)品成為藥性菌質(zhì)。大麥可以提供白耙齒菌生長的營養(yǎng)成分，使白耙齒菌菌絲生長繁殖，得到具有治療腎小球腎炎的代謝物，同時通過白耙齒菌的生長和代謝，改變大麥原有的性能、增強健脾消食的功能，緩和白耙齒菌代謝物所致胃脘不適，口干，納差，惡心等副作用。
具體實施方式
本發(fā)明所述白祀齒菌ZrjDeJT Iacteus Fr,該菌種保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號是=CGMCC No. 1016。
白耙齒菌以母種進行液體培養(yǎng)得到對數(shù)生長期的種子的方法如下(I)一級斜面菌種培養(yǎng)基:葡萄糖 2-3%,馬鈴薯 20-25%,瓊脂 2. 2%，MgSO4 O. 2%, KH2PO4O. 3%, VB1 O. 05% ； 斜面菌種培養(yǎng)溫度25-27°C，120小時菌絲長滿斜面，放置冷藏柜2-4°C存?zhèn)溆茫?(2) 二級搖瓶菌種培養(yǎng)基:葡萄糖 2%，酵母浸膏 O. 5%, KH2PO4 O. 2%, NaH2SO4 O. 15%,蛋白胨 O. 2%, VB1 O. 01%, ρΗ6· 5 ；取菌絲粗壯茂密的斜面菌種，在無菌條件下按I :4接種量接種，于26土1°C搖床培養(yǎng) 4飛天；結(jié)果菌液澄明，黃色，有濃水果香味，菌球呈放射狀；鏡檢美蘭單染色菌絲著色深，粗壯，分枝多，鎖狀聯(lián)合明顯可見；此時期正是菌絲發(fā)育的旺盛期(對數(shù)生長期)，又無雜菌污染，可轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)。
實施例I本發(fā)明膠囊劑的制備(O白耙齒菌以母種進行液體培養(yǎng)得到對數(shù)生長期的種子，將該種子在無菌條件下接種到有大麥培養(yǎng)基的種子瓶中；所述的大麥培養(yǎng)基是將重量比為95%的大麥粒浸泡，使含水量達到50%，加入重量比1%的石膏粉，重量比2%的蔗糖；(2)種子瓶發(fā)酵培養(yǎng)在溫度26°C，空氣濕度70%環(huán)境下發(fā)酵7天；(3)發(fā)酵瓶發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)在溫度26°C，空氣濕度70%環(huán)境下發(fā)酵18天，得到白耙齒菌的菌質(zhì)；(4)該菌質(zhì)以90°C熱水提取3次，第一次3小時，第二次2小時，第三次I小時，合并濾液，濃縮成60°C時測相對密度I. 10的清膏，55°C減壓干燥，粉碎成細粉，加入制備膠囊劑的輔料，按常規(guī)方法制備膠囊劑。
實施例2本發(fā)明片劑的制備(O白耙齒菌以母種進行液體培養(yǎng)得到對數(shù)生長期的種子，將該種子在無菌條件下接種到有大麥培養(yǎng)基的種子瓶中；所述的大麥培養(yǎng)基是將重量比為96%的大麥粒浸泡，使含水量達到53%,加入重量比I. 5%的石膏粉,重量比2. 5%的鹿糖；(2)種子瓶發(fā)酵培養(yǎng)在溫度22°C，空氣濕度65%環(huán)境下發(fā)酵9天；(3)發(fā)酵瓶發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)在溫度22°C，空氣濕度65%環(huán)境下發(fā)酵21天，得到白耙齒菌的菌質(zhì)；(4)該菌質(zhì)以80°C熱水提取2次，第一次3小時，第二次2小時，合并濾液，濃縮成60°C 時測相對密度1.05的清膏，50°C減壓干燥，粉碎成細粉，加入制備片劑的輔料，按常規(guī)方法制備片劑。
實施例3本發(fā)明顆粒劑的制備(O白耙齒菌以母種進行液體培養(yǎng)得到對數(shù)生長期的種子，將該種子在無菌條件下接種到有大麥培養(yǎng)基的種子瓶中；所述的大麥培養(yǎng)基是將重量比為97%的大麥粒浸泡，使含水量達到55%,加入重量比2%的石膏粉,重量比3%的鹿糖；(2)種子瓶發(fā)酵培養(yǎng)在溫度24°C，空氣濕度67%環(huán)境下發(fā)酵8天；(3)發(fā)酵瓶發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)在溫度24°C，空氣濕度67%環(huán)境下發(fā)酵20天，得到白耙齒菌的菌質(zhì)；(4)該菌質(zhì)以85°C熱水提取3次，第一次3小時，第二次2小時，第三次I小時，合并濾液，濃縮成60°C時測相對密度I. 08的清膏，52°C減壓干燥，粉碎成細粉，加入制備顆粒劑的輔料，按常規(guī)方法制備顆粒劑。
本發(fā)明固體發(fā)酵白耙齒菌提取物制劑治療慢性腎小球腎炎的療效報告臨床資料凡具有慢性腎腎小球腎炎病史，24h尿蛋白定量O. 3 3g之間，Scr< 350umo/ L者列為研究對象，共觀察264例，其中住院病人120例，門診病人144 例，依其就診與住院次序，隨機分為治療組132例，對照組132例。排除標準(I)非妊娠婦女，非過敏體質(zhì)且對本藥無過敏者；(2)不合并心血管、肝、造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)疾病者；(3)非精神病患者；(4)堅持服藥治療者。本課題按上述標準選擇264例，治療組 132例，其中男性64例，女性68例，年齡在14 64歲之間，病程在4月 8年之間。 合并肌酐、尿素氮異常者56例；血色素降低者62例；高血壓者33例。對照組132例， 其中男性62例，女性70例，年齡在15 68歲之間，病程在6個月 7年之間。合并肌酐、尿素氮異常者44例；血色素降低者50例；高血壓者30例。兩組病例在統(tǒng)計學(xué)上無顯著差異。
治療方法基礎(chǔ)治療(I)控制感染。(2)控制血壓。(3)有酸中毒者予糾正酸中毒。
治療組服用雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物制成的膠囊劑，每次2粒，每日3次，30天為I個療程，治療3個療程統(tǒng)計療效。
對照組服用液體發(fā)酵制劑即益腎康膠囊(長春益腎康生物制藥有限公司生產(chǎn))每次2粒，每日3次，30天為I個療程，治療3個療程統(tǒng)計療效。
觀察指標主要癥狀變化包括腰膝酸軟，倦怠乏力，水腫，頭暈等。副作用出現(xiàn)情況包括胃脘不適，口干，納差，惡心等。實驗室指標治療前后做24h尿蛋白定量、 血肌酐、尿素氮、血紅蛋白等檢查。
統(tǒng)計學(xué)處理計量資料采用T檢驗，計數(shù)資料采用X2檢驗。
療效標準痊愈水腫等癥狀及體征完全消失，尿蛋白檢查持續(xù)陰性，或24h尿蛋白定量持續(xù)小于200mg，高倍鏡下尿紅細胞消失。尿沉渣計數(shù)正常，腎功能恢復(fù)正常。 顯效水腫等癥狀及體征基本消失，尿蛋白檢查持續(xù)減少50%以上，高倍鏡下尿紅細胞不超過3個，尿沉洛計數(shù)接近正常。腎功能正常或基本正常，與正常值相差不超過15%。有效水腫等癥狀與體征明顯好轉(zhuǎn)，尿蛋白檢查持續(xù)減少I個+或24h尿蛋白定量持續(xù)減少25%以上，高倍鏡下尿紅細胞不超過5個，腎功能正?；蛴懈纳啤o效臨床表現(xiàn)與上述實驗室檢查均無明顯改善或加重者。
治療結(jié)果I、兩組間療效比較本組264例，治療組132例，痊愈16例，顯效44例，有效 66例，無效6例，總有效率95. 4%。對照組132例，痊愈14例，顯效40例，有效 69例，無效9例，總有效率93. 1%。兩組總有效率比較P值大于O. 05，差異并未有非常顯著性意義。
2、兩組間治療前后實驗室指標變化情況見(表一)表2兩組患者治療如后實驗室指標變化6注與本組治療前相比* P< O. 01 * * P〈 O. 05與對照組治療后相比ΛΡ> O.053、副作用治療組用固體發(fā)酵制成的膠囊后出現(xiàn)3例胃脘不適，6例口干，2例出現(xiàn)納差，O例惡心癥狀。對照組液體發(fā)酵制成的膠囊(益腎康)40例胃脘不適，32例口干，20例出現(xiàn)納差，12例惡心癥狀。
結(jié)論雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物與液體發(fā)酵產(chǎn)物制劑均對腎小球腎炎有較好的療效，但液體發(fā)酵產(chǎn)物副作用較多，而雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物副作用較少，因此雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物制劑優(yōu)于液體發(fā)酵制劑。
權(quán)利要求
1.一種雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物，其特征在于它是由下列方法得到的(1)白耙齒菌以母種進行液體培養(yǎng)得到對數(shù)生長期的種子，將該種子在無菌條件下接種到有大麥培養(yǎng)基的種子瓶中；(2)種子瓶發(fā)酵培養(yǎng)在溫度22°C-26°C，空氣濕度65%-70%環(huán)境下發(fā)酵7-9天；(3)發(fā)酵瓶發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)在溫度22°C-26°C，空氣濕度65%-70%環(huán)境下發(fā)酵18-21 天，得到白耙齒菌的菌質(zhì)；(4)該菌質(zhì)以80°C 90°C熱水提取2 3次，第一次3小時，第二次2小時，第三次I小時，合并濾液，濃縮成60°C時測相對密度I. 05^1. 10的清膏，50°C 55°C減壓干燥，粉碎成細粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物，其特征在于所述的大麥培養(yǎng)基是將重量比為95%-97%的大麥粒浸泡，使含水量達到50-55%，加入重量比 1%_2%的石骨粉，重量比2%_3%的鹿糖。
3.如權(quán)利要求I所述的雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物的的制備方法，包括下列步驟(O白耙齒菌以母種進行液體培養(yǎng)得到對數(shù)生長期的種子，將該種子在無菌條件下接種到有大麥培養(yǎng)基的種子瓶中；(2)種子瓶發(fā)酵培養(yǎng)在溫度22°C-26°C，空氣濕度65%-70%環(huán)境下發(fā)酵7-9天；(3)發(fā)酵瓶發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)在溫度22°C-26°C，空氣濕度65%-70%環(huán)境下發(fā)酵18-21 天，得到白耙齒菌的菌質(zhì)；(4)該菌質(zhì)以80°C 90°C熱水提取2 3次，第一次3小時，第二次2小時，第三次I小時，合并濾液，濃縮成60°C時測相對密度I. 05^1. 10的清膏，50°C 55°C減壓干燥，粉碎成細粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物的制備方法，其特征在于所述的大麥培養(yǎng)基是將重量比為95%-97%的大麥粒浸泡，使含水量達到50-55%，加入重量比1%_2%的石膏粉,重量比2%-3%的鹿糖。
5.如權(quán)利要求I所述的雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物在制備治療慢性腎小球腎炎屬下焦?jié)駸嶙C者的藥物中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雙向性固體發(fā)酵白耙齒菌菌質(zhì)提取物及制備方法及其用途,屬于藥用真菌領(lǐng)域。白耙齒菌以母種進行液體培養(yǎng)得到對數(shù)生長期的種子，將該種子在無菌條件下接種到有大麥培養(yǎng)基的種子瓶中，進行種子瓶發(fā)酵培養(yǎng)、發(fā)酵瓶發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)以及提取。本發(fā)明具有治療腎小球腎炎的代謝物，同時通過白耙齒菌的生長和代謝，改變大麥原有的性能。
文檔編號A61K36/07GK102935095SQ20121046116
公開日2013年2月20日 申請日期2012年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月16日
發(fā)明者郭尚印 申請人:長春益腎康生物制藥有限公司