使用sdf-1減輕瘢痕形成的制作方法
【專利說明】
[0001] 相關(guān)專利申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求2013年3月15日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)No. 61/793, 462的權(quán)益， 該專利申請(qǐng)全文以引用方式并入本文。
技術(shù)領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及促進(jìn)受試對(duì)象的創(chuàng)傷愈合的組合物及方法。
【背景技術(shù)】
[0004] 哺乳動(dòng)物組織的創(chuàng)傷（即撕裂傷或開口）會(huì)導(dǎo)致創(chuàng)傷面處的組織破壞和微脈管 系統(tǒng)凝血。這樣的組織修復(fù)表現(xiàn)出傷口處細(xì)胞有序受控的應(yīng)答反應(yīng)。所有軟組織創(chuàng)傷，無 論其大小如何，均以類似的方式愈合。組織生長和組織修復(fù)都是生物系統(tǒng)的生理過程，其 中細(xì)胞增殖與血管生成會(huì)在存在氧梯度的情況下發(fā)生。已靠研究詳盡闡明了組織修復(fù)期 間相繼出現(xiàn)的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，在某些情況下還將這些變化量化（Hunt，T.K.，etal.， "Coagulationandmacrophagestimulationofangiogenesisandwoundhealing，'，in TheSurgicalWound,pp. 1-18,ed.F.Dineen&G.Hildrick-Smith(Lea&Febiger,Philadelp hia: 1981) (Hunt,T.K.等人，"血管生成和創(chuàng)傷愈合期間的凝血作用和巨噬細(xì)胞刺激效應(yīng)"， 《手術(shù)創(chuàng)傷》，第1-18頁，F(xiàn).Dineen和G.Hildrick-Smith編輯，費(fèi)城Lea&Febiger出版社， 1981 年）。
[0005] 細(xì)胞形態(tài)由三個(gè)明顯不同的區(qū)域組成。沒有血管的中央創(chuàng)傷區(qū)域處于缺氧和酸中 毒狀態(tài)以及高碳酸血，而且乳酸水平較高。與創(chuàng)傷區(qū)域相鄰的是局部貧血（局部缺血）的 梯度區(qū)域，該區(qū)域由正在分裂的成纖維細(xì)胞構(gòu)成。梯度區(qū)域是最重要的區(qū)域，后面為合成活 性膠原蛋白的區(qū)域，該合成區(qū)域的特征是有成熟的成纖維細(xì)胞和大量新生毛細(xì)血管（即新 血管化）。盡管新血管生長（血管新生）是創(chuàng)傷組織愈合過程中必不可少的一步，然而天然 的血管生成因子通常不能長期支持組織修復(fù)的額外生物合成效應(yīng)。盡管有時(shí)需要?jiǎng)?chuàng)傷（即 重度燒傷、手術(shù)切口、撕裂傷和其他外傷）更快愈合，但迄今為止，使用藥劑加速創(chuàng)傷愈合 只獲得了有限的進(jìn)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明涉及治療受試對(duì)象的創(chuàng)傷并/或促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的方法和組合物。在此方 法中，將SDF-1以能有效促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的用量直接施用于創(chuàng)傷或創(chuàng)傷附近的細(xì)胞。所述創(chuàng) 傷可包括受試對(duì)象身體任意部位的任何損傷?？墒褂帽景l(fā)明方法治療的創(chuàng)傷的例子包括： 急性病癥或創(chuàng)傷，例如高溫灼傷、化學(xué)灼傷、輻射灼傷、過度暴露于紫外線輻射導(dǎo)致的灼傷 (如曬傷）；身體組織損傷，例如分娩生產(chǎn)過程造成的會(huì)陰損傷；醫(yī)療過程（例如外陰切開 術(shù)）中持續(xù)造成的損傷；外傷性損傷，包括割口、切口、擦傷；意外事故造成的持續(xù)性損傷； 術(shù)后損傷與慢性病癥，例如壓瘡、褥瘡、糖尿病和血液循環(huán)不良的相關(guān)病癥，以及所有類型 的痤瘡。此外，創(chuàng)傷還可包括皮炎，例如膿皰瘡、間擦疹、毛囊炎和濕疹；口腔手術(shù)創(chuàng)傷；牙 周??；外傷性創(chuàng)傷；以及腫瘤相關(guān)創(chuàng)傷。
[0007] 在本發(fā)明的一方面中，施用于創(chuàng)傷或創(chuàng)傷附近細(xì)胞的SDF-1用量可有效促進(jìn)或加 速創(chuàng)傷閉合和創(chuàng)傷愈合、減輕創(chuàng)傷瘢痕形成和/或創(chuàng)傷周圍瘢痕形成、抑制創(chuàng)傷周圍或附 近的細(xì)胞凋亡，并/或促進(jìn)受傷組織血管再生。SDF-1可施用于創(chuàng)傷附近的細(xì)胞，這些細(xì)胞 因組織損傷和/或外傷而含有上調(diào)的SDF-1受體。在本發(fā)明的一方面中，SDF-1受體可包 括CXCR4和/或CXCR7,并且SDF-1的施用量可有效增強(qiáng)細(xì)胞的Atk磷酸化效應(yīng)。
[0008] 在本發(fā)明的另一方面，SDF-1的施用方式可為在創(chuàng)傷附近的細(xì)胞中表達(dá)SDF-1和/ 或向創(chuàng)傷提供包含SDF-1的藥物組合物。可用編碼SDF-1的載體對(duì)創(chuàng)傷附近的細(xì)胞進(jìn)行基 因改造，讓這些細(xì)胞表達(dá)SDF-1?？捎镁幋aSDF-1的質(zhì)粒對(duì)創(chuàng)傷附近的細(xì)胞進(jìn)行基因改造， 讓這些細(xì)胞表達(dá)SDF-1。在一些實(shí)施例中，可使用具有SEQID勵(lì):6序列的0嫩質(zhì)粒在創(chuàng)傷 附近的細(xì)胞中表達(dá)SDF-1。
[0009] 本發(fā)明還涉及在受試對(duì)象創(chuàng)傷愈合期間抑制瘢痕形成的方法與組合物。在此方法 中，將SDF-1以能有效減輕創(chuàng)傷瘢痕形成和/或創(chuàng)傷周圍瘢痕形成的用量直接施用于創(chuàng)傷 或創(chuàng)傷附近的細(xì)胞。所述創(chuàng)傷可包括受試對(duì)象身體任意部位的任何損傷。可使用本發(fā)明方 法治療的創(chuàng)傷的例子包括：急性病癥或創(chuàng)傷，例如高溫灼傷、化學(xué)灼傷、福射灼傷、過度暴露 于紫外線輻射導(dǎo)致的灼傷（如曬傷）；身體組織損傷，例如分娩生產(chǎn)過程造成的會(huì)陰損傷； 醫(yī)療過程（例如外陰切開術(shù)）中持續(xù)造成的損傷；外傷性損傷，包括割口、切口、擦傷；意外 事故造成的持續(xù)性損傷；術(shù)后損傷與慢性病癥，例如壓瘡、褥瘡、糖尿病和血液循環(huán)不良的 相關(guān)病癥，以及所有類型的痤瘡。此外，創(chuàng)傷還可包括皮炎，例如膿皰瘡、間擦疹、毛囊炎和 濕疹；口腔手術(shù)創(chuàng)傷；牙周??；外傷性創(chuàng)傷；以及腫瘤相關(guān)創(chuàng)傷。
[0010] 在本發(fā)明的一方面中，施用于創(chuàng)傷或創(chuàng)傷附近細(xì)胞的SDF-1用量可有效促進(jìn)或加 速創(chuàng)傷閉合和創(chuàng)傷愈合、減輕創(chuàng)傷組織瘢痕纖維化和/或創(chuàng)傷周圍組織瘢痕纖維化、抑制 創(chuàng)傷周圍或附近的細(xì)胞凋亡，并/或促進(jìn)受傷組織血管再生。SDF-1可施用于創(chuàng)傷附近的 細(xì)胞，這些細(xì)胞因組織損傷和/或外傷的正調(diào)節(jié)而具有SDF-1受體。在本發(fā)明的一方面中， SDF-1受體可包括CXCR4和/或CXCR7,并且SDF-1的施用量可有效增強(qiáng)細(xì)胞的Atk磷酸化 效應(yīng)。
[0011] 在本發(fā)明的另一方面，SDF-1的施用方式可為在創(chuàng)傷附近的細(xì)胞中表達(dá)SDF-1和/ 或向創(chuàng)傷提供包含SDF-1的藥物組合物?？蛇x用載體、質(zhì)粒DNA、電穿孔和表達(dá)SDF-1的納 米粒子中至少一種，對(duì)創(chuàng)傷附近的細(xì)胞進(jìn)行基因改造，讓這些細(xì)胞表達(dá)SDF-1。在一些實(shí)施 例中，可使用具有SEQIDN0:6序列的DNA質(zhì)粒在創(chuàng)傷附近的細(xì)胞中表達(dá)SDF-1。
[0012] 本發(fā)明還涉及促進(jìn)或加速受試對(duì)象的創(chuàng)傷閉合的方法和組合物。在此方法中，將 SDF-1以能有效促進(jìn)創(chuàng)傷閉合的用量直接施用于創(chuàng)傷或創(chuàng)傷附近的細(xì)胞。所述創(chuàng)傷可包 括受試對(duì)象身體任意部位的任何損傷?？墒褂帽景l(fā)明方法治療的創(chuàng)傷的例子包括：急性病 癥或創(chuàng)傷，例如高溫灼傷、化學(xué)灼傷、輻射灼傷、過度暴露于紫外線輻射導(dǎo)致的灼傷（如曬 傷）；身體組織損傷，例如分娩生產(chǎn)過程造成的會(huì)陰損傷；醫(yī)療過程（例如外陰切開術(shù)）中 持續(xù)造成的損傷；外傷性損傷，包括割口、切口、擦傷；意外事故造成的持續(xù)性損傷；術(shù)后損 傷與慢性病癥，例如壓瘡、褥瘡、糖尿病和血液循環(huán)不良的相關(guān)病癥，以及所有類型的痤瘡。 此外，創(chuàng)傷還可包括皮炎，例如膿皰瘡、間擦疹、毛囊炎和濕疹；口腔手術(shù)創(chuàng)傷；牙周??；外 傷性創(chuàng)傷；以及腫瘤相關(guān)創(chuàng)傷。
[0013] 在本發(fā)明的一方面中，施用于創(chuàng)傷或創(chuàng)傷附近細(xì)胞的SDF-1用量可有效促進(jìn)或加 速創(chuàng)傷閉合和創(chuàng)傷愈合、減輕創(chuàng)傷瘢痕形成和/或創(chuàng)傷周圍瘢痕形成、抑制創(chuàng)傷周圍或附 近的細(xì)胞凋亡，并/或促進(jìn)受傷組織血管再生。SDF-1可施用于創(chuàng)傷附近的細(xì)胞，這些細(xì)胞 因組織損傷和/或外傷的正調(diào)節(jié)而具有SDF-1受體。在本發(fā)明的一方面中，SDF-1受體可 包括CXCR4和/或CXCR7,并且SDF-1的施用量可有效增強(qiáng)細(xì)胞的Atk磷酸化效應(yīng)。
[0014] 在本發(fā)明的另一方面，SDF-1的施用方式可為在創(chuàng)傷附近的細(xì)胞中表達(dá)SDF-1和/ 或向創(chuàng)傷提供包含SDF-1的藥物組合物?？蛇x用載體、質(zhì)粒DNA、電穿孔和表達(dá)SDF-1的納 米粒子中至少一種，對(duì)創(chuàng)傷附近的細(xì)胞進(jìn)行基因改造，讓這些細(xì)胞表達(dá)SDF-1。在一些實(shí)施 例中，可使用具有SEQIDN0:6序列的DNA質(zhì)粒在創(chuàng)傷附近的細(xì)胞中表達(dá)SDF-1。
[0015] 本發(fā)明還涉及用于促進(jìn)受試對(duì)象的創(chuàng)傷愈合的局部用和/或局限性制劑。將該制 劑施用于創(chuàng)傷后，其中包含的SDF-1用量能有效促進(jìn)創(chuàng)傷閉合并抑制創(chuàng)傷瘢痕化。
[0016] 所述創(chuàng)傷可包括受試對(duì)象身體任意部位的任何損傷?？墒褂帽景l(fā)明方法治療的 創(chuàng)傷的例子包括：急性病癥或創(chuàng)傷，例如高溫灼傷、化學(xué)灼傷、輻射灼傷、過度暴露于紫外線 輻射導(dǎo)致的灼傷（如曬傷）；身體組織損傷，例如分娩生產(chǎn)過程造成的會(huì)陰損傷；醫(yī)療過程 (例如外陰切開術(shù)）中持續(xù)造成的損傷；外傷性損傷，包括割口、切口、擦傷；意外事故造成 的持續(xù)性損傷；術(shù)后損傷與慢性病癥，例如壓瘡、褥瘡、糖尿病和血液循環(huán)不良的相關(guān)病癥， 以及所有類型的痤瘡。此外，創(chuàng)傷還可包括皮炎，例如膿皰瘡、間擦疹、毛囊炎和濕疹；口腔 手術(shù)創(chuàng)傷；牙周?。煌鈧詣?chuàng)傷；以及腫瘤相關(guān)創(chuàng)傷。
[0017] 創(chuàng)傷中的SDF-1量也可有效促進(jìn)或加速創(chuàng)傷愈合、減輕創(chuàng)傷瘢痕形成和/或創(chuàng)傷 周圍瘢痕形成、抑制創(chuàng)傷周圍或附近的細(xì)胞凋亡，并/或促進(jìn)受傷組織血管再生。在本發(fā)明 的一方面中，SDF-1可為蛋白質(zhì)形式，也可為施用于創(chuàng)傷附近細(xì)胞后可促進(jìn)細(xì)胞表達(dá)SDF-1 的質(zhì)粒形式。
【附圖說明】
[0018] 在參照附圖閱讀下面的【具體實(shí)施方式】后，本發(fā)明相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)能夠理 解本發(fā)明的上述特征及其他特征。
[0019] 圖1示出了釋放SDF-1支架加速創(chuàng)傷愈合的照片。
[0020] 圖2示出了使用SDF-1蛋白質(zhì)支架、SDF-1血漿支架、鹽水支架處理豬組織創(chuàng)傷一 段時(shí)間后，以及未使用支架處理的豬組織創(chuàng)傷在同樣一段時(shí)間后的創(chuàng)傷愈合百分率圖。
[0021] 圖3示出了在受試對(duì)象出現(xiàn)創(chuàng)傷后使用JVS-100處理創(chuàng)傷28天，得到的瘢痕總體 積（A)、瘢痕最大高度⑶和瘢痕表面積（C)的數(shù)據(jù)圖示。
[0022] 圖4示出了在受試對(duì)象出現(xiàn)創(chuàng)傷后使用JVS-100處理創(chuàng)傷28天，得到的瘢痕顏色 (A)、瘢痕紋理（B)和曼徹斯特瘢痕分級(jí)評(píng)定（C)的數(shù)據(jù)圖示（從這些評(píng)估中排除了開裂程 度超過70 %的創(chuàng)傷）。
[0023] 圖5示出了在受試對(duì)象出現(xiàn)開裂程度超過60%的創(chuàng)傷后使用JVS-100處理創(chuàng)傷 28天，得到的曼徹斯特瘢痕分級(jí)評(píng)定結(jié)果（A)、瘢痕紋理分?jǐn)?shù)（B)和瘢痕輪廓分?jǐn)?shù)（C)。
[0024] 圖6示出了在受試對(duì)象出現(xiàn)創(chuàng)傷后使用JVS-100處理創(chuàng)傷90天，得到的瘢痕紋理 (A)、瘢痕輪廓（B)、瘢痕顏色（C)、瘢痕畸變（D)和總體曼徹斯特瘢痕分級(jí)（E)的數(shù)據(jù)圖示。
[0025] 示例性實(shí)施例的詳細(xì)描述
[0026] 除非另有定義，否則本文所用的所有技術(shù)術(shù)語具有的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同。通常所理解的分子生物學(xué)術(shù)語的定義可 見于例如：Riegeretal. ,GlossaryofGenetics:ClassicalandMolecular, 5th edition,Springer_Verlag:NewYork, 1991(Rieger等人，《經(jīng)典分子遺傳學(xué)詞匯表》，第 5 版，紐約斯普林格出版社，1991 年）；和Lewin,GenesV，OxfordUniversityPress:New York, 1994 (Lewin，《基因5》，紐約牛津大學(xué)出版社，1994年）。
[0027] 本文描述了涉及常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)的方法。此類技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的， 在以下方法學(xué)專著中有詳細(xì)描述，例如MolecularCloning:ALaboratoryManual, 2nd ed. ,vol. 1-3,ed.Sambrooketal. ,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpring Harbor,N.Y. , 1989 (《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》，第二版，第1-3卷，Sambrook等人編輯，紐約冷 泉