本發(fā)明涉及一種用于注射給藥治療腫瘤藥物的組合物脂質(zhì)體制劑，尤其涉及一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨ズ妥仙即嫉慕M合物脂質(zhì)體制備方法。

背景技術(shù)：

紫杉醇(Paclitaxel，PTX，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖8)是最初由植物短葉紫杉樹皮分離提取的二萜類化合物，是目前發(fā)現(xiàn)的最具抗癌效果的天然抗癌藥物之一。紫杉醇對(duì)晚期卵巢癌、乳腺癌、黑色素瘤、肺癌、頭頸鱗癌、宮頸癌、食管癌、淋巴瘤、腦瘤都有顯著療效，對(duì)難治性卵巢癌和轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治愈率高，對(duì)治療前列腺癌、胃腸癌、小細(xì)胞性和非小細(xì)胞性肺癌前景良好。紫杉醇為白色結(jié)晶粉末，在pH＝4到8的條件下化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定。紫杉醇脂溶性高，幾乎不溶于水，也難溶于多種常用藥用溶媒，臨床上采用乙醇和聚氧乙烯蓖麻油作為助溶劑增加紫杉醇的水溶性，但后者會(huì)產(chǎn)生諸多不良反應(yīng)，如心血管毒性，過(guò)敏反應(yīng)、腎毒性及神經(jīng)系統(tǒng)毒性等，使得紫杉醇的臨床應(yīng)用受到了很大限制，這也一直是化學(xué)結(jié)構(gòu)改造和新劑型研發(fā)工作的焦點(diǎn)。

棕櫚?？箟难狨?L-palmitoyl ascorbate，PA，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖9)是抗壞血酸的一種脂溶性衍生物，由于棕櫚酸基的植入，使其既有親水的抗壞血酸基，又有親油的棕櫚酰酯，從而成為了一種優(yōu)良的抗氧化劑。與抗壞血酸相比，其穩(wěn)定性更強(qiáng)，具備更好的理化性質(zhì)。脂溶性增強(qiáng)后，棕櫚?？箟难徇M(jìn)入細(xì)胞的能力增強(qiáng)，藥效增強(qiáng)。前期研究已經(jīng)表明抗壞血酸可以增強(qiáng)紫杉醇的抗腫瘤作用及安全性。因此其與抗壞血酸、紫杉醇或它們的組合物比較，經(jīng)靜脈、動(dòng)脈、肌肉、皮下、腹腔等給藥，特別是瘤內(nèi)注射、介入給藥等給藥方式可以更加顯著的增強(qiáng)紫杉醇的抗腫瘤作用及安全性。而與抗壞血酸相似的是，棕櫚酰抗壞血酸可以選擇性的在腫瘤細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮藥效，毒副作用較小。此外，疏水性的特性使得棕櫚酰抗壞血酸更易于被脂質(zhì)體包載，制備出緩釋效果較好的脂質(zhì)體。

抗腫瘤藥物在發(fā)揮抗腫瘤細(xì)胞作用的同時(shí)，亦可損傷正常細(xì)胞藥物。治療的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題是如何把藥物定向輸送到癌癥細(xì)胞而又不損傷正常細(xì)胞。脂質(zhì)體是靶向給藥系統(tǒng)的一種新劑型，這種系統(tǒng)是目前藥劑學(xué)最新、最有前途的給藥系統(tǒng)。它可以將藥物選擇性地運(yùn)送到靶點(diǎn)部位，發(fā)揮治療作用，同時(shí)又不影響正常細(xì)胞、組織或器官的功能，從而達(dá)到提高療效、減少毒副作用的目的。

目前，關(guān)于復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/紫杉醇脂質(zhì)體的報(bào)道較少。美國(guó)東北大學(xué)的Vladimir P.Torchilin教授等人報(bào)道了一種棕櫚?？箟难狨ヅc紫杉醇的復(fù)方脂質(zhì)體制劑，其中棕櫚?？箟难狨ヅc脂質(zhì)成分的摩爾比例為1％、5％、7.5％、10％，15％，20％，30％，相當(dāng)于所含棕櫚?？箟难狨サ馁|(zhì)量比為1.7％、8.1％、11.7％、15％、20.9％、26.1％、34.6％。本發(fā)明研究表明，當(dāng)棕櫚?？箟难狨ケ壤笥?6％時(shí)，較難將藥物包裹入脂質(zhì)體中，制備出的脂質(zhì)體粒徑較大，且放置過(guò)程中棕櫚?？箟难狨ヒ子谖龀觯荒苓_(dá)到緩釋、靶向給藥的目的。本發(fā)明旨在研制一種復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/紫杉醇的脂質(zhì)體，以提高紫杉醇的靶向性，降低其毒副作用，應(yīng)用棕櫚?？箟难狨サ目鼓[瘤作用提高療效。同時(shí)，本發(fā)明所采用的制備方法適合產(chǎn)業(yè)化推廣。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種具有良好的包封率、載藥量和穩(wěn)定性；并且粒徑分布集中，大小分布均勻的復(fù)方棕櫚?？箟难狨ズ妥仙即嫉慕M合物脂質(zhì)體。

為解決本發(fā)明的技術(shù)問(wèn)題，采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體，包括如下各組分：紫杉醇∶棕櫚?？箟难狨ァ昧字愇镔|(zhì)∶膽固醇類似物。

并且各組分和組分之間的質(zhì)量百分比如下：

紫杉醇∶棕櫚?？箟难狨ァ昧字愇镔|(zhì)∶膽固醇類似物＝0.006～0.3∶0.06～60∶203.3～290∶9.67～96.7。

優(yōu)選的紫杉醇∶棕櫚?？箟难狨ァ昧字愇镔|(zhì)∶膽固醇類似物＝0.06～0.21∶6～60∶203.3～273∶96.7～9.67。

更優(yōu)選的紫杉醇∶棕櫚?？箟难狨ァ昧字愇镔|(zhì)∶膽固醇類似物＝0.06～0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

紫杉醇的重量份是0.006～0.06；0.006～0.12；0.006～0.21；0.006～0.3；0.06～0.12；0.06～0.21；0.06～0.3；0.12～0.21，0.12～0.3，0.21～0.3，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：0.06～3；0.06～6；0.06～15；0.06～24；0.06～60；3～6；3～15；3～24；3～60；6～15；6～24；6～60；15～24；15～60；24～60；24；

磷脂類物質(zhì)的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；203.3～290；225～250；225～273；225～290；250～275；250～290；275～290；

膽固醇類似物的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；96.7～9.67；75～50；75～27；75～9.67；50～27；50～9.67；27～9.67；

優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)選自磷脂酰膽堿類、磷脂酰甘油類、磷脂酰肌醇類、磷脂酰乙醇胺類、神經(jīng)鞘磷脂類中至少一種。

優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)選自單鏈或雙鏈磷脂；

優(yōu)選的雙鏈磷脂選自二棕櫚酸磷脂酰膽堿(DPPC)、二月桂酸磷脂酰膽堿(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二軟脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二亞油酸磷脂酰肌醇、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二軟脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰絲氨酸、

優(yōu)選的單鏈磷脂選自單棕櫚酸磷脂酰膽堿(MPPC)、單月桂酸磷脂酰膽堿(MLPC)、單肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(MMPC)、單硬脂酰磷脂酰膽堿(MSPC)、單肉蔻酸磷脂酰甘油、單月桂酸磷脂酰甘油、單軟脂酸磷脂酰甘油、單硬脂酸磷脂酰甘油、單肉蔻酸磷脂酸、單月桂酸磷脂酸、單軟脂酸磷脂酸、單硬脂酸磷脂酸、單油酸磷脂酰絲氨酸、單亞油酸磷脂酰肌醇、

優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)還選自大豆磷脂、卵磷脂、心磷脂、腦磷脂中至少一種。

所述的腦磷脂可以是天然或合成的腦磷脂。

更優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)選自二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿、二棕櫚酸磷脂酰膽堿、大豆磷脂、卵磷脂、腦磷脂、心磷脂中至少一種。

最優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)選自二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿、二棕櫚酸磷脂酰膽堿、大豆磷脂中至少一種。

優(yōu)選的膽固醇類似物選自膽固醇、膽固醇半琥珀酸酯、谷甾醇中至少一種。

最優(yōu)選的膽固醇類似物選自膽固醇。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)可以選自如下范圍任意組合：

優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.06～0.21∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶15～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

紫杉醇的重量份是0.06～0.12，0.06～0.21，0.12～0.21，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：6～15，6～24，15～24；

二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；225～250；225～273；250～275；

膽固醇的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；75～50；75～27；50～27；

上述優(yōu)選實(shí)施方案中，最優(yōu)選的各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)選自：

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶24∶203.3∶96.7。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶24∶250∶50。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶24∶273∶27。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)可以選自如下范圍任意組合：

優(yōu)選的紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.06～0.21∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

更優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶15～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

紫杉醇的重量份是0.06～0.12，0.06～0.21，0.12～0.21，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：6～15，6～24，15～24；

大豆磷脂的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；225～250；225～273；250～275；

谷甾醇的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；75～50；75～27；50～27；

上述優(yōu)選實(shí)施方案中，最優(yōu)選的各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)選自：

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶24∶203.3∶96.7。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶24∶250∶50。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶24∶273∶27。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)可以選自如下范圍任意組合：

優(yōu)選的紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.06～0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

更優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶15～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

紫杉醇的重量份是0.06～0.12，0.06～0.21，0.12～0.21，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：6～15，6～24，15～24；

二棕櫚酸磷脂酰膽堿的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；225～250；225～273；250～275；

膽固醇半琥珀酸酯的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；75～50；75～27；50～27；

上述優(yōu)選實(shí)施方案中，最優(yōu)選的各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)選自：

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶24∶203.3∶96.7。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶24∶250∶50。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶24∶273∶27。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)可以選自如下范圍任意組合：

優(yōu)選的紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.06～0.21∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

更優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

最優(yōu)選紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶15～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

紫杉醇的重量份是0.06～0.12，0.06～0.21，0.12～0.21，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：6～15，6～24，15～24；

大豆磷脂的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；225～250；225～273；250～275；

膽固醇的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；75～50；75～27；50～27；

上述優(yōu)選實(shí)施方案中，最優(yōu)選的各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)選自：

最優(yōu)選的紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶24∶203.3∶96.7。

最優(yōu)選的紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶24∶250∶50。

最優(yōu)選的紫杉醇∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶24∶273∶27。

本發(fā)明制備的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?多西紫杉醇的組合物脂質(zhì)體，粒徑為80-200nm，包封率為70％以上，紫杉醇的載藥量為0.005％～5％，棕櫚?？箟难狨サ妮d藥量為0.1％～40％。

優(yōu)選的處方為：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，棕櫚酰抗壞血酸酯的載藥量：1％～20％。

本發(fā)明還提供了一種上述復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/紫杉醇的組合物脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括如下步驟：

A、將棕櫚?？箟难狨ァ⒆仙即?、膽固醇、磷脂溶解于有機(jī)溶劑中；

B、蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜；

C、干燥；

D、加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下；

E、低溫下探頭超聲，即得。

步驟A中，優(yōu)選的有機(jī)溶劑可為二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇、乙醚、四氫呋喃。更優(yōu)選的溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮；最優(yōu)選的有機(jī)溶劑選自三氯甲烷。

步驟B中，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑優(yōu)選采用旋轉(zhuǎn)減壓的方式；優(yōu)選的旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)時(shí)的溫度選自30℃～80℃；優(yōu)選的溫度選自50℃～75℃；更優(yōu)選的溫度選自65℃～75℃；最優(yōu)選的溫度是70℃；

步驟C中，干燥的方式：優(yōu)選采用真空干燥；干燥的溫度設(shè)定為30℃～90℃；溫度選自40℃～90℃；優(yōu)選的溫度選自50℃～85℃；更優(yōu)選的溫度選自70℃～80℃；最優(yōu)選的溫度是75℃；

步驟E中，探頭超聲強(qiáng)度及時(shí)長(zhǎng)設(shè)定為30％～90％，10s～50s，超聲1～7s停1s，循環(huán)次數(shù)為1～8次。

本發(fā)明第三方面提供了復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

所述的腫瘤選自黑色素瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、腎癌、肝癌、口腔表皮癌、宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、腦瘤、食管癌。

有益技術(shù)效果

本發(fā)明的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體具有良好的包封率、載藥量和 穩(wěn)定性。

本發(fā)明的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體與棕櫚?？箟难狨畏街|(zhì)體及紫杉醇的單方脂質(zhì)體相比，藥效明顯增強(qiáng)，可以顯著提高紫杉醇的抗腫瘤效果，且毒性降低，安全性高。提高了紫杉醇臨床用藥的安全性及有效性，具有重要的實(shí)際應(yīng)用前景。

本發(fā)明的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體制備方法具有工藝簡(jiǎn)便、制備成本低、工藝重現(xiàn)性好、實(shí)驗(yàn)處方和工藝可放大到生產(chǎn)應(yīng)用等特點(diǎn)，因而對(duì)產(chǎn)業(yè)化的應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。

附圖說(shuō)明：

圖1.紫杉醇單獨(dú)作用于MCF-7和與不同濃度PA合用后的體外藥效實(shí)驗(yàn)。

圖2.紫杉醇單獨(dú)作用于HepG-II和與不同濃度PA合用后的體外藥效實(shí)驗(yàn)。

圖3.紫杉醇單獨(dú)作用于A549和與不同濃度PA合用后的體外藥效實(shí)驗(yàn)。

圖4.紫杉醇單獨(dú)作用于SGC-7901和與不同濃度PA合用后的體外藥效實(shí)驗(yàn)。

圖5.紫杉醇單獨(dú)作用于BxPC-3和與不同濃度PA合用后的體外藥效實(shí)驗(yàn)。

圖6.紫杉醇單獨(dú)作用于Hela和與不同濃度PA合用后的體外藥效實(shí)驗(yàn)。

圖7.靜注2mg/kg給藥后紫杉醇溶液組與脂質(zhì)體組在大鼠體內(nèi)的血藥濃度-時(shí)間曲線。

圖8.紫杉醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

圖9.維生素C棕櫚酰酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體配方及其制備如下：

實(shí)驗(yàn)方法：所述的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的脂質(zhì)體制備工藝為：將紫杉醇、棕櫚?？箟难狨ァ⒍舛罐⑺崃字Ｄ憠A、膽固醇溶解于三氯甲烷中，渦旋至完全溶解后加入500mL茄形燒瓶中，70℃旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜，置于真空干燥箱中75℃下干燥過(guò)夜后，加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下后，冰水浴下探頭超聲2個(gè)循環(huán)(30％，20s，超聲1s停1s)，即得。

脂質(zhì)體評(píng)價(jià)方法：

脂質(zhì)體的粒徑的測(cè)定：采用激光粒度測(cè)定儀測(cè)定。

包封率以及載藥量的測(cè)定：0.3mL的復(fù)方脂質(zhì)體過(guò)葡聚糖凝膠柱，用生理鹽水為洗脫液，分開游離的藥物和脂質(zhì)體后，收集脂質(zhì)體組分，用甲醇破乳定容后用HPLC進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得復(fù)方脂質(zhì)體濃度C₁。另取0.3mL復(fù)方脂質(zhì)體用甲醇定容到與上柱后脂質(zhì)體組分相同體積，然后進(jìn)樣并計(jì)算得復(fù)方脂質(zhì)體破乳后總濃度C₀。根據(jù)以下公式計(jì)算包封率(Encapsulation Efficiency，EE％)以及載藥量(Drug Loading Efficiency，DLE％)：

$\mathrm{EE}\%=\frac{C_1}{C_0}\×100\%$

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

表1.實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

紫杉醇：PTX，棕櫚?？箟难狨ィ篜A，二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿：DMPC，膽固醇：CHOL制劑評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，PA載藥量：1％～20％為合格制劑

實(shí)施例2：一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體配方及其制備如下：

實(shí)驗(yàn)方法：所述的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的脂質(zhì)體制備工藝為：將紫杉醇、棕櫚酰抗壞血酸酯、大豆磷脂、谷甾醇溶解于三氯甲烷中，渦旋至完全溶解后加入500mL茄形燒瓶中，60℃旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜，置于真空干燥箱中35℃下干燥過(guò)夜后，加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下后，冰水浴下探頭超聲4個(gè)循環(huán)(80％，50s，超聲1s停1s)，即得。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

表2.實(shí)施例2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

紫杉醇：PTX，棕櫚?？箟难狨ィ篜A

制劑評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，PA載藥量：1％～20％為合格制劑

實(shí)施例3：一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體配方及其制備如下：

實(shí)驗(yàn)方法：所述的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的脂質(zhì)體制備工藝為：將紫杉醇、棕櫚?？箟难狨?、二棕櫚酸磷脂酰膽堿、膽固醇半琥珀酸酯溶解于三氯甲烷中，渦旋至完全 溶解后加入500mL茄形燒瓶中，70℃旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜，置于真空干燥箱中75℃下干燥過(guò)夜后，加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下后，冰水浴下探頭超聲6個(gè)循環(huán)(30％，60s，超聲1s停1s)，即得。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

表3.實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

紫杉醇：PTX，棕櫚?？箟难狨ィ篜A，二棕櫚酸磷脂酰膽堿：DMPC，膽固醇半琥珀酸酯：CHS

制劑評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，PA載藥量：1％～20％為合格制劑

實(shí)施例4：一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的組合物脂質(zhì)體配方及其制備如下：

實(shí)驗(yàn)方法：所述的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的脂質(zhì)體制備工藝為：將紫杉醇、棕櫚酰抗壞血酸酯、大豆磷脂、膽固醇溶解于三氯甲烷中，渦旋至完全溶解后加入500mL茄形燒瓶中，70℃旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜，置于真空干燥箱中65℃下干燥過(guò)夜后，加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下后，冰水浴下探頭超聲2個(gè)循環(huán)(50％，60s，超聲1s停1s)，即得。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表4.實(shí)施例4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

紫杉醇：PTX，棕櫚?？箟难狨ィ篜A，膽固醇：CHOL

制劑評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，PA載藥量：1％～20％為合格制劑

現(xiàn)有文獻(xiàn)脂質(zhì)體制備并與本專利脂質(zhì)體比較

實(shí)驗(yàn)1

參考美國(guó)東北大學(xué)的Vladimir P.Torchilin教授等人報(bào)道的棕櫚酰抗壞血酸酯與紫杉醇的復(fù)方脂質(zhì)體制劑文獻(xiàn)，按該文獻(xiàn)中報(bào)道的處方配比制備脂質(zhì)體，并測(cè)定其包封率、粒徑。

該文獻(xiàn)中，磷脂200mg，膽固醇100mg，棕櫚?？箟难狨?50mg，紫杉醇30mg，按本專利涉及的制備方法進(jìn)行制備。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：制備過(guò)程中，在加入蒸餾水，超聲洗脂質(zhì)薄膜時(shí)，有明顯顆粒析出，無(wú)法繼續(xù)制備。

藥理實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)例1：棕櫚?？箟难狨ヅc紫杉醇合用對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用

MTT法測(cè)定腫瘤細(xì)胞活性

對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞株經(jīng)0.25％胰酶消化后，用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成單細(xì)胞懸液，以3×10³個(gè)/mL的密度接種于96孔板中，每孔加入100μL細(xì)胞懸液，置于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待細(xì)胞充分貼壁后，去除原有的培養(yǎng)液，每孔加入用培養(yǎng)液配制的不同濃度的紫杉醇溶液50μL，再加入用用培養(yǎng)液配置的不同濃度棕櫚?？箟难狨?0μL。對(duì)照組加入含0.1％DMSO的培養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束后吸棄藥液，每孔加入PBS 100μL洗去殘留的藥液，每孔加入含10％5mg/mL MTT工作液培養(yǎng)液100μL，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸棄上清液，每孔加入150μL DMSO，振蕩10min以充分溶解結(jié)晶物，在酶標(biāo)儀570nm下測(cè)定OD值，按下列公式計(jì)算給予紫杉醇后腫瘤細(xì)胞的抑制率，并采用SPSS數(shù)據(jù)處理軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。

根據(jù)各濃度藥物的抑制率，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC₅₀，并依據(jù)IC₅₀計(jì)算紫杉醇與不同濃度的棕櫚?？箟难狨ズ嫌煤驣C₅₀減少倍數(shù)。

PA提高了藥物A的化療作用的判斷方法

IR(A+PA)＞IR(A)，表示PA的存在提高了藥物A的化療作用，右上角標(biāo)記為^▲。

協(xié)同作用判斷方法

用以下的計(jì)算方法對(duì)協(xié)同作用進(jìn)行判斷：

IR(A+B)＞IR(A)+IR(B)-IR(A)×IR(B)，藥物間存在協(xié)同作用；

IR(A+B)＝IR(A)+IR(B)-IR(A)×IR(B)，藥物間只是簡(jiǎn)單疊加作用；

IR(A+B)＜IR(A)+IR(B)-IR(A)×IR(B)，藥物間存在拮抗作用；

其中IR(A+B)，IR(A)，IR(B)分別對(duì)應(yīng)藥物AB聯(lián)用，A單獨(dú)作用及B單獨(dú)作用時(shí)的生長(zhǎng)抑制率。

IR(A)+IR(B)-IR(A)×IR(B)的結(jié)果示為預(yù)測(cè)值，如AB聯(lián)用的抑制率{IR(A+B)}大于預(yù)測(cè)值，則表示合用具有協(xié)同作用。右上角標(biāo)記^▲▲為具有協(xié)同作用。如抑制率為負(fù)值者記為0。

上述細(xì)胞株選自：人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人肝癌細(xì)胞株HepG-II、人肺癌細(xì)胞株A549、人胃癌細(xì)胞株SGC-7901、人原位胰腺腺癌細(xì)胞株BxPC-3、人宮頸癌細(xì)胞株Hela。

表1-1.PA合用紫杉醇對(duì)MCF-7的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表2-1.紫杉醇單獨(dú)作用MCF-7和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表2-1.PA合用紫杉醇對(duì)HepG-II的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表2-2.紫杉醇單獨(dú)作用HepG-II和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表3-1.PA合用紫杉醇對(duì)A549的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表3-2.紫杉醇單獨(dú)作用A549和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表4-1.PA合用紫杉醇對(duì)SGC-7901的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表4-2.紫杉醇單獨(dú)作用SGC-7901和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表5-1.PA合用紫杉醇對(duì)BxPC-3的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表5-2.紫杉醇單獨(dú)作用BxPC-3和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表6-1.PA合用紫杉醇對(duì)Hela的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表6-2.紫杉醇單獨(dú)作用Hela和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)例1：復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇的脂質(zhì)體與紫杉醇溶液的藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)比較

取大鼠6只，按體重隨機(jī)分成兩組，每組三只大鼠，按2mg/kg劑量靜注給予0.5mg/mL紫杉醇溶液(大鼠編號(hào)為No.1、No.2、No.3)、復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇脂質(zhì)體(其中紫杉醇濃度為0.5mg/mL，大鼠編號(hào)為No.4、No.5、No.6)，分別于給藥前約0.25h和給藥后0.083h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h取血，約200μL至肝素化試管中，于8000rpm離心5min，分離出血漿，于-80℃保存供測(cè)試。

表1.大鼠靜注給予2mg/kg紫杉醇溶液后的血藥濃度(μg/L)

表2.大鼠靜注給予2mg/kg紫杉醇溶液后大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

表3.大鼠靜注給予2mg/kg復(fù)方棕櫚?？箟难狨?紫杉醇脂質(zhì)體后的血藥濃度(μg/L)

表4.大鼠靜注給予2mg/kg復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/紫杉醇脂質(zhì)體后大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：藥動(dòng)參數(shù)表明，靜注給予大鼠同樣劑量的紫杉醇溶液和復(fù)方脂質(zhì)體后，脂質(zhì)體組的AUC為溶液組的1.53倍，半衰期約為溶液組的4倍，清除率約為溶液組的1/1.7，表明脂質(zhì)體減緩了藥物釋放，延長(zhǎng)了藥物的作用時(shí)間，增強(qiáng)了藥效。