本發(fā)明涉及屬于去蛋白提取物生產(chǎn)領(lǐng)域，一種小牛血去蛋白提取物中間體的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)：
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目前現(xiàn)有的小牛血去蛋白提取物中間體多為采集自出生后6個月以內(nèi)的小牛，實際情況為該牛齡段牛源較少，且可能參入部分大牛血，因此影響該產(chǎn)品的活性。

而且現(xiàn)有的小牛血去蛋白提取物中間體的生產(chǎn)方法基本都為化學(xué)提取法，如中國發(fā)明專利:CN200910246717.3公開的一種小牛血去蛋白提取物組合物注射液及其制備方法，其方法為小牛血加枸櫞酸鈉，加水?dāng)嚢枭郎兀瑪嚢柘卵杆俳禍刂?10～0℃，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值，加入胃蛋白酶酶解，過濾，調(diào)節(jié)pH值，加入枯草桿菌蛋白酶酶解，過濾；濾液加入乙醇水溶液攪拌，離心，上清液過活性炭柱，合并洗脫液和穿流液，濃縮至無乙醇味，濃縮液加入木糖醇和ε-聚賴氨酸，加水稀釋，超濾；超濾液分裝灌裝后紫外滅菌，包裝即得。這樣的方法不僅復(fù)雜，而且需要加入大量的化學(xué)物質(zhì)，從而破壞了小牛血去蛋白提取物的純凈性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
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針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種小牛血去蛋白提取物中間體的生產(chǎn)方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)復(fù)雜，而且需要加入大量的化學(xué)物質(zhì)，從而破壞了小牛血去蛋白提取物的純凈性的問題。

本發(fā)明的技術(shù)解決措施如下：

一種小牛血去蛋白提取物中間體的生產(chǎn)方法，包括：

a、取血：在清潔環(huán)境下采集小牛全血；

b、分離：將小牛全血恒溫放置至全血中的血清和血塊自然分離后，離心去除血清后得到血塊，并將血塊低溫冷凍保存；

c、碾磨：將冷凍的血塊化凍至常溫后加入純化水，混合均勻后得到混合液；

d、變性：將混合液加入反應(yīng)罐中升溫變性，變性后冷卻至50℃以下再進(jìn)行離心得到離心液，將離心液冷凍保存；

e、超濾：將離心液化凍后進(jìn)行超濾，收集得到超濾液，并將超濾液低溫冷凍保存；

f、無菌灌裝：將超濾液化凍后，通過除菌過濾后灌裝，得到小牛血去蛋白提取物中間品，并將小牛血去蛋白提取物中間品至2～8℃保存。

作為優(yōu)選，取血步驟中，血液采集自出生14小時以內(nèi)未進(jìn)食的新生小牛，采集環(huán)境應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)。出生14小時內(nèi)的小牛血分離出來的血清是細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分之一，具有較高的經(jīng)濟(jì)價值。而小牛全血分離血清后得到的血塊依然含有較高的活性成分，本發(fā)明從本來丟棄的血塊中分離提取得到小牛血去蛋白提取物中間體，一方面充分利用了小牛血的所有組分，提高了其利用率；另一方面也一定程度提高了小牛血去蛋白提取物中間體的活性成分。

作為優(yōu)選，分離步驟中，恒溫放置溫度控制在25～35℃，放置時間為30分鐘，離心轉(zhuǎn)速為2000～4000轉(zhuǎn)，離心時間10～20分鐘，低溫保存溫度不低于-5℃。

作為優(yōu)選，碾磨步驟中，混合時采用碾磨機(jī)進(jìn)行混合，碾磨機(jī)轉(zhuǎn)速為2000～3000轉(zhuǎn)/分鐘，每碾磨50L混合液需要碾磨10分鐘，加入的純化水的體積與血塊的體積比為3：1。

作為優(yōu)選，變性步驟中，升溫溫度為80±2℃，升溫時間保存時間為30分鐘，離心條件為40±2℃，離心轉(zhuǎn)速為3000～5000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間為10～20分鐘，低溫保存溫度不低于-5℃。

作為優(yōu)選，超濾步驟中，超濾使用的濾膜截留分子量為10KD。

作為優(yōu)選，無菌灌裝步驟中，過濾孔徑為0.22μm。

本發(fā)明的有益效果在于：

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：1、本發(fā)明所采集的原料血來自于剛出生的出生后14小時以內(nèi)采集的小牛血液，比普通工藝的小牛血液中的活性成分含量更高；2、本發(fā)明采用純物理手段對小牛血進(jìn)行逐步處理，從而得到了小牛血去蛋白提取物中間體，不僅步驟少，生產(chǎn)工藝流程短，更由于采用純物理手段，完全保證了小牛血去蛋白提取物中間體的純凈性，提高了小牛血的利用價值。

具體實施方式：

實施例1：一種小牛血去蛋白提取物中間體的生產(chǎn)方法，包括：

a、取血：在清潔環(huán)境下采集小牛全血；

b、分離：將小牛全血恒溫放置至全血中的血清和血塊自然分離后，離心去除血清后得到血塊，并將血塊低溫冷凍保存；

c、碾磨：將冷凍的血塊化凍至常溫后加入純化水，混合均勻后得到混合液；

d、變性：將混合液加入反應(yīng)罐中升溫變性，變性后冷卻至50℃以下再進(jìn)行離心得到離心液，將離心液冷凍保存；

e、超濾：將離心液化凍后進(jìn)行超濾，收集得到超濾液，并將超濾液低溫冷凍保存；

f、無菌灌裝：將超濾液化凍后，通過除菌過濾后灌裝，得到小牛血去蛋白提取物中間品，并將小牛血去蛋白提取物中間品至2～8℃保存。

取血步驟中，血液采集自出生1小時以內(nèi)未進(jìn)食的新生小牛，采集環(huán)境應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)。

分離步驟中，恒溫放置溫度控制在25℃，放置時間為30分鐘，離心轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)，離心時間10分鐘，低溫保存溫度不低于-5℃。

碾磨步驟中，混合時采用碾磨機(jī)進(jìn)行混合，碾磨機(jī)轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)/分鐘，每碾磨50L混合液需要碾磨10分鐘，加入的純化水的體積與血塊的體積比為3：1。

變性步驟中，升溫溫度為80±2℃，升溫時間保存時間為30分鐘，離心條件為40±2℃，離心轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間為10～20分鐘，低溫保存溫度不低于-5℃。

超濾步驟中，超濾使用的濾膜截留分子量為10KD。

無菌灌裝步驟中，過濾孔徑為0.22μm。

表1、實施例1生產(chǎn)的小牛血去蛋白提取物的相關(guān)性狀檢測

實施例2：一種小牛血去蛋白提取物中間體的生產(chǎn)方法，包括：

a、取血：在清潔環(huán)境下采集小牛全血；

b、分離：將小牛全血恒溫放置至全血中的血清和血塊自然分離后，離心去除血清后得到血塊，并將血塊低溫冷凍保存；

c、碾磨：將冷凍的血塊化凍至常溫后加入純化水，混合均勻后得到混合液；

d、變性：將混合液加入反應(yīng)罐中升溫變性，變性后冷卻至50℃以下再進(jìn)行離心得到離心液，將離心液冷凍保存；

e、超濾：將離心液化凍后進(jìn)行超濾，收集得到超濾液，并將超濾液低溫冷凍保存；

f、無菌灌裝：將超濾液化凍后，通過除菌過濾后灌裝，得到小牛血去蛋白提取物中間品，并將小牛血去蛋白提取物中間品至2～8℃保存。

取血步驟中，血液采集自出生2小時未進(jìn)食的新生小牛，采集環(huán)境應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)。

分離步驟中，恒溫放置溫度控制在35℃，放置時間為30分鐘，離心轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)，離心時間20分鐘，低溫保存溫度不低于-5℃。

碾磨步驟中，混合時采用碾磨機(jī)進(jìn)行混合，碾磨機(jī)轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分鐘，每碾磨50L混合液需要碾磨10分鐘，加入的純化水的體積與血塊的體積比為3：1。

變性步驟中，升溫溫度為80±2℃，升溫時間保存時間為30分鐘，離心條件為40±2℃，離心轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間為10～20分鐘，低溫保存溫度不低于-5℃。

超濾步驟中，超濾使用的濾膜截留分子量為10KD。

無菌灌裝步驟中，過濾孔徑為0.22μm。

表2、實施例2生產(chǎn)的小牛血去蛋白提取物的相關(guān)性狀檢測

實施例3：一種小牛血去蛋白提取物中間體的生產(chǎn)方法，包括：

a、取血：在清潔環(huán)境下采集小牛全血；

b、分離：將小牛全血恒溫放置至全血中的血清和血塊自然分離后，離心去除血清后得到血塊，并將血塊低溫冷凍保存；

c、碾磨：將冷凍的血塊化凍至常溫后加入純化水，混合均勻后得到混合液；

d、變性：將混合液加入反應(yīng)罐中升溫變性，變性后冷卻至50℃以下再進(jìn)行離心得到離心液，將離心液冷凍保存；

e、超濾：將離心液化凍后進(jìn)行超濾，收集得到超濾液，并將超濾液低溫冷凍保存；

f、無菌灌裝：將超濾液化凍后，通過除菌過濾后灌裝，得到小牛血去蛋白提取物中間品，并將小牛血去蛋白提取物中間品至2～8℃保存。

取血步驟中，血液采集自出生14小時未進(jìn)食的新生小牛，采集環(huán)境應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)。

分離步驟中，恒溫放置溫度控制在30℃，放置時間為30分鐘，離心轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)，離心時間15分鐘，低溫保存溫度不低于-5℃。

碾磨步驟中，混合時采用碾磨機(jī)進(jìn)行混合，碾磨機(jī)轉(zhuǎn)速為2500轉(zhuǎn)/分鐘，每碾磨50L混合液需要碾磨10分鐘，加入的純化水的體積與血塊的體積比為3：1。

變性步驟中，升溫溫度為80±2℃，升溫時間保存時間為30分鐘，離心條件為40±2℃，離心轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間為15分鐘，低溫保存溫度不低于-5℃。

超濾步驟中，超濾使用的濾膜截留分子量為10KD。

無菌灌裝步驟中，過濾孔徑為0.22μm。

表3、實施例3生產(chǎn)的小牛血去蛋白提取物的相關(guān)性狀檢測

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。