一種治療肝癌的含銀杏酚藥物組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥組合物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及抗肝癌的藥物組合物，尤其設(shè)及用順 銷和銀杏酪聯(lián)合作用來治療肝癌和得到一系列抗肝癌的組合藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，在惡性腫瘤死亡排序中占第2位。目前，肝癌的 治療方法主要包括手術(shù)治療、放射化療、化學(xué)治療和免疫治療等。其中，手術(shù)治療仍是各種 療法中療效最好的手段。但是，由于臨床所見肝癌患者就診時已進展至中晚期，能進行手術(shù) 切除的肝癌尚不足25% ;因此放療和化療仍是臨床上治療肝瘤的主要手段。順銷是臨床上 常用的化療藥物，雖然療效確切，但其在殺滅腫瘤細胞的同時對機體正常細胞也造成損傷， 引起機體免疫等多種功能的嚴(yán)重下降，劑量依賴的毒性很大，另外在治療過程中也給患者 造成很大的痛苦，使順銷的使用受到一定的限制。如何減輕順銷的毒副作用、提高化療效 果，減輕化療給患者帶來的痛苦，提高患者生存質(zhì)量、延長生存周期，是肝癌綜合治療應(yīng)該 解決的問題。因此，研究新一代低毒、高選擇性、耐藥性低的抗肝癌藥物W及改進治療方法 成為肝癌治療的當(dāng)務(wù)之急。
[0003] 中醫(yī)自古W來對疾病的認(rèn)識就是將人作為一個整體看待而進行施治，顧及疾病的 轉(zhuǎn)變，"治此臟而顧他臟"，中醫(yī)有"乙癸同源，肝腎同治"理論，而肝腎陰虛是原發(fā)性肝癌的 發(fā)病基礎(chǔ)，并貫穿疾病發(fā)展全程，因此治療上是共同進行、相互兼顧。中西醫(yī)結(jié)合治療腫瘤 的優(yōu)勢:可加入輔助治療全程參與腫瘤治療，減毒增效，防止復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，扶正固本、提高免 疫力，從而達到提高療效、減少不良反應(yīng)的目的。因此，對化療藥物具有減毒增效、扶正固本 作用的中藥逐漸成為中西醫(yī)結(jié)合臨床治療腫瘤研究的熱點。
[0004] 銀杏(Ginkgo biloba L.)又稱白果、公孫樹，是我國特有的古老植物資源。其葉、 果均可入藥，據(jù)《本草》記載，銀杏作為藥用已有六百多年的歷史。銀杏酪(ginkgols)也稱白 果酪，是從中藥銀杏中分離得到的一種有效成分，其結(jié)構(gòu)式I為：
[0006]在實驗中，我們發(fā)現(xiàn)銀杏酪在體外表現(xiàn)出良好的抑制腫瘤細胞增殖和遷移的作 用;連續(xù)作用十代，未使腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性。采用腹腔注射給藥形式，W不同劑量的銀杏 酪治療荷H22肝癌小鼠均可抑制實體瘤的生長(王云飛，楊小明，等.銀杏酪對SMMC-7721肝 癌細胞和荷H22肝癌小鼠的抗癌作用.江蘇大學(xué)學(xué)報醫(yī)學(xué)版.2013，23(5): 233-237 . Xiao-Ming Yang,Yun-Fei Wang,Yue-Ying Li,Hai-Le Ma.Thermal stability of ginkgolic acids from Ginkgol biloba and the effects of ginkgol Cl?: Ion the apoptosis and migration of SMMC7721cells.Fitoterapia.2014,98,66-76.)D前期預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)，銀 杏酪具有一定的增強免疫功能的作用;體外抗腫瘤實驗結(jié)果也顯示，銀杏酪與順銷聯(lián)合使 用可顯著提高順銷對腫瘤細胞殺傷能力。如果在使用順銷的同時加入銀杏酪，在確保同樣 療效的情況下減少順銷使用劑量，就有可能大大減緩順銷劑量依賴的毒副作用，達到減毒 增效的作用；同時銀杏酪可W提高受藥者的免疫功能，運無疑將大大促進中西醫(yī)結(jié)合在肝 癌治療上的進展。
[0007] 因此本發(fā)明考慮將銀杏酪與順銷聯(lián)合使用，應(yīng)用于肝癌的治療。到目前為止，尚未 見有銀杏酪減輕順銷所致免疫抑制的文獻報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種通過聯(lián)合用藥降低毒性、增強療效的治療肝癌的方法。
[0009] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種具有抗肝癌活性并且毒性低的抑制肝癌的藥物 組合物。
[0010] 本發(fā)明所提出的抗肝癌藥物組合物，是由從中藥銀杏中得到的具有抗肝癌活性的 銀杏酪與順銷組成。
[0011] 上述抗肝癌藥物組合物中活性成分由銀杏酪和順銷組成，銀杏酪與順銷的質(zhì)量比 為2~11:1。
[001^ 上述抗肝癌藥物組合物中，活性成分銀杏酪與順銷質(zhì)量比為2:1、4:1時，為體外抗 腫瘤的最優(yōu)藥物組合，顯示出協(xié)同抑制肝癌細胞生長作用。
[OOU]上述抗肝癌藥物組合物中，活性成分銀杏酪用量為10~40mg/kg體重，順銷用量為 3.75mg/kg體量。W蔽下接種肝癌細胞的昆明種小鼠為載體，給藥的有效劑量在13.75~ 43.75mg/kg體重之間，用藥方式為隔天腹腔注射，用藥時間為10天。二者聯(lián)合使用后不僅具 有協(xié)同抗腫瘤效果，而且降低了順銷在免疫方面的毒副作用。
[0014] 上述抗肝癌藥物組合物可W直接在肝癌治療中作為聯(lián)合藥物。
[0015] 本發(fā)明的抗肝癌藥物組合物的組成成分可W同時、分開或順序給藥。
[0016] 本發(fā)明提供的抗肝癌藥物制劑，W從中藥銀杏中得到的銀杏酪為活性成分，并輔 W可接受的注射液如順銷組合而成。
【附圖說明】
[0017] 圖1顯示了銀杏酪的結(jié)構(gòu)式。
[001引圖2顯示了不同濃度銀杏酪對化pG2細胞生長的抑制作用。
[0019] 圖3顯示了順銷與不同濃度銀杏酪聯(lián)用對化pG2細胞生長的協(xié)同效應(yīng)。
[0020] 圖4顯示了銀杏酪和順銷治療過程中對荷化PS小鼠移植瘤體積的影響。
[00川圖5顯示了銀杏酪和順銷治療對荷化PS小鼠血清中IFN-丫、IL-2、TNF-a因子水平 的影響。
【具體實施方式】
[0022] 通過如下實施例對本發(fā)明抗肝癌藥物組合物的技術(shù)作進一步的描述：
[0023] 實施例1:
[0024] 該例闡述抗肝癌藥物制劑中活性成分銀杏酪的制備。
[0025] 實驗材料:銀杏外種皮采自江蘇省鎮(zhèn)江市，200-300目柱層析硅膠，及其它試劑均 購自上海化學(xué)試劑有限公司，分析純，使用前未再進行處理。
[0026] 實驗方法:稱取干銀杏外種皮100g粉碎，5倍量石油酸超聲萃取S次，每次化，合并 提取液，揮去溶劑成石油酸浸膏。將浸膏W少量石油酸溶解后上樣于硅膠柱（(63.2 X 40cm)，W石油酸：乙酸：甲酸= 89:11: l(v/v/v)洗脫，W薄層層析在254皿處出現(xiàn)巧光為檢 ，收集銀杏酸組分。
[0027] 取l.Og銀杏酸和0.02g Ca(0H)2混于一個50ml的單頸燒瓶中，浸入135~140°C的 油浴中，攬拌反應(yīng)2小時后，冷卻至室溫，用3. Oml石油酸萃取；取W上得到的產(chǎn)物，溶于 4.5ml甲醇中，加25 %的氨水2.8ml，攬拌15min。溶液用己燒(4 X 2.8ml)萃取。有機層用5 % HCl (1.4ml)洗，再用1.4ml蒸饋水洗。濾液用無水化S〇4干燥，濃縮，得到銀杏酪，于4°C保存 待使用。
[0028] 銀杏酪可用少量DMSO溶解，W生理鹽水稀釋，順銷用生理鹽水進行稀釋，或按照適 當(dāng)質(zhì)量用量比（2~11:1)進行預(yù)混合。
[0029] 實施例2:
[0030] 該例驗證銀杏酪體外對化pG2細胞(人肝癌細胞株)生長的抑制作用
[0031] 實驗材料:人肝癌細胞株化pG2購自中科院上海細胞庫，由江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院保存。 銀杏酪同系物由本實驗室自銀杏外種皮中提取化PLC含量>95% ) ;DMEM細胞培養(yǎng)液、胎牛血 清購于Gibco公司；膜蛋白酶購自Invihogen公司；-20°C保存；嚷挫藍(MTT)、Giemsa染料； 二甲基諷(簡稱DMSO)。
[0032] 實驗方法:取對數(shù)生長期化pG2細胞，0.25 %膜蛋白酶消化，用DMEM完全培養(yǎng)液稀 釋調(diào)整成5X IO4個/ml濃度的單細胞懸液，于96孔板中每孔加細胞懸液10化1，W無細胞的 完全培養(yǎng)液為空白組。置于37°C，5 % C02的細胞培養(yǎng)箱中，待細胞貼壁后，分別加入5、10、 20、40、8化g/ml的銀杏酪培養(yǎng)2地，加入5mg/ml的MTT(用PBS稀釋)溶液IOiil，繼續(xù)避光培養(yǎng) 地，吸去培養(yǎng)液，每孔加入10化1 DMSO，水平搖床輕微震蕩IOmin使結(jié)晶物充分溶解后，于酶 聯(lián)免疫標(biāo)記儀上測570nm處吸光度。每濃度設(shè)復(fù)孔6個，平行測定=次，W不用藥物處理的細 胞為對照組，按照下式（1)計算抑制率，SPSS16.0軟件計算ICso。
[0034] 數(shù)據(jù)處理方法:采用SPSS17.0軟件系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用方差分析，數(shù) 據(jù)7 ± S表示，WP<〇. 05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0035] 實驗結(jié)果:見圖2不同濃度銀杏