葶藶子脂肪油在制備治療止咳祛痰平喘藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了葶藶子脂肪油在制備治止療咳祛痰平喘藥物中的應用，所述葶藶子脂肪油用于制備治療止咳祛痰平喘藥物。與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：①通過實驗表明：葶藶子脂肪油組分能夠明顯延長咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數，提示其具有止咳作用；葶藶子脂肪油組分能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，提示其具有祛痰作用；此外，葶藶子脂肪油組分能明顯延長豚鼠哮喘反應潛伏期，提示葶藶子脂肪油組分具有平喘作用，從而開辟了葶藶子脂肪油藥用新用途；②傳統(tǒng)中藥一般采用水煎煮方法，不僅耗時、費力，而且人們服用、攜帶都不太方便；而用葶藶子脂肪油不僅用量少、服用方便，而且有效解決呼吸道相關疾病的用藥問題，臨床意義巨大。
【專利說明】葶藶子脂肪油在制備治療止咳祛痰平喘藥物中的應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然植物的應用，具體涉及葶藶子脂肪油在制備治療止咳祛痰平喘藥 物中的應用。

【背景技術】
[0002] 葶藶子為十字花科植物獨行菜或播娘蒿 (L.)WebbexPrantl的干燥成熟的種子，前者稱為北葶藶子；后者稱為 南葶藶子。始載于《神農本草經》，味辛苦，性大寒，歸肺、膀胱經。為傳統(tǒng)常用中藥，具有瀉 肺平喘、利水消腫、強心之功效。常用于治療痰涎壅盛，喘息不得平臥、水腫、懸飲，胸腹積 水，小便不利等?，F代藥理研究表明，葶藶子水提液能明顯改善心衰大鼠的鈉水潴留，且具 有顯著的利尿作用。其中，以葶藶子為主藥的復方葶藶子膠囊具有一定的祛痰作用，并且對 氨霧刺激引起的小鼠咳嗽反應也具有明顯的止咳作用，其作用隨劑量的增大而增強。此外， 有文獻報道葶藶子具有一定抗氧化活性、調節(jié)血脂等作用。但至今尚未有關于葶藶子脂肪 油活性方面的研究報道。
[0003] 葶藶子在我國大部分省區(qū)均有栽培，資源非常豐富，其種子產量較大，在我國一直 被作為傳統(tǒng)中藥，臨床上常用于治療多種疾病，其治病的物質基礎是含有獨特活性成分決 定的。葶藶子所含有的化學成分種類較多，現已從獨行菜和播娘蒿中分離得到強心苷類、異 硫氰酸和硫苷類、脂肪油類、生物堿類、黃酮類、酚酸類、香豆素類等化學成分，現代藥理研 究表明葶藶子、利尿，調血脂等作用，但至今尚未有關于葶藶子發(fā)揮止咳祛痰平喘作用的有 效部位及有效成分的研究報道，沒有報道明確葶藶子化學成分中哪種或哪類具有止咳祛痰 平喘的作用，因而，目前葶藶子在止咳祛痰平喘用藥時一般采用水煎煮方法，不僅耗時、費 力，而且服用、攜帶都不太方便，給患者用藥帶來了諸多不便。


【發(fā)明內容】

[0004] 針對現有技術中存在的因沒有明確葶藶子中哪種或哪類化學成分具有止咳、祛 痰，平喘的作用給患者用藥帶來的諸多不便的問題，本發(fā)明提供葶藶子脂肪油在制備治療 止咳祛痰平喘藥物中的應用，明確表明：葶藶子化學成分中脂肪油組分具有較好的止咳祛 痰平喘的作用，方便葶藶子在臨床治療疾病中的應用。
[0005] 為實現上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案： 葶藶子脂肪油在制備止咳祛痰平喘藥物中的應用，所述葶藶子脂肪油用于制備治療止 咳祛痰平喘藥物。
[0006] 所述葶藶子脂肪油是將稱量后的葶藶子經粉碎機粉碎至50-70目，粉碎后的葶藶 子置于容器中，然后向容器中加入葶藶子重量8-12倍的石油醚，在溫度為60-90°C下回流 提取兩次，每次回流提取〇. 4-0. 6小時，提取結束后，提取液用慢速濾紙抽濾，將濾液用旋 轉蒸發(fā)器減壓回收溶劑，將油樣旋蒸至恒重，即得到葶藶子脂肪油；所述葶藶子脂肪油用于 制備治療止咳祛痰平喘藥物。
[0007] 本發(fā)明采用水煎煮提取法結合萃取、醇沉、大孔吸附樹脂（DiaionHP-20大孔吸附 樹脂）等技術，將葶藶子水煎液拆分為成分之間互不交叉的6個部位：揮發(fā)油組分、石油醚 萃取組分(脂肪油組分)、醇沉組分（多糖組分)、20%乙醇洗脫組分、80%乙醇洗脫組分、水洗 脫組分，對各部位進行止咳祛痰平喘活性的篩選，發(fā)現脂肪油組分具有較好的止咳祛痰平 喘作用，因此，對其止咳祛痰平喘作用進行進一步的探討。
[0008] 本發(fā)明采用氨水誘咳法、小鼠酚紅排泌法，豚鼠噴霧致喘法，觀察葶藶子脂肪油的 止咳、祛痰、平喘作用；實驗結果表明：葶藶子脂肪油能夠明顯延長小鼠咳嗽潛伏期、減少 咳嗽次數，提示其具有止咳作用；葶藶子脂肪油組分能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，提示 其具有祛痰作用；葶藶子脂肪油組分能明顯延長豚鼠哮喘反應潛伏期，提示葶藶子脂肪油 組分具有平喘作用；從而明確了葶藶子脂肪油組分具有止咳祛痰平喘的作用。
[0009] 與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：①本發(fā)明葶藶子脂肪油制備方法簡單、方 便、成本低，穩(wěn)定可靠，并經多次以上試驗，均取得了相同或相近似的結果；②通過實驗表 明：葶藶子脂肪油組分能夠明顯延長咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數，表明其具有止咳作用；葶 藶子脂肪油組分能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，表明其具有祛痰作用；此外，葶藶子脂肪 油組分能明顯延長豚鼠哮喘反應潛伏期，表明葶藶子脂肪油組分具有平喘作用，從而開辟 了葶藶子脂肪油藥用新用途；③傳統(tǒng)中藥一般采用水煎煮方法，不僅耗時、費力，而且人們 服用、攜帶都不太方便；而用葶藶子脂肪油不僅用量少、服用方便，而且有效解決呼吸道相 關疾病的用藥問題，臨床意義巨大，具有較好的開發(fā)前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010] 圖1為實施例1中葶藶子各組分拆分的工藝流程圖。
[0011] 圖2為實施例1中水洗脫組分、20%、80%乙醇洗脫組分樣本聚類分析圖。
[0012] 圖3為實施例1中水洗脫組分、20%、80%乙醇洗脫組分樣本主成分分析圖。
[0013] 圖4為實施例1中水洗脫組分、20%、80%乙醇洗脫組分樣本正交偏最小二乘法分析 圖。
[0014] 圖5為實施例1中脂肪油成分的總離子流圖。

【具體實施方式】
[0015] 實施例1 本實施例所用的材料與儀器： 1.實驗材料 I. 1動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重18_22g ;豚鼠，雌雄各半，體重180-220g ;許可證號：scxk 魯20130001 (由山東魯抗醫(yī)藥股份公司質檢中心提供）。飼養(yǎng)于18~22°C清潔級動物實驗 內，自由飲食、飲水。
[0016] 1.2藥物與試劑 南葶藶子(購于鄭州市中藥材市場，經鑒定為十字花科植物播娘蒿 Descurainiasophia(L) Webb, ex Prantl.的干燥種子）由河南中醫(yī)學院董誠明教授鑒 定；磷酸組胺，生產批號A0165,上?？笊锛夹g有限公司提供；氯化乙酰膽堿，生產批號 G8320,北京索萊寶科技有限公司提供；氨水，分析純，批號：20111013,煙臺市雙雙化工有 限公司提供。
[0017] 1.3主要儀器 AgiIent7890/7000B三重串聯(lián)四級桿氣質聯(lián)用儀(美國安捷倫公司）、AB204-N型萬 分之一電子天平(河南愛博特科技發(fā)展有限公司）、Q-250A3粉碎機(瑞達國際)、SB-1000 型旋轉蒸發(fā)器(上海愛朗儀器有限公司）、Bio Mate 3S紫外分光光度計（Thermo Fisher Scientific)、YLS-8A多功能誘咳引喘儀（濟南益延科技發(fā)展有限公司）、SK6200H型超聲 波清洗器(上?？茖С晝x器有限公司）、DFZ-3型真空干燥箱（上海醫(yī)用恒溫設備有限公 司）、DRT-ZN型電熱套(鄭州長城科工貿有限公司）、冷凝裝置（四川省隆昌玻璃儀器廠)、 ChemPattern軟件（科邁恩北京科技有限公司）。
[0018] 本實施例采用水煎煮提取法結合萃取、醇沉、大孔吸附樹脂（DiaionHP-20大孔吸 附樹脂）等技術，將葶藶子水煎液拆分為成分之間互不交叉的6個部位：揮發(fā)油組分、石油 醚萃取組分(脂肪油組分)、醇沉組分（多糖組分)、20%乙醇洗脫組分、80%乙醇洗脫組分、水 洗脫組分，工藝流程如圖1所示。
[0019] 本實施例對葶藶子各組分所含成分互不交叉研究：因脂肪油組分、揮發(fā)油組分、多 糖組分與水溶性組分之間成分不可能交叉，有可能交叉的是水洗脫組分、20%、80%乙醇洗脫 組分，因此，將組分的HPLC-DAD數據導入ChemPattern軟件，對有可能交叉的組分進行了互 補交叉研究。
[0020] HPLC-DAD數據聚類分析：將制備好的8批次供試品按葶藶子水煎液HPLC-DAD液 相條件進樣分析，聚類分析結果分為3大類，樣本1?8號為一類、9?17號為一類、18? 24號為一類。驗證了水洗脫組分、20%、80%乙醇洗脫組分各聚一類，互不交叉，分析結果如 圖2所示。
[0021] HPLC-DAD數據主成分分析：將制備好的8批次供試品按葶藶子水煎液按HPLC-DAD液相條件進樣分析，記錄IOOmin色譜圖，經ChemPattern軟件處理分析，結果如圖3所 /Jn〇
[0022] HPLC-DAD數據正交偏最小二乘法：在前期分析的基礎上，又進行了正交偏最小二 乘法的分析，得到結果，見圖4,從LV1-LV2-LV3散點圖發(fā)現，樣本可明顯分為3區(qū)域，樣本 1?8號構成區(qū)域I、9?17號構成區(qū)域II、18?24號構成區(qū)域III。驗證了水洗脫組分、 20%、80%乙醇洗脫組分互不交叉，結果如圖4所示。
[0023] 對各部位進行止咳祛痰平喘作用的篩選，發(fā)現脂肪油組分具有較好的止咳祛痰平 喘作用，因此，對葶藶子脂肪油的止咳祛痰平喘作用進行進一步的探討。
[0024] 本實施例葶藶子脂肪油是通過稱量500g葶藶子，經粉碎機將稱量后的葶藶子粉 碎至60目，粉碎后的葶藶子置于容器中，然后向容器中加入葶藶子重量10倍的石油醚，在 溫度為90°C下回流提取兩次，每次回流提取0. 5小時，提取結束后，提取液用慢速濾紙抽 濾，將濾液用旋轉蒸發(fā)器減壓回收溶劑，將油樣旋蒸至恒重，即得到葶藶子脂肪油；將所制 得的葶藶子脂肪油用于制備治療止咳祛痰平喘藥物。
[0025] 本實施例氨水刺激引咳實驗： 昆明種小鼠，雌雄各半，體重18_22g;許可證號：scxk魯20130001 (由山東魯抗醫(yī)藥股 份公司質檢中心提供）；飼養(yǎng)于18~22°C清潔級動物實驗內，自由飲食、飲水。
[0026] 取小鼠逐個放于玻璃罩內，以25%氨水噴霧引咳15s，觀察小鼠從噴霧開始到出現 腹肌收縮張嘴的時間，I. 5min內不出現咳嗽者棄去。挑選敏感昆明種小鼠20只，雌雄各半， 按體重和性別隨機分為2組，每組10只，分別為空白對照組、葶藶子脂肪油組?？瞻讓φ战M 給予同體積蒸餾水，葶藶子脂肪油組給藥劑量按人和小鼠20倍等效劑量折算，給藥體積為 1.0ml/100g。每日給藥1次，連續(xù)7天。給藥期間自由進食、飲水。于末次給藥后30min將 小鼠放入玻璃罩內，以25%氨氣噴霧引咳15s，以小鼠腹肌收或縮胸，同時張大嘴為咳嗽指 標，觀察各組小鼠自噴霧開始至出現咳嗽的潛伏期及2min內的咳嗽次數。
[0027] 本實施例葶藶子脂肪油對小鼠氨水引咳實驗的影響： 與空白對照組比較，葶藶子脂肪油組能夠明顯延長咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數，均有顯 著性差異（P〈〇. 01，P〈〇. 05)，表明葶藶子脂肪油具有止咳作用。結果見表1。
[0028] 表1葶藶子脂肪油組對小鼠氨水引咳實驗的影響（^±s，n=10)

【權利要求】
1. 葶藶子脂肪油在制備治療止咳祛痰平喘藥物中的應用，其特征在于：所述葶藶子脂 肪油用于制備治療止咳祛痰平喘藥物。
2. 根據權利要求1所述的葶藶子脂肪油在制備治療止咳祛痰平喘藥物中的應用，其特 征在于：所述葶藶子脂肪油是將稱量后的葶藶子經粉碎機粉碎至50-70目，粉碎后的葶藶 子置于容器中，然后向容器中加入葶藶子重量8-12倍的石油醚，在溫度為60-90°C下回流 提取兩次，每次回流提取〇. 4-0. 6小時，提取結束后，提取液用濾紙抽濾，將濾液用旋轉蒸 發(fā)器減壓回收溶劑，將油樣旋蒸至恒重，即得到葶藶子脂肪油；所述葶藶子脂肪油用于制備 治療止咳祛痰平喘藥物。
【文檔編號】A61P11/10GK104306424SQ201410349621
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年7月22日 優(yōu)先權日:2014年7月22日
【發(fā)明者】鄭曉珂, 赫金麗, 弓建紅, 張明輝, 張國順, 張娜, 袁培培, 李玲玲, 孫亞萍, 王小蘭, 馮衛(wèi)生, 匡海學 申請人:河南中醫(yī)學院, 黑龍江中醫(yī)藥大學