人工保存液置換血小板溶液的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及人工保存液置換血小板溶液的制造方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 為了輸血、血液制劑的制造而進行的獻(xiàn)血大致分為全血獻(xiàn)血和成分獻(xiàn)血。將通過 獻(xiàn)血采集的血液分離成各成分，由此制造各種血液制劑。血小板制劑指的是被濃縮的血小 板分散于血漿（主要成分為蛋白質(zhì)和水分）而成的溶液。血小板制劑中的血小板的濃度由 于比全血高3倍量以上，血小板之間有可能非常容易聚集。
[0003] 血小板制劑，為了血小板減少癥、血小板機能降低癥中的出血的預(yù)防、治療而用于 輸血?，F(xiàn)有的血小板制劑，取決于患者會引起蕁麻疹、發(fā)燒等變態(tài)反應(yīng)而成為問題。作為變 態(tài)反應(yīng)的主要原因，可列舉出血小板制劑中含有的蛋白質(zhì)，期待除去含有蛋白質(zhì)的血衆(zhòng)、置 換為人工保存液而成的人工保存液置換血小板溶液。
[0004] 上述人工保存液置換血小板溶液的制造方法，除了要求操作中血小板不會活化之 外，還要求高的血小板回收率、高的蛋白質(zhì)除去率。以往，作為除去血小板制劑的蛋白質(zhì)的 方法，通常為離心分離法。通過離心分離法除去了血小板制劑中的蛋白質(zhì)的情況下，暗示了 引起血小板活化的可能性，另外，利用離心法時，操作繁雜，需要相當(dāng)長的時間。但是，現(xiàn)在 的現(xiàn)狀在于，除了離心法以外，利用其它方法時，不能實用化。
[0005] 作為其它方法，考慮使用膜來分離的方法，作為膜分離的方法，存在血球（紅血 球、白血球、血小板）與血衆(zhòng)的分離（專利文獻(xiàn)1~3)等中使用的公知技術(shù)。專利文獻(xiàn)1， 為了防止紅血球的溶血而著眼于膜的溶脹性，公開了多孔膜使用不易溶脹的原材料的同時 使多孔膜中濕潤水分為極少量的技術(shù)。專利文獻(xiàn)2為規(guī)定膜的原纖維結(jié)構(gòu)或者使得血液流 量加快的技術(shù)。進而，專利文獻(xiàn)3,作為不易產(chǎn)生堵塞、污染的膜，著眼于親水性高分子，公開 了多孔膜中含有親水性高分子3~30質(zhì)量％而成的聚砜系樹脂多孔膜。無論怎樣，現(xiàn)有技 術(shù)中進行過濾的對象為全血，沒有將血小板制劑等容易聚集的溶液作為對象。進而，僅著眼 于膜，沒有關(guān)于分離方法的發(fā)現(xiàn)和暗示。
[0006] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)1 :日本特開昭62-290469號公報 專利文獻(xiàn)2 :日本特開昭54-15476號公報 專利文獻(xiàn)3 :日本特開昭61-238834號公報。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 發(fā)明要解決的問題 本發(fā)明的目的在于，提供具有血小板的活化抑制性能、高的血小板回收性能和高的血 漿除去性能的用于制造人工保存液置換血小板溶液的新方法。
[0008] 用于解決問題的方法 本申請發(fā)明人等進行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用以往的透析治療、分離性輸血 (apheresis)療法用途的分離膜時，制造人工保存液置換血小板溶液是非常困難的。作為其 原因，可列舉出膜的結(jié)構(gòu)設(shè)計不合適。以往的血液凈化用途的膜，是為了從以紅血球、白血 球、血小板、蛋白質(zhì)作為主要成分的全血除去尿素等低分子量物質(zhì)和一部分蛋白質(zhì)而制作 的。因此，不能除去分子量大的蛋白質(zhì)。
[0009]另外，若為了除去大量蛋白質(zhì)而與本來的使用條件相比將過濾量提高則會在中途 變得不能過濾。這是由于，在膜內(nèi)部，蛋白質(zhì)堵塞，在膜表面，形成血小板卷入蛋白質(zhì)而成的 堆積層（濾餅），由此過濾受到阻礙。
[0010] 形成堵塞、濾餅的原因在于，膜表面的孔小、分子量大的蛋白質(zhì)未穿過膜而停留于 膜表面、膜內(nèi)部，以及過濾的流量設(shè)計不合適使得血小板大量堆積于膜表面。另外，若過濾 受到阻礙則發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的除去量的減少、血小板損失的增加、活化血小板的增加。
[0011] 如此，本申請發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，需要使用符合血小板溶液、分離目的的結(jié)構(gòu)的分離膜 來設(shè)定分離條件。但是，用于除去血小板溶液中含有的蛋白質(zhì)的膜設(shè)計和分離條件迄今沒 有研究。因此，進一步反復(fù)深入研究，成功發(fā)現(xiàn)能夠在不活化血小板的情形下實現(xiàn)高的血小 板回收性能和高的血漿除去性能的分離條件，從而完成了本發(fā)明。
[0012]S卩，本發(fā)明提供一種人工保存液置換血小板溶液的制造方法，其具備：在下述式1 所示的條件下，使用與血小板溶液接觸的面的平均孔徑為0. 1ym以上且不足2. 0ym的分 離膜，以25~1500s1的入口壁面剪切速率對前述血小板溶液進行錯流過濾，得到濃縮血小 板溶液的過濾步驟；和將前述濃縮血小板溶液與人工保存液混合、得到人工保存液置換血 小板溶液的混合步驟， 1.0X10n〈(AXBV(yXyP)彡 2.5X1013(fAhr.m2.Pa))式1A:血小板溶液中所含的血小板濃度（個/mL，其中，8. 0X107~200X10 7個/mL) B:單位面積的過濾流量（mL/hr/m2)y:入口壁面剪切速率（s4 yP:血小板溶液的粘度（Pa_s)。
[0013] 另外，本發(fā)明提供一種人工保存液置換血小板溶液的制造方法，其具備：在下述式 1所示的條件下，使用與血小板溶液接觸的面的平均孔徑為〇. 1ym以上且不足2. 0ym的 分離膜，以25~1500s1的入口壁面剪切速率對前述血小板溶液進行錯流過濾，得到濃縮血 小板溶液的過濾步驟；使人工保存液與前述分離膜接觸，將在前述過濾步驟中未回收于濃 縮血小板溶液中的血小板回收于前述人工保存液中，得到含血小板的人工保存液的回收步 驟；和將血小板的人工保存液與前述濃縮血小板溶液混合、由此得到人工保存液置換血小 板溶液的混合步驟， 1.0X10n〈(AXBV(yXyP)彡 2.5X1013(fAhr.m2.Pa))式1A:血小板溶液中所含的血小板濃度（個/mL，其中，8. 0X107~200X10 7個/mL) B:單位面積的過濾流量（mL/hr/m2)y:入口壁面剪切速率（s4 yP:血小板溶液的粘度（Pa_s)。
[0014] 通過上述制造方法得到的人工保存液置換血小板溶液，優(yōu)選蛋白質(zhì)除去率（原來 的血小板溶液中的蛋白質(zhì)濃度作為100)為60%以上且人工保存液置換血小板溶液的CD62P 陽性血小板比率為60%以下，更優(yōu)選蛋白質(zhì)除去率為65%以上且人工保存液置換血小板溶 液的⑶62P陽性血小板比率為40%以下。在此，⑶62P陽性血小板比率越高則表示血小板 越活化。
[0015] 另外，上述過濾步驟中的膜間壓力差優(yōu)選為5.0X103Pa以下，上述分離膜的透水 性能優(yōu)選為35~150mL/hr/m2/Pa。
[0016] 進而，上述分離膜優(yōu)選為中空纖維膜，上述錯流過濾優(yōu)選為內(nèi)壓式錯流過濾，上述 中空纖維膜的內(nèi)徑優(yōu)選為100~500ym，上述中空纖維膜的有效長度優(yōu)選為5~50cm，上 述分離膜包含親水性聚合物，對于前述分離膜的與血小板溶液接觸的面、以90°測定角度 通過X射線電子分光法測定而得到的前述親水性聚合物存在量優(yōu)選為30~60質(zhì)量％。
[0017] 進而，本發(fā)明提供一種濃縮血小板溶液的制造方法，其具備：在下述式1所示的條 件下，使用與血小板溶液接觸的面的平均孔徑為〇. 1ym以上且不足2. 0ym的分離膜，以 25~1500s1的入口壁面剪切速率對前述血小板溶液進行錯流過濾，得到濃縮血小板溶液 的過濾步驟， 1.0X10n〈(AXBV(yXyP)彡 2.5X1013(fAhr.m2.Pa))式1A:血小板溶液中所含的血小板濃度（個/mL，其中，8. 0X107~200X10 7個/mL) B:單位面積的過濾流量（mL/hr/m2)y:入口壁面剪切速率（s4 yP:血小板溶液的粘度（Pa_s)。
[0018] 發(fā)明的效果 根據(jù)本發(fā)明的人工保存液置換血小板溶液的制造方法，即使并非全血、而是血小板制 劑等容易聚集的血小板溶液，也可以抑制血小板的活化的同時實現(xiàn)高的血小板回收率和高 的蛋白質(zhì)除去率，可以制造品質(zhì)良好的人工保存液置換血小板溶液。
【附圖說明】
[0019] 圖1的A)為實施例中使用的中空纖維膜的內(nèi)表面（血液接觸面）的10000倍的 掃描型電子顯微鏡圖像的一例。圖1的B)為將實施例中使用的中空纖維膜的內(nèi)表面（血 液接觸面）的10000倍的掃描型電子顯微鏡圖像填充（fill)并且二值化而得到的圖像的 一例。
【具體實施方式】
[0020] 本發(fā)明中，"血小板溶液"指的是在含有血漿的介質(zhì)中分散有血小板和蛋白質(zhì)的、 實質(zhì)上不含有紅血球和白血球的液體。介質(zhì)典型地說為血漿，但是人工保存液等緩沖液 也可以作為介質(zhì)的一部分含有。本發(fā)明中使用的血小板溶液的血小板濃度為8. 0X107~ 200X107個/mL。血小板溶液可以如下得到：通過將全血離心分離后、通入白血球除去過濾 器等的方法，除去紅血球和白血球，由此得到上述血小板溶液。通常作為血小板制劑已知的 制劑，為將經(jīng)過濃縮的血小板分散于血漿中而成的制劑，若血小板濃度處于上述范圍內(nèi)則 可以直接作為"血小板溶液"供于本發(fā)明的方法?；蛘?，本發(fā)明中，也可以使用血小板制劑 中含有的血漿的一部分被人工保存液置換而成的血小板溶液、預(yù)先混合人工保存液進行稀 釋而成的血小板溶液來作為血小板溶液。需要說明的是，血漿如該領(lǐng)域中周知那樣，指的是 由全血通過離心分離等手法除去紅血球、白血球、血小板而殘留的成分，主要成分為蛋白質(zhì) 和水分。
[0021] 本發(fā)明中，"人工保存液"指的是能夠作為分散血小板的介質(zhì)使用的人工的（非天 然的）溶液。用于血小板的人工保存液是公知的，作為具體例，可列舉出PASIII-M、M-S〇l、 生理鹽水、匕'力本4卜（注冊商標(biāo)）等通常作為輸液使用的溶液、進而A⑶-A液等含有檸檬 酸的溶液。但是不限于它們，若為具有適于血小板的保存的性能的溶液，即與血小板接觸 時、不會造成聚集塊的產(chǎn)生、滲透壓等所導(dǎo)致的血小板的破壞的溶液，則任意溶液都能夠用 作本發(fā)明中的"人工保存液"。
[0022] "人工保存液置換血小板溶液"指的是血小板溶液的介質(zhì)的大部分被人工保存液 置換而成的溶液。主要是作為血漿的介質(zhì)被置換為人工保存液，由此血小板溶液中的蛋白 質(zhì)質(zhì)量大幅降低。根據(jù)上述人工保存液置換血小板溶液的制造方法，可以得到防止血小板 的活化的同時如愿以償?shù)爻チ说鞍踪|(zhì)的人工保存液置換血小板溶液。另外，上述人工保 存液置換血小板溶液的制造方法中，優(yōu)選蛋白質(zhì)除去率為60%以上并且人工保存液置換血 小板溶液的⑶62P陽性血小板比率為60%以下，更優(yōu)選蛋白質(zhì)除去率為65%以上并且人工 保存液置換血小板溶液的⑶62P陽性血小板比率為40%以下。在此，⑶62P陽性血小板比率 越高則表示血小板越活化。⑶62P陽性血小板比率為60%以上時，血小板聚集，血小板機能 容易降低，因此不活化的制造方法是重要的。另外，若CD62P陽性血小板比率過低則血小板 的聚集機能有可能受損，因此人工保存液置換血小板溶液中的CD62P陽性血小板比率優(yōu)選 為1%以上，進一步優(yōu)選為3%以上。另外，原來的血小板溶液的⑶62P陽性血小板比率為1 時的人工保存液置換血小板溶液的⑶62P血小板比率的增加比為3. 0以下，優(yōu)選為2. 0以 下，進一步優(yōu)選為1.5以下。
[0023]本發(fā)明的人工保存液置換血小板溶液的制造方法中，使用與血小板溶液接觸的膜 表面的平均孔徑為0. 1iim以上且不足2. 0iim的分離膜，在下述式1所示的條件下，使得入 口壁面剪切速率為25~1500s15W血小板溶液進行錯流過濾。通過在這種條件下濃縮血小 板溶液，可以抑制血小板的活化的同時以高的效率達(dá)成蛋白質(zhì)的除去。 1.0X10n〈(AXBV(yXyP)<2.5X1013(fAhr.m 2.Pa))----SlA:血小板溶液中所含的血小板濃度[個/mL] (其中，8.0X107~200X10 7f/mL) B:單位面積的過濾流量[mL/hr/m2]y:入口壁面剪切速率[s1 yP:血小板溶液的粘度[Pa_s]。
[0024]通過過濾血小板溶液、制作除去血漿的血小板溶液時的最大問題在于，蛋白質(zhì)和 血小板堵塞膜。膜表面的平均孔徑為〇. 1ym以上且不足2. 0ym的情況下，堵塞的原因在 于，血小板堆積于表面、形成還卷入有蛋白質(zhì)的堆積層。將該堆積層稱為濾餅。若形成濾餅 則血漿的除去效率降低。進