一種殺鮭氣單胞菌滅活疫苗及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于魚(yú)用生物制品與養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)病害防控技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種殺鮭氣單胞菌滅活疫苗及其應(yīng)用。滅活疫苗抗原為殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種C4(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida)，菌株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年3月19日，保藏編號(hào)CGMCC No.7335。本發(fā)明滅活疫苗可有效誘導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并提供有效的保護(hù)，制備本發(fā)明的殺鮭氣單胞菌滅活疫苗所使用材料成本低，對(duì)環(huán)境與宿主安全。CGMCC No. 733520130319
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種殺鮭氣單胞菌滅活疫苗及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于魚(yú)用生物制品與養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)病害防控技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種殺鮭氣單 胞菌滅活疫苗及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)是一種革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌，屬弧 菌科、氣單胞菌屬。殺鮭氣單胞菌是一種重要的魚(yú)類(lèi)病原菌，其宿主包括鮭鱒魚(yú)類(lèi)、鯉科魚(yú) 類(lèi)、梭魚(yú)、鱸魚(yú)以及比目魚(yú)等，可以引起養(yǎng)殖和野生魚(yú)類(lèi)發(fā)生嚴(yán)重的疥瘡病/潰爛病，造成魚(yú) 類(lèi)大量死亡。參照伯杰氏細(xì)菌分類(lèi)手冊(cè)，殺鮭氣單胞菌被分為5個(gè)亞種，分別是Aeromonas salmonicida subsp·salmonicida、Aeromonas salmonicida subsp.masoucida、Aeromonas salmonicida subsp.achromogenes、Aeromonas salmonicida subsp·smithia、Aeromonas salmonicida subsp.pectinolytica。不同亞種引起的魚(yú)類(lèi)疾病各不相同，具有較強(qiáng)的亞種 差異性，由殺娃氣單胞菌殺娃亞種(Aeromonas salmonicida subsp · salmonicida)引起的 病害一般被稱(chēng)為癤?。‵urunculosis)，而由其他亞種引起的病害一般被稱(chēng)為潰爛病 (Ulcer)。在歐洲引起鱒鮭魚(yú)類(lèi)病害的殺鮭氣單胞菌多為殺鮭亞種，在亞洲報(bào)道的魚(yú)類(lèi)殺鮭 氣單胞菌病原主要是殺日本鮭亞種。由于病原具有很強(qiáng)的地域多樣性，在不同地區(qū)獲得的 病原分離株抗原性差異較大，殺鮭氣單胞菌不同亞種之間也存在很多生理生化特征差異。 目前，在歐洲使用的殺鮭氣單胞菌疫苗都是以殺鮭亞種菌株為抗原制備的，國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有 關(guān)于以殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種為抗原制備疫苗的文獻(xiàn)報(bào)道。
[0003] 作為一種重要的魚(yú)類(lèi)病原，殺鮭氣單胞菌給我國(guó)魚(yú)類(lèi)健康養(yǎng)殖帶來(lái)巨大危害。制 備適于我國(guó)魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖病害防控應(yīng)用的殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活疫苗十分必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種殺鮭氣單胞菌滅活疫苗及其應(yīng)用。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用技術(shù)方案為：
[0006] -種殺鮭氣單胞菌滅活疫苗，其特征在于:滅活疫苗抗原為殺鮭氣單胞菌殺日本 娃亞種C4(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida)，菌株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏 管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年3月19日，保藏編號(hào)CGMCC No. 7335，分類(lèi)學(xué)命 名：殺娃氣單胞菌Aeromonas salmonicida。 地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
[0007] 所述滅活疫苗抗原為殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種菌株經(jīng)甲醛溶液滅活獲得。
[0008] 所述滅活疫苗為乳化疫苗的水相和乳化疫苗的油相以體積比1:1~1:2比例混合； 其中，乳化疫苗的水相內(nèi)含滅活疫苗抗原懸液，滅活抗原懸液中細(xì)菌細(xì)胞終濃度大于2 X 108cells/ml〇
[0009] 所述乳化疫苗的水相為將Tween-80加入到滅活疫苗抗原懸液中，攪拌混勾，得到 乳化疫苗的水相;其中，滅活疫苗抗原懸液占水相體積比的94%-98%，Tween-80占水相體 積比的2 %-6 %;
[0010] 乳化疫苗的油相為運(yùn)動(dòng)粘度7-13的疫苗用白油、Span-80和硬脂酸鋁混合，而后加 熱至硬脂酸鋁溶化，得到熟化的疫苗油相;其中，運(yùn)動(dòng)粘度7-13的疫苗用白油添加量為油相 體積的92%-96%，Span-80添加量為油相體積的4%-8%，硬脂酸鋁添加量為其硬脂酸鋁與 油相質(zhì)量體積比1.5%-2.5%。
[0011] -種殺鮭氣單胞菌滅活疫苗的應(yīng)用，所述疫苗在預(yù)防殺鮭氣單胞菌引起的養(yǎng)殖魚(yú) 類(lèi)疾病的滅活疫苗中的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明將殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種菌株依次經(jīng)活化、培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)和甲醛滅 活后，將滅活后的殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種細(xì)菌細(xì)胞離心使用無(wú)菌水重懸，使用常規(guī)方 法分別制備疫苗的水相與油相，并乳化得到所述殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活油乳化疫 苗。
[0013] 本發(fā)明采用抗原為滅活的殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種，所述菌株保藏于中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年3月19日，保藏號(hào)為CGMCC No. 7335，分離自發(fā)病的大西洋鮭病灶，具有極強(qiáng)致病性，其形態(tài)、生理生化、16SrRNA基因序 列進(jìn)化發(fā)育分析、PCR鑒定等特征與殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種的特征符合。
[0014] 該菌株在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h的菌落呈圓形、半透明、略呈白色，表面光滑、邊緣整 齊，直徑約〇.8_，革蘭氏染色陰性，短桿狀，無(wú)鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，參見(jiàn)表1、圖1)
[0015] 表1:細(xì)菌CGMCC No .7335的生理生化特征

[0018] 注："+"表示反應(yīng)為陽(yáng)性，表示反應(yīng)為陰性。
[0019] 本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)如下：
[0020] 1.本發(fā)明采用分離自發(fā)病魚(yú)病灶處的殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCC No.7335 制備的滅活疫苗免疫魚(yú)，誘導(dǎo)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，可增強(qiáng)養(yǎng)殖魚(yú)抵抗殺鮭氣單 胞菌殺日本鮭亞種感染的能力，提供保護(hù)效應(yīng)。
[0021 ] 2.本發(fā)明的殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活疫苗，可以使免疫魚(yú)獲得抵抗殺鮭氣 單胞菌殺鮭亞種感染的能力，提供交叉保護(hù)效應(yīng)。
[0022] 3.本發(fā)明的殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活疫苗，采用滅活方法制備抗原，有效 保留細(xì)菌表面抗原，并且具有很好的安全性，不存在環(huán)境安全問(wèn)題。
[0023] 4.本發(fā)明的殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活油乳疫苗，采用常規(guī)疫苗制備工藝， 通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)、制備水相、制備油相、乳化等環(huán)節(jié)制備疫苗，所采用的工藝簡(jiǎn)單、成本較低， 可應(yīng)用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
[0024] 5.本發(fā)明的疫苗接種方式是注射免疫，注射免疫是目前被認(rèn)為最為有效的魚(yú)用疫 苗接種方式，結(jié)合成熟的疫苗接種平臺(tái)，可以方便并有效地使宿主獲得免疫保護(hù)。
[0025] 6.本發(fā)明殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活油乳疫苗;所提供的疫苗可以是魚(yú)類(lèi)宿 主抵抗由殺鮭氣單胞菌引起的疾病，可用于海水、淡水養(yǎng)殖階段的魚(yú)類(lèi)，具有高效、安全性 好、保護(hù)率尚的優(yōu)點(diǎn)，從而彌補(bǔ)目如的廣品空白。
【附圖說(shuō)明】
[0026]圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的用掃描電鏡觀(guān)察本發(fā)明殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種 CGMCC No.7335的形態(tài)圖。
[0027]圖2為本發(fā)明實(shí)施例提供的不同濃度抗原的本發(fā)明殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅 活油乳疫苗免疫大西洋鮭的保護(hù)效果圖。
[0028]圖3為本發(fā)明實(shí)施例提供的使用本發(fā)明殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活疫苗免疫 楓葉鮭對(duì)殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCCN0.7335的保護(hù)效果圖。
[0029]圖4為本發(fā)明實(shí)施例提供的使用本發(fā)明殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活疫苗免疫 楓葉鮭對(duì)殺鮭氣單胞菌殺鮭亞種NCHMBl 102的保護(hù)效果圖。
[0030] 圖5為本發(fā)明實(shí)施例提供的使用本發(fā)明殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活疫苗免疫 大西洋鮭與未免疫大西洋鮭在入海后的累積死亡情況圖。
[0031] 圖6為本發(fā)明實(shí)施例提供的使用本發(fā)明殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種滅活疫苗免疫 大西洋鮭后其血清抗體效價(jià)變化情況圖。
【具體實(shí)施方式】
[0032]下面根據(jù)【附圖說(shuō)明】和實(shí)施例、應(yīng)用例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0033] 實(shí)施例1
[0034] 殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCC No.7335經(jīng)過(guò)復(fù)壯，挑取單菌落接種至LB液體 培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)24-48小時(shí)，加入終濃度為0.3 %甲醛室溫滅活48小時(shí)，5000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速 離心10分鐘，用無(wú)菌水洗滌、并用無(wú)菌水重懸菌體至濃度為109cell S/ml，即得到滅活疫苗 抗原。
[0035] 取19.2ml上述滅活疫苗抗原懸液，加入0.8ml滅菌Tween-80攪拌混勾，制備成乳化 疫苗的水相;而后用疫苗用白油18.8ml，1.2mlSpan-80，0.4g硬脂酸鋁相混合，加熱使硬脂 酸鋁完全溶化，滅菌制備成乳化疫苗的油相;使用磁力攪拌器5000rpm轉(zhuǎn)速，將等體積的油 相緩慢加入到水相中，攪拌10分鐘形成乳白色油包水性油乳疫苗。
[0036] 實(shí)施例2
[0037] 殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCC No.7335經(jīng)過(guò)復(fù)壯，挑取單菌落接種至LB液體 培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)24-48小時(shí)，加入終濃度為0.3 %甲醛室溫滅活48小時(shí)，5000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速 離心10分鐘，用無(wú)菌水洗滌、并用無(wú)菌水重懸菌體至濃度為109cell S/ml，即得到滅活疫苗 抗原。
[0038] 取19.6ml上述滅活疫苗抗原懸液，加入0.4ml滅菌Tween-80攪拌混勾，制備成乳化 疫苗的水相;而后用疫苗用白油38.4ml，1.6mlSpan-80，0.6g硬脂酸錯(cuò)相混合，加熱使硬脂 酸鋁完全溶化，滅菌制備成乳化疫苗的油相;使用分散機(jī)1000 Orpm轉(zhuǎn)速，將40ml的油相緩慢 加入到20ml水相中，攪拌3分鐘形成乳白色油包水性油乳疫苗。
[0039] 實(shí)施例3 [0040]步驟1)疫苗注射
[0041 ]按照上述實(shí)施例1中疫苗的制備方法制備疫苗，疫苗水相中滅活疫苗抗原分別設(shè) 置高濃度疫苗抗原（抗原細(xì)胞濃度I X IO8Ce 11 s/ml)、低濃度疫苗抗原（抗原細(xì)胞濃度I X 105cells/ml)以及無(wú)滅活疫苗抗原的無(wú)抗原疫苗（即，水相為無(wú)菌水和Tween-80)，以無(wú)抗 原疫苗作為對(duì)照。
[0042] 將300尾大西洋鮭(體重尾35g-40g)隨機(jī)分為3組，每組100尾。將這3組分別命名為 高濃度組、低濃度組和對(duì)照組。將高濃度組的每尾大西洋鮭腹腔注射1〇〇μ1抗原細(xì)胞濃度1 X IO8Cell s/ml的疫苗，將低濃度組的每尾大西洋鮭腹腔注射100μΙ抗原細(xì)胞濃度I X 105cellS/ml的疫苗，將對(duì)照組的每尾大西洋鮭腹腔注射100μ1無(wú)抗原的乳液。
[0043]步驟2)細(xì)菌懸液制備
[0044] 在LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCC No. 7335至0D600為 〇 . 8，然后離心（5000轉(zhuǎn)/分鐘，室溫，IOmin)，收集菌體，將其懸浮于PBS中至終濃度為5 X 107cfu/ml，即為殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCC No. 7335懸液。
[0045] 步驟3)攻毒感染
[0046] 在上述各組大西洋鮭按照步驟1)注射疫苗30天后，分別再向上述高濃度組、低濃 度組和對(duì)照組的大西洋鮭各20尾，肌肉注射100μΙ上述步驟2)的細(xì)菌懸液。持續(xù)觀(guān)察10天， 記錄各組死亡情況(參見(jiàn)圖2)。
[0047]由圖2可見(jiàn)，注射感染殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCC No.7335后10天內(nèi)，高濃 度抗原疫苗免疫的大西洋鮭沒(méi)有死亡;低濃度抗原疫苗免疫的大西洋鮭累計(jì)死亡5尾;對(duì)照 大西洋鮭累積死亡16尾。根據(jù)以下公式計(jì)算相對(duì)免疫保護(hù)率(RPS):
[0048] RPS= (1-免疫組累計(jì)死亡率/對(duì)照組累計(jì)死亡率）X 100%
[0049] 結(jié)果顯示高濃度抗原疫苗使大西洋鮭獲得100%保護(hù)效果，低濃度抗原疫苗使大 西洋鮭獲得75%保護(hù)效果。
[0050] 實(shí)施例4
[0051] 步驟1)疫苗注射
[0052]按照實(shí)施例2疫苗的制備方法制備疫苗水相中滅活疫苗抗原濃度I X 109cellS/ml 的疫苗，以及無(wú)滅活疫苗抗原的無(wú)抗原疫苗（即，水相為無(wú)菌水和Tween-80)，以無(wú)抗原疫苗 作為對(duì)照。
[0053] 將200尾楓葉鮭(60g-80g)隨機(jī)分為2組，每組100尾。將這2組分別命名為免疫組和 對(duì)照組。將免疫組的每尾楓葉鮭腹腔注射1〇〇μ1抗原細(xì)胞濃度I X IO9CelIs/ml的疫苗，將對(duì) 照組的每尾楓葉鮭腹腔注射100μΙ無(wú)抗原的乳液。
[0054]步驟2)細(xì)菌懸液制備
[0055] 在LB液體培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCCNo. 7335與殺鮭氣 單胞菌殺鮭亞種NCHMBl 102至0D600為0.8，然后分別離心(5000轉(zhuǎn)/分鐘，室溫，IOmin)，收集 菌體，分別將兩個(gè)細(xì)菌懸浮于PBS中至終濃度為5 X 107cfu/ml，即分別為殺鮭氣單胞菌殺日 本鮭亞種CGMCC No.7335懸液與殺鮭氣單胞菌殺鮭亞種NCHMBl 102懸液。
[0056] 步驟3)攻毒感染
[0057] 在上述各組大西洋鮭按照步驟1)注射疫苗30天后，分別取上述免疫組和對(duì)照組各 20尾的楓葉鮭，肌肉注射100μΙ上述步驟2)的殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCC No.7335的 懸液；另，再分別取免疫組和對(duì)照組各20尾楓葉鮭，肌肉注射100μΙ上述步驟2)的殺鮭氣單 胞菌殺鮭亞種ΜΠΜΒ1102的懸液。持續(xù)觀(guān)察10天，記錄各組死亡情況(參見(jiàn)圖3)。
[0058] 其中，NCMB 1102,保藏在英國(guó)國(guó)家工業(yè)與海洋細(xì)菌保藏中心（公司）（National Collection of Industrial and Marine Bacteria(NCIMB)Ltd)，保藏日期：1962年 10月26 日。保藏地：英國(guó)阿伯?。‵erguson Building,Craibstone Estate,Bucksburn,Aberdeen)
[0059] 由圖3可見(jiàn)，疫苗免疫楓葉鮭對(duì)殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCC No.7335的免疫 保護(hù)率為70 %;
[0060] 由圖4可見(jiàn)，疫苗免疫楓葉鮭對(duì)殺鮭氣單胞菌殺鮭亞種NCHMBl 102的免疫保護(hù)率為 50% 〇
[0061 ] 實(shí)施例5
[0062]步驟1)疫苗注射
[0063]按照實(shí)施例2的制備方式，分別制備滅活疫苗抗原濃度I X 109cellS/ml的疫苗以 及無(wú)滅活疫苗抗原的無(wú)抗原疫苗（即，水相為無(wú)菌水和Tween-80)，以無(wú)抗原疫苗作為對(duì)照。 [0064] 將40000尾大西洋鮭(35g-40g)隨機(jī)分為2組，每組20000尾。將這2組分別命名為免 疫組和對(duì)照組。將免疫組的每尾大西洋鮭腹腔注射100μΙ滅活疫苗抗原細(xì)胞濃度I X I O9Ce 11 s/ml的疫苗，將對(duì)照組的每尾大西洋鮭腹腔注射100μΙ無(wú)抗原的乳液。
[0065] 步驟2)標(biāo)記與養(yǎng)殖生產(chǎn)
[0066] 使用紅色熒光標(biāo)記物在免疫組大西洋鮭眼部注射標(biāo)記，使用綠色熒光標(biāo)記物在對(duì) 照組大西洋鮭眼部注射標(biāo)記。
[0067] 將標(biāo)記的免疫組和對(duì)照組大西洋鮭混在一起養(yǎng)殖于生產(chǎn)車(chē)間（初始密度5kg/m3水 體，水溫14°C_16°C)，通過(guò)標(biāo)記物區(qū)分免疫組與對(duì)照組死亡大西洋鮭，持續(xù)記錄生產(chǎn)過(guò)程中 由于殺鮭氣單胞菌引起大西洋鮭死亡的累積死亡率(參見(jiàn)圖5)。
[0068]由圖5可見(jiàn)，至接種疫苗后190天，免疫大西洋鮭的累積死亡率為4.66%，明顯低于 未免疫大西洋鮭的累積死亡率52.43 %。
[0069]免疫后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月、6個(gè)月、10個(gè)月、11個(gè)月、12個(gè)月采集免 疫大西洋鮭與未免疫大西洋鮭血液制備血清，通過(guò)ELISA方法檢測(cè)抗體效價(jià)(參見(jiàn)圖6) [0070]由圖6可見(jiàn)，免疫大西洋鮭抗殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種CGMCCN0.7335的抗體效 價(jià)在免疫后1個(gè)月時(shí)明顯升高，至免疫后第5個(gè)月達(dá)到最高，在免疫后12個(gè)月時(shí)，免疫大西洋 鮭血清抗體效價(jià)仍然明顯高于對(duì)照組大西洋鮭血清抗體效價(jià)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種殺鮭氣單胞菌滅活疫苗，其特征在于：滅活疫苗抗原為殺鮭氣單胞菌殺日本鮭 亞種C^4(Aeromonas salmonicida subsp .masoucida)，菌株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管 理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年3月19日，保藏編號(hào)CGMCC No.7335。2. 按權(quán)利要求1所述的殺鮭氣單胞菌滅活疫苗，其特征在于:所述滅活疫苗抗原為殺鮭 氣單胞菌殺日本鮭亞種菌株經(jīng)甲醛溶液滅活獲得。3. 按權(quán)利要求1或2所述的殺鮭氣單胞菌滅活疫苗，其特征在于:所述滅活疫苗為乳化 疫苗的水相和乳化疫苗的油相以體積比1:1~1:2比例混合;其中，乳化疫苗的水相內(nèi)含滅 活疫苗抗原懸液，滅活抗原懸液中細(xì)菌細(xì)胞終濃度大于2 X 108cellS/ml。4. 按權(quán)利要求3所述的殺鮭氣單胞菌滅活疫苗，其特征在于： 所述乳化疫苗的水相為將Tween-80加入到滅活疫苗抗原懸液中，攪拌混勻，得到乳化 疫苗的水相；其中，滅活疫苗抗原懸液占水相體積比的94 %-98 %，Tween-80占水相體積比 的 2%-6%; 乳化疫苗的油相為運(yùn)動(dòng)粘度7-13的疫苗用白油、Span-80和硬脂酸鋁混合，而后加熱至 硬脂酸鋁溶化，得到熟化的疫苗油相;其中，運(yùn)動(dòng)粘度7-13的疫苗用白油添加量為油相體積 的92%-96%，Span-80添加量為油相體積的4%-8%，硬脂酸鋁添加量其與油相質(zhì)量體積比 1.5%-2.5%〇5. -種權(quán)利要求1所述的殺鮭氣單胞菌滅活疫苗的應(yīng)用，其特征在于:所述疫苗在預(yù)防 殺鮭氣單胞菌引起的養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)疾病的滅活疫苗中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K39/106GK106075419SQ201610412249
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月14日 公開(kāi)號(hào)201610412249.2, CN 106075419 A, CN 106075419A, CN 201610412249, CN-A-106075419, CN106075419 A, CN106075419A, CN201610412249, CN201610412249.2
【發(fā)明人】肖鵬, 張麗娜, 孫斌, 王先平, 杜以帥, 孫明哲, 王順奎, 于凱松, 劉鷹
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院海洋研究所