專利名稱：石岐外感茶在制備防治手足口病中藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用配制品，具體涉含來(lái)自植物的未確定結(jié)構(gòu)的藥物制劑。
背景技術(shù)：
手足口病(Hand-foot-mouthdisease, HFMD)是由多種腸道病毒引起的常見(jiàn)傳染病，以嬰幼兒發(fā)病為主。大多數(shù)患者癥狀輕微，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征。少數(shù)患者可并發(fā)無(wú)菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，個(gè)別重癥患者兒病情進(jìn)展快，已發(fā)生死亡。少年兒童和成人感染后多不發(fā)病，但能夠傳播病毒。手足口病的癥狀表現(xiàn)為:急性起病，發(fā)熱，手掌或腳掌部出現(xiàn)斑丘疹和皰疹，臀部或膝蓋也可出現(xiàn)皮疹。皮疹周圍有炎性紅暈，皰內(nèi)液體較少；口腔黏膜出現(xiàn)散在的皰疹，疼痛明顯。部分患兒可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、惡心、嘔吐和頭疼等癥狀。手足口病是全球性 傳染病，世界大部分地區(qū)均有此病流行的報(bào)道。1957年在新西蘭首次報(bào)道該病，1958年第一次分離出柯薩奇病毒，1959年提出并命名為手足口病。我國(guó)于1981年上海首次報(bào)道本病，此后，北京、河北、天津、福建、吉林、安徽等10幾個(gè)省份均有本病報(bào)道。1983年天津發(fā)生CoxA16引起的手足口病暴發(fā)，5-10月間發(fā)生了 7000余病例。1995年武漢病毒研究所從手足口病人中分離出EV71。2008年HFMD疫情在安徽省阜陽(yáng)市暴發(fā)，共發(fā)生HFMD病例4496例，死亡22例，其病原體為EV71。2010年全國(guó)報(bào)告1795336例患者，死亡888例，流行呈逐年增加的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著人類的健康和全球經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。引起手足口病的腸道病毒包括腸道病毒71型(EV71)和A組柯薩奇病毒(CoxA)、?？刹《?Echo)等某些血清型。EV71病毒顆粒為二十面體對(duì)稱的球形結(jié)構(gòu)，無(wú)包膜和突起，直徑大約在24 30nm。病毒顆粒的衣殼共包括60個(gè)亞單位，分別由4種衣殼蛋白(VP1-VP4)拼裝成五聚體樣結(jié)構(gòu)。4種結(jié)構(gòu)蛋白中，除VP4包埋在病毒顆粒外殼的內(nèi)側(cè)與病毒的核心緊密連接以外，其他3種結(jié)構(gòu)蛋白均暴露在病毒顆粒的表面，因而抗原決定簇基本上位于這三種蛋白上。病毒基因組為712 815kb核苷酸單股正鏈RNA，基因組中僅有一個(gè)開放閱讀框，編碼含2194個(gè)氨基酸的多聚蛋白，在其兩側(cè)為5'和3'非編碼區(qū)，在3'非編碼區(qū)的末端含有一個(gè)長(zhǎng)度可變的多聚腺苷酸尾巴(polyA)。該多聚蛋白可進(jìn)一步被水解成P1、P2、P3 3個(gè)前體蛋白。Pl前體蛋白編碼VP1、VP2、VP3、VP4 4個(gè)病毒外殼蛋白；P2和P3前體蛋白編碼7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，包括2A (特異性蛋白水解酶)、2B、2C、3A、VPg (5'蛋白水解酶)、3C (特異性蛋白水解酶)、3D (RNA多聚酶組分)。據(jù)推測(cè)，5'非編碼區(qū)可能與病毒株的致病性有關(guān)。目前防治手足口病的最有效手段是接種疫苗，但至今仍未開發(fā)出供臨床應(yīng)用的的手足口病病毒疫苗，從而加大了防治的難度。由于目前尚無(wú)特異、高效的抗病毒藥物，對(duì)癥處理是臨床的主要治療原則，利用更昔洛韋、病毒唑、干擾素進(jìn)行抗病毒治療，但最終還需靠人的自身免疫力治愈，且大多數(shù)的西藥都可能導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用。石岐外感茶(國(guó)藥準(zhǔn)字Z44020183)是一種治療流行性感冒的中藥制劑，其有效成分由以下原料藥制成:崗梅150g，鐵包金150g，蒲桃150g，臭屎茉莉60g，露兜簕150g。該茶劑具有疏風(fēng)清熱，解暑消食。用于外感引起的發(fā)熱頭痛，咳嗽，骨痛，食滯飽脹，喉干舌燥，對(duì)于治療流行性感冒有顯著效果，但目前尚未有該石岐外感茶有防治手足口病的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供石岐外感茶在制藥中的新用途。石岐外感茶在制藥中的新用途是:石岐外感茶在制備防治EV71型腸道病毒感染引起的手足口病中藥中的應(yīng)用。所述的石岐外感茶為國(guó)家正式批準(zhǔn)生產(chǎn)和上市的中成藥，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)為210970100，所含的有效成分由以下原料制得:崗梅150g、鐵包金150g、蒲桃150g、臭屎茉莉60g和露兜簕150g。上述石岐外感茶的制備方法由以下步驟組成:稱取崗梅、鐵包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，剪碎，打成粗粉，加8倍量蒸餾水煎煮兩次，每次lh，合并水煎液，濾過(guò)，濃縮至660ml，即得。本發(fā)明所涉及的石岐外感茶除了具有治療預(yù)防流行性感冒的作用外，還能抑制腸道病毒EV71在RD細(xì)胞上復(fù)制，減少RD細(xì)胞的病變，具有抗腸道病毒EV71的作用，用于防治手足口病的效果顯著。當(dāng)所述的石岐外感茶用于防治手足口病時(shí)，其用法如下:每次66毫升，一日2次，7天一個(gè)療程；兒童每次33毫升，一日2次，7天一個(gè)療程。為了公眾能更好地理解本發(fā)明的有益效果，下面將通過(guò)實(shí)施例和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡明。


圖1為石岐外感茶對(duì)RD細(xì)胞的細(xì)胞毒性示意圖，該圖是不同濃度藥物加入到RD細(xì)胞中培養(yǎng)60h后，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響結(jié)果圖。圖2為石岐外感茶抗腸道病毒EV71的作用示意圖，該圖是不同濃度藥物加入腸道病毒EV71侵染的RD細(xì)胞中培養(yǎng)60h后，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)藥物對(duì)腸道病毒EV71抑制的影響結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式I實(shí)驗(yàn)材料與方法1.1細(xì)胞、病毒RD細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)模式菌種收集中心(ATCC)，病毒EV71由廣州市兒童醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。藥物受試藥物:石岐外感茶，由中山市恒生藥業(yè)有限公司，批號(hào):20120311。所述受試藥物的具體制備方法由以下步驟組成:稱取崗梅150g、鐵包金150g、蒲桃150g、臭屎茉莉60g和露兜簕150g，剪碎，打成粗粉，加8倍量蒸餾水煎煮兩次，每次lh，合并水煎液，濾過(guò)，濃縮至660ml，即得。對(duì)照藥物:利巴韋林注射液，由廣州市白云山天心制藥股份有限公司，批號(hào):120201。
1.2實(shí)驗(yàn)儀器倒置顯微鏡(Nikon，型號(hào):TMS_F)、酶標(biāo)儀(B10-RAD，型號(hào):iMark)2實(shí)驗(yàn)方法2.1細(xì)胞培養(yǎng)370C，5% (體積比，以下相同)CO2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。使用含有10% (體積比，以下相同)FBSU00U/ml的青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基。細(xì)胞至90%匯合度后傳代，傳代比例 1/3-1/4。2.2病毒培養(yǎng)接種EV71病毒200ul/孔于已經(jīng)長(zhǎng)滿90%細(xì)胞的24孔板，置37°C，5%C02培養(yǎng)箱中，吸附lh，加入含1%FBS的維持液，次日換液，逐日觀察，待3/4細(xì)胞出現(xiàn)病變時(shí)，放在_80°C冰箱中凍存20min,自然解凍20min,反復(fù)3次，13000rpm, IOmin, 4°C離心,過(guò)濾膜，取上清液，每管0.5ml分裝于無(wú)菌離心管(1.5ml)中，冷凍保存于_80°C備用。2.3TCID50腸道病毒EV71感染性的測(cè)定2.3.1TCID50 的測(cè)定選擇經(jīng)24_48h培養(yǎng)后生長(zhǎng)旺盛、成層良好的RD細(xì)胞細(xì)胞I瓶，傾棄生長(zhǎng)液，加入Iml胰酶，37°C消化2-3min，用含10%FBS的DMEM生長(zhǎng)液分散細(xì)胞，使細(xì)胞胞懸液濃度為2X IO4個(gè)/孔。用移液器將細(xì)胞懸液加入96孔板中，每孔IOOul。將培養(yǎng)板置于37°C，5%C02溫箱中培養(yǎng)12 18小時(shí)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后備用；將腸道病毒EV71用含1%FBS的維持液作10倍稀釋系列成10個(gè)濃度，棄去培養(yǎng)板中的生長(zhǎng)液，每孔加入不同稀釋度的病毒液IOOul，每個(gè)稀釋度6孔。6個(gè)對(duì)照孔加入維持液IOOul，37°C吸附lh，然后各孔再加入維持液IOOul，輕輕搖勻，37°C，5%C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，逐日觀察記錄各孔細(xì)胞病變情況。2.3.2結(jié)果統(tǒng)計(jì)細(xì)胞全部出現(xiàn)CPE判為(++++) ；50%-75%細(xì)胞出現(xiàn)CPE為(+++) ;25%_50%細(xì)胞出現(xiàn)CPE (++);25%以內(nèi)細(xì)胞出現(xiàn)CPE為( + );無(wú)CPE為(一)。并根據(jù)Reed和Muench方法對(duì)病毒滴度進(jìn)行計(jì)算，最終獲得TCID5(i/100微升；距離比=(高于50%病變率的百分?jǐn)?shù)-50%)/ (高于50%病變率的百分?jǐn)?shù)-低于50%的病變率)LogTCID5tl=距離比*稀釋度對(duì)數(shù)之間的差+高于50%病變率的稀釋度的對(duì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表I。表I腸道病毒EV71接種RD細(xì)胞的TCID5tl滴度統(tǒng)計(jì)
權(quán)利要求
1.石岐外感氽在制備防治EV71型腸道病毒感染引起的手足口病中藥中的應(yīng)用；所述的石岐外感茶所含的有效成分由以下原料制得: 崗梅150g、鐵包金150g、蒲桃150g、臭屎茉莉60g和露兜簕150g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的石岐外感茶的制備方法由以下步驟組成: 稱取崗梅、鐵包金 、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，剪碎，打成粗粉，加8倍量蒸餾水煎煮兩次，每次lh，合并水煎液，濾過(guò)，濃縮至660ml，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及石岐外感茶在制備防治EV71型腸道病毒感染引起的手足口病中藥中的應(yīng)用。所述的石岐外感茶為國(guó)家正式批準(zhǔn)生產(chǎn)和上市的中成藥，其國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)為Z44020183，它的藥物組方為崗梅150g，鐵包金150g，蒲桃150g，臭屎茉莉60g，露兜簕150g。本發(fā)明所涉及的石岐外感茶能抑制腸道病毒EV71在RD細(xì)胞上復(fù)制，減少RD細(xì)胞的病變，具有抗腸道病毒EV71的作用，用于防治手足口病的效果顯著。
文檔編號(hào)A61K36/88GK103070990SQ20131001424
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2013年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月15日
發(fā)明者李耿, 賴小平, 許仕杰, 姚海燕 申請(qǐng)人:東莞廣州中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥數(shù)理工程研究院