一種聚乙二醇干擾素偶聯(lián)物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種聚乙二醇干擾素偶聯(lián)物，其制備方法，以及含有治療有效量的該干擾素偶聯(lián)物的藥物組合物，及其在制備抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)藥物中的用途。
【專利說明】一種聚乙二醇干擾素偶聯(lián)物
[0001] 本申請是申請?zhí)枮?01280002760. 5,申請日為2012年5月23日，發(fā)明名稱為"一 種聚乙二醇干擾素偶聯(lián)物"的中國專利申請的分案申請。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及一種聚乙二醇干擾素偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物通過一種新穎的生物蛋白分子 的聚乙二醇修飾技術(shù)合成，具有抗病毒感染、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)活性，本發(fā)明的應(yīng) 用領(lǐng)域涉及生物化學(xué)、藥物化學(xué)以及人類疾病的治療。

【背景技術(shù)】
[0003] 干擾素（Interferon)是一組具有多種功能的活性蛋白質(zhì)，是一類重要的家族性 細(xì)胞因子，具有廣譜的抗病毒、抗細(xì)胞增殖、和免疫調(diào)節(jié)作用。哺乳動物的干擾素可以分為 α、β、Υ、ω等幾種類型，其中α干擾素又可分十余種亞型，經(jīng)大量臨床研究證明α型干 擾素是一種重要的抗病毒和抗腫瘤治療藥物。目前我國在臨床使用最廣泛的主要是重組人 干擾素 a lb、a 2b和a 2a。另外，美國Amgen公司根據(jù)13種α型干擾素的基因序列同源 性，設(shè)計(jì)出的一種全新的蛋白質(zhì)工程藥物干復(fù)津（INFERGEN?，IFN-Con-1)于1997年 經(jīng)FDA批準(zhǔn)上市用于治療丙型肝炎，其病毒活性是a 2b干擾素的5?10倍。
[0004] 但是，一般來說，許多有生物技術(shù)（如基因重組）表達(dá)所得的產(chǎn)品，包括干擾素，都 是通過非腸道給藥途徑而進(jìn)入生物體內(nèi)發(fā)揮其藥效作用。此類由非腸道給藥的生物大分子 藥物產(chǎn)品通常存在下面的一些問題：（1)生物大分子藥物往往具有致敏性反應(yīng)，生物體內(nèi) 產(chǎn)生的抗體會對生物體造成嚴(yán)重的傷害并影響治療的進(jìn)行；(2)生物大分子藥物本身因受 到抗體的影響或因蛋白分解酶而引起的代謝作用，致使其生物半衰期大為縮短；（3)生物 大分子的穩(wěn)定性差，保存困難。所以，無論是干擾素 alb、a 2b和a 2a還是干復(fù)津，作為蛋 白質(zhì)藥物，由于穩(wěn)定性差，血漿清除率高，體內(nèi)半衰期短，易產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)等，在臨床治 療中受到很大的限制，這些缺點(diǎn)造成的結(jié)果是：需頻繁注射干擾素才能達(dá)到有效的血漿治 療濃度；而且，每次注射后均會導(dǎo)致血液濃度的較大波動，形成藥物濃度的峰值與谷值。這 樣就可能增加了治療費(fèi)用以及給藥不便和不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，人們試圖采用各種藥物 傳遞技術(shù)（Drug Delivery Technology),來提高蛋白質(zhì)藥物的療效。而目前在藥物傳遞技 術(shù)中研究最為廣泛的是聚乙二醇修飾技術(shù)（PEGN0L0GY)。
[0005] 1980年，Davis等人在美國專利4, 179, 337中公開了利用單一分子不同聚合度 的聚乙二醇對蛋白藥物進(jìn)行的化學(xué)修飾，在保持藥物的生物活性同時(shí)，藥物的抗原性降低， Verones等人在Applied Biochem and Biotech 11，142(1985)上公開發(fā)表了用氯甲酸苯酯 活化的聚乙二醇修飾核糖核酸酶和超氧化物歧化酶，增加了蛋白的生物半衰期。上述現(xiàn)有 技術(shù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)已表明聚乙二醇修飾技術(shù)的確可以解決非腸道給藥生物大分子藥物存在的 一些問題。
[0006] 目前，市場上已經(jīng)有兩種聚乙二醇化干擾素產(chǎn)品，分別是Schering Plough公司的 PEG-IFNa 2b(PEG-INTR0N)與 Hoffman-la Roche 公司的 PEG-IFNa 2a(PEGASYS)，提高了干 擾素在體內(nèi)的半衰期，達(dá)到每周注射一次，使得干擾素的生物利用度得到了一定程度的提 升。這兩個(gè)產(chǎn)品已占有國外干擾素市場60 %，獲得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種生物學(xué)活性更好、生物利用度更高的的聚乙二醇修飾 的干擾素偶聯(lián)物，其結(jié)構(gòu)如式（I )所示：
[0008] p-nh-ch2-x-s-y-q
[0009] ( I )
[0010] 其中，P是干擾素，包括所有類型的干擾素，以及這些類型所有的亞類，以及不同類 型和/或亞類干擾素組成的復(fù)合干擾素；P可以是任何來源的，包括天然來源、組織培養(yǎng)或 由基因重組技術(shù)得到的干擾素；P優(yōu)選天然的或人工重組的干擾素蛋白，更優(yōu)選重組人干 擾素，更優(yōu)選重組人干擾素 α、β、Y或ω，最優(yōu)選a 2b ;P既可通過本領(lǐng)域公開的技術(shù)制 得，也可在市場上購得；
[0011] X是-(CH2)k-或-CH2(0CH2CH 2)k-，k選自2?10的整數(shù)，優(yōu)選1?4,進(jìn)一步優(yōu)選 為2 ;
[0012] Q為甲氧基聚乙二醇，其平均分子量優(yōu)選5, 000?40, 000道爾頓，更優(yōu)選20, 000 道爾頓；
[0013] Y選自Y1?Y12,其中，m、n各自獨(dú)立地選自2?10的整數(shù)，優(yōu)選為2，
[0014]
[0015]

【權(quán)利要求】
1. 一種結(jié)構(gòu)如式（I)所示的干擾素偶聯(lián)物， p-nh-ch2-x-s-y-q (I) 其中，P是干擾素；X是-(CH2)k-或-CH2(OCH2CH 2)k-，k選自1?10的整數(shù)；Q是甲氧基 聚乙二醇；Y選自Y1?Y12 :

其中m、n各自獨(dú)立地選自2?10之間的整數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干擾素偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)物選自式（II )? (XIII)所示化合物：

其中，P是干擾素，X是_(CH2)k-或-CH2(OCH2CH 2)k-，k選自1?10，m、n各自獨(dú)立地選 自2?10之間的整數(shù)，1?選自100?2000之間的整數(shù)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的干擾素偶聯(lián)物，其特征在于，所述干擾素選自所有類型的 干擾素及其亞類中的任意一種，或者不同類型和/或亞類干擾素組成的復(fù)合干擾素。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的干擾素偶聯(lián)物，其特征在于，所述干擾素是重組人干擾素 α、 β、Υ或ω，優(yōu)選重組人干擾素 α，更優(yōu)選重組人干擾素 a 2b。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的干擾素偶聯(lián)物，其特征在于，m = 2, η = 2。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的干擾素偶聯(lián)物，其特征在于，X是- (CH2)k-，k為1?4之間 的整數(shù)，優(yōu)選k = 2。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的干擾素偶聯(lián)物，其特征在于，mi選自450-600之間的整數(shù)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的干擾素偶聯(lián)物，其特征在于，每個(gè)甲氧基聚乙二醇基團(tuán)的平 均分子量為5, 000-40, 000道爾頓，優(yōu)選為20, 000道爾頓。
9. 一種制備權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述干擾素偶聯(lián)物的方法，其包括以下步驟： 1) 干擾素和含有已保護(hù)巰基的醛類物質(zhì)反應(yīng)，形成通過-nh-ch2-鍵連接的活化干擾素 蛋白； 2) 所述活化的干擾素蛋白脫保護(hù)，與活性甲氧基聚乙二醇衍生物偶聯(lián)。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述醛類物質(zhì)是式（XIV)的小分子醛化 合物，
其中k的數(shù)目選自2?10之間的整數(shù)，優(yōu)選2。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征在于所述活性甲氧基聚乙二醇衍生物是 通式為（XVI)的活化甲氧基聚乙二醇， AG選自：

其中m、η的數(shù)目選自2?10之間的整數(shù)，優(yōu)選2。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，包括以下步驟： 1) 制備結(jié)構(gòu)通式為（XIV)的小分子醛化合物，
其中k的數(shù)目選自2?10之間的整數(shù)，優(yōu)選2 ; 2) 將結(jié)構(gòu)通式為（XIV)的小分子醛化合物與干擾素在緩沖液里反應(yīng)，并加入還原劑 得到結(jié)構(gòu)通式為（XV )的活化干擾素，
其中P是指干擾素，優(yōu)選重組人干擾素 a 2b ; 3) 在含有活化干擾素的緩沖液里加入脫保護(hù)劑脫去結(jié)構(gòu)通式為（X V )的活化干擾素 的乙?；Ｗo(hù)基，隨后加入結(jié)構(gòu)通式為（XVI)的活化甲氧基聚乙二醇進(jìn)行聚乙二醇化反 應(yīng)，得到聚乙二醇干擾素偶聯(lián)物，

其中m、η的數(shù)目選自2?10之間的整數(shù)，優(yōu)選2 ; 4)純化聚乙二醇干擾素偶聯(lián)物。
13. -種藥物組合物，其包含： 1) 如權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述的治療有效量的聚乙二醇化干擾素偶聯(lián)物； 2) 藥學(xué)可接受的藥物載體。
14. 權(quán)利要求1-8所述的聚乙二醇化干擾素偶聯(lián)物，權(quán)利要求10所述的藥物組合物，在 制備抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)藥物中的用途；優(yōu)選在制備治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎和 戊型肝炎、帶狀皰疹、扁平和尖銳濕疣、乳頭瘤病毒感染、流行性出血熱、小兒呼吸道合胞病 毒肺炎、毛細(xì)胞性白血病、慢性粒細(xì)胞白血病、黑色素瘤、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、腎細(xì)胞癌、 卵巢癌、直腸癌、肝癌、肺癌的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P31/20GK104151421SQ201410394786
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2012年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月14日
【發(fā)明者】王亞里, 呂愛鋒, 孫長安, 王瑞軍, 李蘊(yùn)波, 房雷, 徐剛 申請人:江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司