一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟：（1）吸附；（2）洗滌；（3）洗脫；（4）分離；（5）除蛋白質(zhì)；（6）沉淀。本發(fā)明提供的制備方法以來源廣泛的豬小腸黏膜為原料，成本低廉。本發(fā)明使用聚丙烯腈膜進行分離，不僅可節(jié)約大量乙醇，降低生產(chǎn)成本，而且制備的肝素鈉精品純度高，保證了肝素的活性。
【專利說明】一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，涉及一種肝素鈉的提取方法，具體涉及一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素主要從牛肺或豬小腸黏膜提取，是一種由葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替組成的黏多糖硫酸脂。肝素通過與抗凝血酶III結(jié)合使其暴露精氨酸反應(yīng)中心，與活化的凝血因子結(jié)合使其滅活，主要滅活X a和II a因子。肝素主要用于預防和治療血栓栓塞性疾病，如心肌梗塞、肺栓塞、腦血管栓塞、外周靜脈血栓等，可防止血栓的形成和擴大。還可用于DIC的早期及其它體內(nèi)外的抗凝。
[0003]目前，肝素鈉主要是從豬、羊小腸黏膜和牛肺、腌腸衣鹽水等中提取。其提取方法最常用的是鹽解或酶解-離子交換-乙醇沉淀法，但這兩種方法普遍存在回收率低、純度不高的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種設(shè)計合理、方法可靠的從豬小腸中提取肝素鈉的方法。
[0005]為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟:
[0006](I)吸附:
[0007]稱取豬小腸黏膜置反應(yīng)鍋中,加水稀釋,用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9.0~9.5，加熱至沸，保持10~15min，降溫至35°C~45°C，同時濾液虹吸至反應(yīng)池中，加入5~10%樹脂，保溫攪拌吸附8~IOh ;
[0008](2)洗滌:
[0009]取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用；
[0010](3)洗脫:
[0011]取步驟(2)的固體加入0.8~1.5mol/L氯化鈉洗滌I~3h，浙干后，加入3~5mol/L氯化鈉I~3倍量，攪拌洗脫5h，浙干后再洗脫2次，合并全部洗脫液；
[0012](4)分離:
[0013]將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30~40ml/min，并使膜上部分占總體積的10~20%時，停止抽濾；
[0014](5)除蛋白質(zhì):
[0015]取膜上截留部分，加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；
[0016](6)沉淀:
[0017]取步驟(5)的濾液，加入I~2倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
[0018]作為本發(fā)明的改進，步驟(1)中所述樹脂為D204樹脂。
[0019]上述步驟(3)中洗脫2次時，每次加入3~5mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、lh。
[0020]上述步驟(4)的聚丙烯腈膜為截留Mr3000~4000的聚丙烯腈膜。
[0021]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有益效果為:
[0022]本發(fā)明提供的制備方法以來源廣泛的豬小腸黏膜為原料，成本低廉。本發(fā)明使用聚丙烯腈膜進行分離，不僅可節(jié)約大量乙醇，降低生產(chǎn)成本，而且制備的肝素鈉精品純度高，保證了肝素的活性。
【具體實施方式】
[0023]為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實施例如下。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明了，所述實施例僅僅用于幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對本發(fā)明的具體限制。
[0024]如無具體說明，本發(fā)明的各種原料均可以通過市售得到；或根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備得到。除非另有定義或說明，本文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領(lǐng)域技術(shù)熟練入員所熟悉的意義相同。此外任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。
[0025]除非另有定義或說明，本文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員所熟悉的意義相同。此外任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。
[0026]實施例1
[0027]—種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟:
[0028](I)吸附:
[0029]稱取豬小腸黏膜500kg置反應(yīng)鍋中，加水稀釋,用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9.0~9.5，加熱至沸，保持15min，降溫至35°C，同時濾液虹吸至反應(yīng)池中，加入10% D204樹脂樹脂，保溫攪拌吸附IOh;
[0030](2)洗滌:
[0031]取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用；
[0032](3)洗脫:
[0033]取步驟(2)的固體加入lmol/L氯化鈉洗滌I~3h，浙干后，加入4mol/L氯化鈉I~3倍量，攪拌洗脫5h，浙干后再洗脫2次，每次加入4mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、lh，合并全部洗脫液。
[0034](4)分離:
[0035]將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用Mr3000~4000的聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30ml/min，并使膜上部分占總體積的15%時，停止抽濾；
[0036](5)除蛋白質(zhì):
[0037]取膜上截留部分，按DC — W: TQ= 1.0:50.0~1.0:80.0的比例加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；[0038](6)沉淀:
[0039]取步驟(5)的濾液，加入1.5倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
[0040]本發(fā)明的提取方法與常規(guī)的鹽解-離子交換-乙醇沉淀法相比較，節(jié)約乙醇85%左右，回收率要提高20%以上，回收率比本行業(yè)常規(guī)使用的膜分離法提高1%以上。
[0041]實施例2
[0042]一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟:
[0043](I)吸附:
[0044]稱取豬小腸黏膜500kg置反應(yīng)鍋中，加水稀釋,用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9.0，加熱至沸，保持15min，降溫至45°C，同時濾液虹吸至反應(yīng)池中，加入10% D204樹脂樹月旨，保溫攪拌吸附IOh ；
[0045](2)洗滌:
[0046]取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用；
[0047](3)洗脫:
[0048]取步驟(2)的固體加入0.8mol/L氯化鈉洗滌3h，浙干后，加入4mol/L氯化鈉3倍量，攪拌洗脫5h，浙干后 再洗脫2次，每次加入4mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、lh，合并全部洗脫液。
[0049](4)分離:
[0050]將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用Mr3000~4000的聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30ml/min，并使膜上部分占總體積的10%時，停止抽濾；
[0051](5)除蛋白質(zhì):
[0052]取膜上截留部分，按DC — W: TQ= 1.0:50.0~1.0:80.0的比例加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；
[0053](6)沉淀:
[0054]取步驟(5)的濾液，加入1.5倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
[0055]實施例3
[0056]一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟:
[0057](I)吸附:
[0058]稱取豬小腸黏膜500kg置反應(yīng)鍋中，加水稀釋,用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至
9.5，加熱至沸，保持15min，降溫至35°C，同時濾液虹吸至反應(yīng)池中，加入10% D204樹脂樹月旨，保溫攪拌吸附IOh ；
[0059](2)洗滌:
[0060]取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用；
[0061](3)洗脫:
[0062]取步驟(2)的固體加入1.5mol/L氯化鈉洗滌I~3h，浙干后，加入4mol/L氯化鈉2倍量，攪拌洗脫5h，浙干后再洗脫2次，每次加入4mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、Ih，合并全部洗脫液。
[0063](4)分離:
[0064]將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用Mr3000~4000的聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30ml/min，并使膜上部分占總體積的20%時，停止抽濾；
[0065](5)除蛋白質(zhì):
[0066]取膜上截留部分，按DC — W: TQ= 1.0:50.0~1.0:80.0的比例加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；
[0067](6)沉淀:
[0068]取步驟(5)的濾液，加入2倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
[0069] 申請人:聲明，所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在上述實施例的基礎(chǔ)上，將上述實施例某組分的具體含量點值，與
【發(fā)明內(nèi)容】
部分的技術(shù)方案相組合，從而產(chǎn)生的新的數(shù)值范圍，也是本發(fā)明的記載范圍之一， 本申請為使說明書簡明，不再羅列這些數(shù)值范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)吸附: 稱取豬小腸黏膜置反應(yīng)鍋中，加水稀釋，用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9.0~9.5，加熱至沸，保持10~15min,降溫至35°C~45°C,同時濾液虹吸至反應(yīng)池中，加入5~10%樹脂，保溫攪拌吸附8~IOh; (2)洗漆: 取步驟(1)吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，浙干備用; (3)洗脫: 取步驟(2)的固體加入0.8~1.5mol/L氯化鈉洗漆I~3h,浙干后,加入3~5mol/L氯化鈉I~3倍量，攪拌洗脫5h，浙干后再洗脫2次，合并全部洗脫液； (4)分離: 將步驟(3)的洗脫液在攪拌的情況下使用聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30~40ml/min，并使膜上部分占總體積的10~20%時，停止抽濾； (5)除蛋白質(zhì): 取膜上截留部分，加入DC-W，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀； (6)沉淀: 取步驟(5)的濾液，加入I~2倍的95%乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95%乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
2.按照權(quán)利要求1所述一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于:步驟(1)中所述樹脂為D204樹脂。
3.按照權(quán)利要求1所述一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于:所述步驟(3)中洗脫2次時，每次加入3~5mol/L氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、lh。
4.按照權(quán)利要求1所述一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于:所述步驟(4)的聚丙烯腈膜為截留Mr3000~4000的聚丙烯腈膜。
【文檔編號】C08B37/10GK103588901SQ201310532605
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】方蕊 申請人:安徽工貿(mào)職業(yè)技術(shù)學院