一種羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，包括以下步驟：將處理過的羊胎盤與pH為2.5-3.5的純化水按照質(zhì)量比為1∶（1-3）的比例混合，置于縫隙為8-9μm的膠體磨中研磨得勻漿液，用鹽酸調(diào)節(jié)勻漿液pH為2.5-3.5，再進(jìn)行研磨，得羊胎盤勻漿；加熱羊胎盤勻漿至78-82℃，保溫時間≥10min，冷卻后用NaOH調(diào)節(jié)羊胎盤勻漿pH為6.5-6.8，然后在4000-6000r/min下離心30-45min，取上清液；用6000道爾頓的超濾膜對上清液進(jìn)行超濾，得羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液。本發(fā)明方法簡單便捷，可直接從羊胎盤中提取大量的轉(zhuǎn)移因子，并且能夠在常溫下保存，給使用和運輸節(jié)約大量的時間和金錢。
【專利說明】一種羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法?！颈尘凹夹g(shù)】 [0002]隨著現(xiàn)代化養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，目前病毒性疾病已成為困擾養(yǎng)殖戶的一大難題，同時，由于各種原因，有時免疫往往會失敗，爆發(fā)非典型性傳染病，給診斷和治療帶來一定困難，依賴抗生素治療會造成的耐藥菌株的增加和交叉感染的產(chǎn)生，以及藥物殘留的嚴(yán)重爆發(fā)。轉(zhuǎn)移因子作為免疫調(diào)節(jié)劑，在防治疾病方面發(fā)揮重要作用，提高免疫后的免疫效果，有效提高機(jī)體的抗病能力，是未來獸類免疫藥物的發(fā)展方向。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，包括以下步驟:
(1)將處理過的羊胎盤與pH為2.5-3.5的純化水按照質(zhì)量比為1: (1-3)的比例進(jìn)行混合，置于縫隙為8-9Mm的膠體磨中研磨得勻漿液，用鹽酸調(diào)節(jié)勻漿液pH為2.5-3.5，再進(jìn)行研磨，得羊胎盤勻漿；
(2)加熱羊胎盤勻漿至78-82°C，保溫時間不小于lOmin，冷卻后用NaOH調(diào)節(jié)羊胎盤勻漿pH為6.5-6.8，然后在4000-6000r/min下離心30_45min，取上清液；
(3)用6000道爾頓的超濾膜對上清液進(jìn)行超濾，得羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液。
[0005]上述方法中，步驟(I)所述羊胎盤處理方法為:將冷凍健康的新鮮羊胎盤置于純化水中融化，水溫< 40°C，再用純化水沖洗至無明顯血色，控干水分，剝離脂肪、筋膜及結(jié)締組織后，用純化水漂洗，控干水分。
[0006]較好的，步驟(I)中純化水的pH用鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)；羊胎盤和純化水的質(zhì)量比為
I: 1
[0007]上述方法步驟(2)中所述NaOH為10wt%的NaOH水溶液，所述加熱在水浴罐中進(jìn)行，冷卻為水浴冷卻，冷卻溫度至25°C。
[0008]本發(fā)明方法簡單便捷，可直接從羊胎盤中提取大量的轉(zhuǎn)移因子，并且能夠在常溫下保存，給使用和運輸節(jié)約大量的時間和金錢。
【具體實施方式】
[0009]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。
[0010]實施例1
(1)取5kg冷凍的新鮮羊胎盤置于40°C純化水中融化，再用純化水沖洗至無明顯血色，控干水分，剝離脂肪、筋膜及結(jié)締組織后，用純化水漂洗3次，控干水分；
(2)將處理過的羊胎盤與pH為3.5的純化水按照質(zhì)量比為1: 3的比例進(jìn)行混合，置于縫隙為9Mm的膠體磨中研磨得勻漿液，用30%鹽酸(v/v)調(diào)節(jié)勻漿液pH為3.5，再進(jìn)行研磨一次，得羊胎盤勻漿；
(3)在水浴罐中加熱羊胎盤勻漿至82°C，保溫時間lOmin，冷卻后用質(zhì)量濃度為10%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)羊胎盤勻漿pH為6.8，然后在6000r/min下離心30min，棄去沉淀，取上清液；
(4)用6000道爾頓的超濾膜對上清液進(jìn)行超濾，得羊胎盤溶液。所得羊胎盤溶液的濃度為 18mg/ml。
[0011]實施例2
(1)取IOkg冷凍的新鮮羊胎盤置于30°C純化水中融化，再用純化水沖洗至無明顯血色，控干水分，剝離脂肪、筋膜及結(jié)締組織后，用純化水漂洗4次，控干水分；
(2)將處理過的羊胎盤與pH為2.5的純化水按照質(zhì)量比為1:1的比例進(jìn)行混合，置于縫隙為SMffl的膠體磨中研磨得勻漿液，用20%鹽酸(v/v)調(diào)節(jié)勻漿液pH為2.5，再進(jìn)行研磨一次，得羊胎盤勻漿；
(3)在水浴罐中加熱羊胎盤勻漿至78°C，保溫時間20min，冷卻后用質(zhì)量濃度為10%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)羊胎盤勻漿pH為6.5，然后在4000r/min下離心45min，棄去沉淀，取上清液；
(4)用6000道爾頓的超濾膜對上清液進(jìn)行超濾,得羊胎盤溶液,該溶液濃度為25mg/ml 。
[0012]實施例3
(1)取8kg冷凍的新鮮羊胎盤置于35°C純化水中融化，再用純化水沖洗至無明顯血色，控干水分，剝離脂肪、筋膜及結(jié)締組織后，用純化水漂洗3次，控干水分；
(2)將處理過的羊胎盤與pH為3.0的純化水按照質(zhì)量比為1: 2的比例進(jìn)行混合，置于縫隙為8.5Mm的膠體磨中研磨得勻衆(zhòng)液,用25%鹽酸(v/v)調(diào)節(jié)勻衆(zhòng)液pH為3.0,再進(jìn)行研磨一次，得羊胎盤勻漿；
(3)在水浴罐中加熱羊胎盤勻漿至80°C，保溫時間18min，冷卻后用NaOH固體調(diào)節(jié)羊胎盤勻衆(zhòng)pH為6.7,然后在5000r/min下離心40min,棄去沉淀,取上清液；
(4)用6000道爾頓的超濾膜對上清液進(jìn)行超濾,得羊胎盤溶液,該溶液濃度為20mg/
ml ο
[0013]利用福林酚測定法對實施例1所得羊胎盤溶液進(jìn)行檢測，確定羊胎盤溶液中轉(zhuǎn)移因子含量，具體步驟如下:
試劑:堿性銅試液:取氫氧化鈉IOg,碳酸鈉50g，加水400ml使溶解,作為甲液；取酒石酸鉀0.5g,加水50ml使溶解,另取硫酸銅0.25g,加水30ml使溶解,將兩液混合,作為乙液。臨用前，合并兩液，并加水至500ml。
[0014]操作方法:(I)對照品溶液的制備取牛血清白蛋白對照品，加水制成每Iml中含
0.3mg的溶液；
(2)供試品溶液的制備:取實施例1所得羊胎盤溶液，稀釋50倍得供試品溶液；
(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密量取對照品溶液0.0ml,0.1mU0.3ml,0.5ml,0.7ml,0.9ml，分別置具塞試管中(分別命名為0-5號管)，各加水至1.0ml，再分別加入堿性銅試液1.0ml,搖勻，各加入福林酚試液(取福林試液中的貯備液I — 16)4.0ml，立即混勻，置55°C水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘，置冷水浴中10分鐘，在650nm的波長處測定吸收度；同時以O(shè)號管作為空白。以吸收度為縱坐標(biāo)，對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(4)測定法:精密量取供試品溶液1.0ml， 照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入堿性銅試液”起，依法測定，自標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得供試品溶液的濃度，并乘以稀釋倍數(shù)，得羊胎盤溶液濃度為18mg/ml。
【權(quán)利要求】
1.一種羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將處理過的羊胎盤與pH為2.5-3.5的純化水按照質(zhì)量比為1: (1-3)的比例進(jìn)行混合，置于縫隙為8-9Mm的膠體磨中研磨得勻漿液，用鹽酸調(diào)節(jié)勻漿液pH為2.5-3.5，再進(jìn)行研磨，得羊胎盤勻漿； (2)加熱羊胎盤勻漿至78-82°C，保溫時間>lOmin，冷卻后用NaOH調(diào)節(jié)羊胎盤勻漿pH為6.5-6.8，然后在4000-6000r/min下離心30_45min，取上清液； (3)用6000道爾頓的超濾膜對上清液進(jìn)行超濾，得羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，其特征在于，步驟(I)所述羊胎盤處理方法為:將冷凍健康的新鮮羊胎盤置于純化水中融化，水溫< 40°C，再用純化水沖洗至無明顯血色，控干水分，剝離脂肪、筋膜及結(jié)締組織后，用純化水漂洗，控干水分。
3.如權(quán)利要求1所述的羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，其特征在于，步驟(I)中純化水的PH用鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)；羊胎盤和純化水的質(zhì)量比為1:1。
4.如權(quán)利要求1所述的羊胎盤轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述NaOH為10wt%的NaOH水溶液，所述加熱在水浴罐中進(jìn)行，冷卻為水浴冷卻，冷卻溫度至25。。。
【文檔編號】A61K35/50GK103463131SQ201310434286
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】楊春輝, 李靈娟, 柴保國, 呂鳳霞, 張軍強(qiáng) 申請人:河南牧翔動物藥業(yè)有限公司