專利名稱：一種海蘭地嗪的提取方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥提取分離技術領域，特別涉及一種海蘭地嗪的提取方法。
背景技術：
海蘭地嗪(Hernandezine)，又名金絲馬尾連堿甲，分子式為C39H44N2O7，分子量為652. 79，是一種異喹啉類生物堿，mp. 120_122°C。主要存在于毛茛科唐松草屬植物中，如偏翅唐松草、金絲馬尾連、波斯唐松草等多種植物中。金絲馬尾連Thalictrum glandulosissimum(yin. et Gagn. )ff. T. Wang etS. H. Wang，別名多腺唐松草，分布在我國云南大理一代，海蘭地嗪主要從金絲馬尾連中提取分離得到。 藥理研究表明，海蘭地嗪體外對膠原、ADP、A23187和AA誘導的大鼠血小板聚集有明顯的抑制作用，由于海蘭地嗪不抑制AA誘導的大鼠血小板MD的生成，因而其抗血小板聚集作用與AA環(huán)氧酶代謝途徑無關。馬氏等試驗表明，海蘭地嗪能升高兔血小板cAMP水平，抑制凝血酶誘導的人血小板胞漿內游離鈣濃度升高，結果提示海蘭地嗪可能通過增加血小板cAMP水平和抑制細胞內鈣水平而抑制血小板聚集。徐承熊等研究發(fā)現海蘭地嗪還具有抗腫瘤活性，初步研究表明，海蘭地嗪可使Gl細胞進入S期受阻，海蘭地嗪對癌細胞主要起殺傷作用，作用24h后損傷不可逆。經文獻檢索，尚未發(fā)現海蘭地嗪的工業(yè)化提取純化方法的相關報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種海蘭地嗪的提取方法。本發(fā)明是通過以下技術方案加以實現的
(1)將金絲馬尾連原料粉碎，加0.4 -1. 2 %鹽酸或硫酸水溶液浸泡3 - 5 h，超聲處理30-60min,過濾得到提取液；
(2)提取液上陽離子交換樹脂柱，先用去離子水洗至中性，再用堿性醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮；
(3)濃縮液調節(jié)pH至10-11，用氯仿萃取，取有機層，回收氯仿，干燥得到粗品；
(4)以正丁醇-丙醇-水為溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜儀分離粗品中的海蘭地嗪，收集目標成分，濃縮干燥得到海蘭地嗪粗晶；
(5)粗晶采用制備型液相色譜分離，紫外在線檢測，收集目標成分，低溫干燥即得海蘭地嗪純品。步驟(2)中所述陽離子交換樹脂可選D151、HZD-2或HD-8中的一種。步驟(2)中所述堿性醇溶液為pH9-ll的乙醇水溶液，其中乙醇的體積百分比濃度為 75-90%。步驟(4)中所述溶劑系統(tǒng)正丁醇-丙醇-ρΗ8· 5氨水的體積比為(6-8) : (1-2):(8-11 )，下相為固定相，上相為流動相。
步驟(5)中所述制備液相的流動相為甲醇-ο. 1%氨水溶液，體積比為77:23，紫外檢測波長為208nm。本發(fā)明的有益效果是
(1)本發(fā)明采用酸水浸提，可有效減少雜質的溶出，采用超聲處理，提取時間短、提率
聞;
(2)高速逆流色譜和制備型液相色譜結合進行分離純化，分離效果好，產品純度高，可實現工業(yè)自動化生產。
具體實施例方式 下面結合具體實施例對本發(fā)明進行說明。
實施例I :
將金絲馬尾連的干燥根粉碎，取2kg,加I. 0%鹽酸水溶液浸泡4h,超聲處理40min,過濾得到的提取液上HZD-2陽離子交換樹脂，先用去離子水洗至中性，再用8LpH10的85%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，調PH至10. 5，用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按體積比為7:2:10混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調節(jié)轉速調節(jié)850rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2ml/min，收集海蘭地嗪流分，濃縮、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成濃度為25mg/ml的溶液，經O. 45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，以C8鍵合相為柱填料，粒徑為10 μ m,柱長為15cm、直徑為4cm,六通閥進樣,進樣體積為25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液為流動相，體積比為77:23，控制流速為30ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為208nm，收集目標成分，低溫干燥，得到純度為99. 1%的海蘭地嗪。實施例2:
將金絲馬尾連的干燥根粉碎，取2kg,加O. 5%鹽酸水溶液浸泡3h,超聲處理45min,過濾得到的提取液上D-151陽離子交換樹脂，先用去離子水洗至中性，再用8LpH9的75%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，調PH至11. O，用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按體積比為6:1:8混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調節(jié)轉速調節(jié)850rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2ml/min，收集海蘭地嗪流分，濃縮、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成濃度為25mg/ml的溶液，經O. 45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，以C8鍵合相為柱填料，粒徑為10 μ m,柱長為15cm、直徑為4cm,六通閥進樣,進樣體積為25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液為流動相，體積比為77:23，控制流速為40ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為208nm，收集目標成分，低溫干燥，得到純度為98. 5%的海蘭地嗪。實施例3:
將金絲馬尾連的干燥根粉碎，取5kg,加I. 2%硫酸水溶液浸泡5h,超聲處理60min,過濾得到的提取液上HD-8陽離子交換樹脂，先用去離子水洗至中性，再用20LpHll的90%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，調PH至10.0，用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按體積比為6:2:10混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調節(jié)轉速調節(jié)850rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2ml/min，收集海蘭地嗪流分，濃縮、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成濃度為25mg/ml的溶液，經O. 45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，以C8鍵合相為柱填料，粒徑為10 μ m,柱長為15cm、直徑為4cm,六通閥進樣,進樣體積為25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液為流動相，體積比為77:23，控制流速為20ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為208nm，收集目標成分，低溫干燥，得到純度為99. 3%的海蘭地嗪。實施例4:
將金絲馬尾連的干燥根粉碎，取10kg，加O. 8%鹽酸水溶液浸泡4h，超聲處理50min，過濾得到的提取液上HZD-2陽離子交換樹脂，先用去離子水洗至中性，再用40LpH9的90%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，調PH至10. 2，用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按體積比為8:1:8混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調節(jié)轉速調節(jié)850rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2ml/min，收集海蘭地嗪流分，濃縮、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成濃度為25mg/ml的溶液，經O. 45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，以C8鍵合相為柱填料，粒徑為10 μ m,柱長為15cm、直徑為4cm,六通閥進樣,進樣體積為25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液為流動相，體積比為77:23，控制流速為45ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為208nm，收集目標成分，低溫干燥，得到純度為98. 2%的海蘭地嗪。`實施例5:
將金絲馬尾連的干燥根粉碎，取10kg，加O. 4%硫酸水溶液浸泡5h，超聲處理30min，過濾得到的提取液上HD-8陽離子交換樹脂，先用去離子水洗至中性，再用40LpHll的75%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，調PH至10. 8，用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按體積比為8:2:10混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調節(jié)轉速調節(jié)850rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2ml/min，收集海蘭地嗪流分，濃縮、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成濃度為25mg/ml的溶液，經O. 45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，以C8鍵合相為柱填料，粒徑為10 μ m,柱長為15cm、直徑為4cm,六通閥進樣,進樣體積為25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液為流動相，體積比為77:23，控制流速為35ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為208nm，收集目標成分，低溫干燥，得到純度為98. 8%的海蘭地嗪。實施例6:
將金絲馬尾連的干燥根粉碎，取20kg，加I. 0%硫酸水溶液浸泡3h，超聲處理35min，過濾得到的提取液上D151陽離子交換樹脂，先用去離子水洗至中性，再用80LpH10的75%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，調PH至11. 0，用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按體積比為7:1:9混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調節(jié)轉速調節(jié)850rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2ml/min，收集海蘭地嗪流分，濃縮、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成濃度為25mg/ml的溶液，經O. 45 μ m微濾膜過濾，得到樣品溶液，以C8鍵合相為柱填料，粒徑為10 μ m,柱長為15cm、直徑為4cm,六通閥進樣,進樣體積為25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液為流動相，體積比為77:23，控制流速為30ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為208nm，收集目標成分，低溫干燥，得到純度為98. 4%的海蘭地嗪。
權利要求
1.一種海蘭地嗪的提取方法，其特征在于包括以下步驟 (1)將金絲馬尾連原料粉碎，加0.4 -1. 2 %鹽酸或硫酸水溶液浸泡3 - 5 h，超聲處理30-60min,過濾得到提取液； (2)提取液上陽離子交換樹脂柱，先用去離子水洗至中性，再用堿性醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮； (3)濃縮液調節(jié)pH至10-11，用氯仿萃取，取有機層，回收氯仿，干燥得到粗品； (4)以正丁醇-丙醇-水為溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜儀分離粗品中的海蘭地嗪，收集目標成分，濃縮干燥得到海蘭地嗪粗晶； (5)粗晶采用制備型液相色譜分離，紫外在線檢測，收集目標成分，低溫干燥即得海蘭地嗪純品。
2.根據權利要求I所述的一種海蘭地嗪的提取方法，其特征在于步驟(2)中所述陽離子交換樹脂可選D151、HZD-2或HD-8中的一種。
3.根據權利要求I所述的一種海蘭地嗪的提取方法，其特征在于步驟(2)中所述堿性醇溶液為PH9-11的乙醇水溶液，其中乙醇的體積百分比濃度為75-90%。
4.根據權利要求I所述的一種海蘭地嗪的提取方法，其特征在于步驟(4)中所述溶劑系統(tǒng)正丁醇-丙醇-PH8. 5氨水的體積比為(6-8 ) : (1-2): (8_11)，下相為固定相，上相為流動相。
5.根據權利要求I所述的一種海蘭地嗪的提取方法，其特征在于步驟(5)中所述制備液相的流動相為甲醇-O. 1%氨水溶液，體積比為77:23，紫外檢測波長為208nm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種海蘭地嗪的提取方法，它是將金絲馬尾連原料粉碎，加0.4-1.2%鹽酸或硫酸水溶液提取，提取液上陽離子交換樹脂柱，先用去離子水洗至中性，再用堿性醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，調pH10-11，用氯仿萃取，萃取液濃縮后再采用高速逆流色譜和制備型液相色譜分離，收集目標成分，低溫干燥即得海蘭地嗪產品。本發(fā)明能耗低，污染少，產品含量高，可達98%以上，為工業(yè)自動化生產提供了可能。
文檔編號C07D491/18GK102875561SQ201210363078
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月26日 優(yōu)先權日2012年9月26日
發(fā)明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業(yè)發(fā)展有限公司