本發(fā)明屬于干細(xì)胞治療藥物，具體涉及基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物及其制備方法、應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、呼吸系統(tǒng)疾病是一種常見病、多發(fā)病，主要病變?cè)跉夤堋⒅夤?、肺部及胸腔，病變輕者多咳嗽、胸痛、呼吸受影響，重者呼吸困難、缺氧，甚至呼吸衰竭而致死。

2、使用傳統(tǒng)藥物，如糖皮質(zhì)激素、抗生素等，雖然可以緩解癥狀，但存在全身毒性、耐藥性和無(wú)法促進(jìn)組織再生等缺陷。使用手術(shù)治療，如肺移植或機(jī)械通氣，僅適用于重癥患者，且具有創(chuàng)傷性、高費(fèi)用和低存活率的問題。而直接移植干細(xì)胞這一方法則存在免疫排斥、致瘤風(fēng)險(xiǎn)及低存活率問題，且難以精準(zhǔn)調(diào)控干細(xì)胞的旁分泌效應(yīng)。干細(xì)胞外囊泡（extracellular?vesicles,?evs）是干細(xì)胞旁分泌效應(yīng)的關(guān)鍵介質(zhì)，可通過遞送mrna、mirna、蛋白質(zhì)等活性成分調(diào)控炎癥、促進(jìn)修復(fù)。然而，現(xiàn)有evs制劑存在以下問題：

3、（1）單一evs成分難以全面調(diào)控復(fù)雜的肺損傷微環(huán)境；

4、（2）常規(guī)靜脈或局部注射導(dǎo)致肺部靶向性差、生物利用度低；

5、（3）單一evs穩(wěn)定性不足，易被呼吸道黏液屏障清除。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決背景技術(shù)提出的問題，本發(fā)明提供基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物及其制備方法、應(yīng)用。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明提供一種基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物，所述組合物包括：

4、干細(xì)胞外囊泡、kl4肽、n-乙酰半胱氨酸、重組人dna酶；

5、干細(xì)胞外囊泡與kl4肽、n-乙酰半胱氨酸、重組人dna酶的質(zhì)量比分別為1：0.01-0.05、1：0.01-0.05、1：0.01-0.02。

6、進(jìn)一步的，干細(xì)胞外囊泡與kl4肽、n-乙酰半胱氨酸、重組人dna酶的質(zhì)量比分別為1：0.025、1：0.025、1：0.015。

7、干細(xì)胞外囊泡粒徑為30-200?nm，平均粒徑為127.5nm，峰值粒徑為120nm，顆粒濃度為100億顆粒/ml。

8、所述干細(xì)胞外囊泡源于間充質(zhì)干細(xì)胞，具體為：

9、（1）從人臍帶中分離間充質(zhì)干細(xì)胞，在低氧條件下擴(kuò)增，使用無(wú)血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)至第5代，收集細(xì)胞上清液，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

10、（2）上清液依次經(jīng)3000×g離心20min，再通過0.22μm濾膜過濾；

11、濾液經(jīng)100,000×g，4℃離心2h，棄上清，沉淀用磷酸緩沖鹽溶液重懸，得到粗提產(chǎn)物；

12、（3）粗提產(chǎn)物通過蔗糖梯度離心，進(jìn)一步純化；

13、使用尺寸排阻色譜分離高純度干細(xì)胞外囊泡，收集目標(biāo)峰，得到純化后的干細(xì)胞外囊泡。

14、所述組合物，還包括凍干保護(hù)劑。

15、所述組合物以霧化劑的形式使用，霧化劑中組合物的濃度為500-2000ug/ml。

16、本發(fā)明還提供一種所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物的制備方法，包括：

17、純化后的干細(xì)胞外囊泡與n-乙酰半胱氨酸進(jìn)行孵育后，將kl4肽與干細(xì)胞外囊泡偶聯(lián)，加入重組人dna酶混合得到。

18、具體為：

19、（1）純化后的干細(xì)胞外囊泡與n-乙酰半胱氨酸采用電穿孔法，于37℃孵育1h，其中電壓為200v，脈沖時(shí)間為10ms；

20、（2）將孵育后的干細(xì)胞外囊泡與kl4肽在磷酸緩沖鹽溶液中混合后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺，室溫反應(yīng)2h，離心，得到偶聯(lián)后的產(chǎn)物；

21、（3）偶聯(lián)后的產(chǎn)物與重組人dna酶混合得到。

22、本發(fā)明還提供一種所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物在制備呼吸系統(tǒng)疾病藥物或制劑中的應(yīng)用。

23、進(jìn)一步的，所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物在降低炎癥因子il-1β、tnf-α水平的制備呼吸系統(tǒng)疾病藥物或制劑中的應(yīng)用。

24、有益效果：本發(fā)明提供的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物，通過霧化吸入方式遞送至肺部，組分間的協(xié)同作用，能夠降低炎癥因子il-1β、tnf-α水平，修復(fù)呼吸系統(tǒng)肺損傷，具有無(wú)創(chuàng)、安全性高、效果顯著等優(yōu)點(diǎn)，屬于再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新型治療手段，為呼吸系統(tǒng)疾病提供了革新性治療方案。

技術(shù)特征：

1.一種基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物，其特征在于，所述組合物包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物，其特征在于，干細(xì)胞外囊泡與kl4肽、n-乙酰半胱氨酸、重組人dna酶的質(zhì)量比分別為1：0.025、1：0.025、1：0.015。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物，其特征在于，干細(xì)胞外囊泡粒徑為30-200?nm，平均粒徑為127.5nm，峰值粒徑為120nm，顆粒濃度為100億顆粒/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物，其特征在于，所述干細(xì)胞外囊泡源于間充質(zhì)干細(xì)胞，具體為：

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物，其特征在于，所述組合物，還包括凍干保護(hù)劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物，其特征在于，所述組合物以霧化劑的形式使用，霧化劑中組合物的濃度為500-2000ug/ml。

7.一種如權(quán)利要求1所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物的制備方法，其特征在于，包括：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物的制備方法，其特征在于，具體為：

9.一種如權(quán)利要求1所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物、權(quán)利要求7所述的制備方法制備得到的霧化吸入組合物在制備呼吸系統(tǒng)疾病藥物或制劑中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物在降低炎癥因子il-1β、tnf-α水平的制備呼吸系統(tǒng)疾病藥物或制劑中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于干細(xì)胞治療藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于干細(xì)胞外囊泡的霧化吸入組合物及其制備方法、應(yīng)用，該組合物通過霧化吸入方式遞送至肺部，組分間的協(xié)同作用，能夠降低炎癥因子IL?1β、TNF?α水平，修復(fù)呼吸系統(tǒng)肺損傷，具有無(wú)創(chuàng)、安全性高、效果顯著等優(yōu)點(diǎn)，屬于再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新型治療手段，為呼吸系統(tǒng)疾病提供了革新性治療方案。

技術(shù)研發(fā)人員：李森朋,趙凱,孫美玉,高真真,劉爽
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東杰凱生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15