一種酶解法提取分離肝素鈉的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種酶解法提取分離肝素鈉的方法，其特征在于，是將豬小腸洗凈，絞碎，加入等體積的水，制得小腸原液；活化生物酶，得到生物酶液；按30mL生物酶液和10～15L小腸原液的比例混合，調(diào)節(jié)pH值至8.0～9.0，加熱至45～55℃，再加入膠原蛋白酶10～20mL，保溫2～4小時，繼續(xù)加熱至85～90℃，保溫4小時，過濾收集反應(yīng)液；干燥制得肝素鈉粗品。其中酶解過程中加入膠原蛋白酶，分階段提高酶解溫度，充分保證肝素與雜蛋白連接鍵的斷裂。采用該技術(shù)方法能夠提高產(chǎn)品回收率；生產(chǎn)過程環(huán)保節(jié)約，適用于工業(yè)生產(chǎn)。
【專利說明】一種酶解法提取分離肝素鈉的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及有機高分子化合物的制備方法，特別是一種酶解法提取分離肝素鈉的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是由豬或牛的腸粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質(zhì)，為白色或類白色粉末，無臭無味，有吸濕性，易溶于水，不溶于乙醇、乙醚、丙酮和苯等有機溶劑。
[0003]目前肝素是世界上最有效和臨床用量最大的抗凝血藥物，主要應(yīng)用于心腦血管疾病和血液透析治療，其中在血液透析治療中是唯一有效的特效藥物。臨床應(yīng)用及研究顯示，肝素除具有抗凝血作用外，還具有其他多種生物活性和臨床用途，包括降血脂作用、抗中膜平滑肌細胞增生、促進纖維蛋白溶解等作用。
[0004]現(xiàn)有傳統(tǒng)的肝素鈉生產(chǎn)工藝是酶解提取，鹽析精制。即通過胰酶胃酶在適宜的pH和溫度條件下酶解提取原料豬小腸中的肝素，獲得肝素粗品原液。肝素粗品原液在一定溫度下，由于鹽溶液的加入，雜蛋白與肝素的連接鍵不斷打開，同時鈉離子與肝素反應(yīng)結(jié)合生成肝素鈉，產(chǎn)品得以精制純化。該工藝簡單，方便，成本低。但其主要缺點在于肝素回收率低，含有大量肝素的鹽解液回收利用率低， 產(chǎn)生了大量的廢料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種回收率高，廢料少的酶解法提取分離肝素鈉的方法。
[0006]實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)解決方案為:
[0007]—種酶解法提取分離肝素鈉的方法，包括以下步驟:
[0008]步驟一、原料處理；將豬小腸用清水洗凈，絞碎成糜狀，攪拌加入等體積的水，制得小腸原液；
[0009]步驟二、活化生物酶；取生物酶原液，用NaOH溶液調(diào)pH值至8.0~9.0，靜置I~2小時，收集得到生物酶液，備用；
[0010]步驟三、酶解；將30mL生物酶液和10~15L小腸原液倒入反應(yīng)釜中，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0~9.0，加熱至45~55°C，再加入膠原蛋白酶10~20mL，保溫2~4小時，繼續(xù)加熱至85~90°C，保溫4小時，過濾收集反應(yīng)液，備用；
[0011]步驟四、干燥；將反應(yīng)液干燥制得肝素鈉粗品。
[0012]其中，步驟一所述原料處理過程中可加入濃度為0.lwt%的防腐劑I~2ml。
[0013]其中，步驟一所述原料處理過程中豬小腸來源于新鮮或冷凍豬小腸。
[0014]其中，步驟二所述生物酶原液直接取自碾碎的豬胰臟或者用市售的胃酶和胰酶，按照1:2的質(zhì)量比例配制。
[0015]其中，步驟三所述酶解過程加熱至45~55°C時，優(yōu)選加入膠原蛋白酶15mL，保溫3小時。[0016]其中，步驟四可采用冷凍干燥或真空干燥的方法制得肝素鈉粗品。
[0017]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點:酶解過程中加入膠原蛋白酶，采用分階段加熱的方法，保證肝素與雜蛋白連接鍵的充分裂解，提高肝素回收率；反應(yīng)過程中沒有用到乙醇、鹽、樹脂洗脫液等傳統(tǒng)工藝常用的溶劑，所得中間反應(yīng)液均可回收利用，將“綠色化學(xué)”的思想運用于整個提取工藝，盡量少使用有機溶劑，使肝素鈉的提取工藝簡潔明晰，易于工業(yè)化。
【具體實施方式】
[0018]實施例一
[0019]步驟一:原料處理。將8kg新鮮豬小腸用清水洗凈，絞碎成糜狀，并在充分攪拌下，加入等體積的水混合，再加入I~2ml濃度為0.lwt%的防腐劑混合均勻，制得小腸原液。
[0020]步驟二:活化生物酶。取豬的胰臟，越新鮮越好，碾碎，加入NaOH溶液，調(diào)pH值至
8.0~9.0，靜置I~2小時。
[0021]步驟三:酶解。將30mL生物酶液和約15L小腸原液倒入反應(yīng)釜中加熱，加入NaOH溶液，調(diào)節(jié)PH值至8.5，加熱至50°C，再加入膠原蛋白酶15mL，保溫3小時，繼續(xù)加熱至85~900C，保溫4小時，過濾收集反應(yīng)液。
[0022]步驟四:干燥。將反應(yīng)液冷凍干燥制得肝素鈉粗品5.6kg。
[0023]按照《中國藥典》方法測定肝素鈉效價，可得肝素鈉粗品回收率達70.2%。
[0024]實施例二`
[0025]步驟一:原料處理。將8kg新鮮豬小腸用清水洗凈，絞碎成糜狀，并在充分攪拌下，加入等體積的水混合，制得小腸原液。
[0026]步驟二:活化生物酶。用市售的胃酶和胰酶，按照1:2的質(zhì)量比例進行配制，制得30mL生物酶原液。加入NaOH溶液，調(diào)pH值至8.0~9.0，靜置I~2小時，收集得到生物酶液。
[0027]步驟三:酶解。將30mL生物酶液和約12L小腸原液倒入反應(yīng)釜中加熱，加入NaOH溶液，調(diào)節(jié)PH值為8.5，加熱至50°C，再加入膠原蛋白酶15mL，保溫2小時，繼續(xù)加熱至85~900C，保溫4小時，過濾收集反應(yīng)液。
[0028]步驟四:干燥。將反應(yīng)液真空干燥制得肝素鈉粗品4.9kg。
[0029]按照《中國藥典》方法測定肝素鈉效價，可得肝素鈉粗品回收率達66.9%。
【權(quán)利要求】
1.一種酶解法提取分離肝素鈉的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一、原料處理；將豬小腸用清水洗凈，絞碎成糜狀，攪拌加入等體積的水，制得小腸原液； 步驟二、活化生物酶；取生物酶原液，用NaOH溶液，調(diào)pH值至8.0~9.0，靜置I~2小時，收集得到生物酶液，備用； 步驟三、酶解；將30mL生物酶液和10~15L小腸原液倒入反應(yīng)釜中，用NaOH溶液，調(diào)節(jié)pH值至8.0~9.0，加熱至45~55°C，再加入膠原蛋白酶10~20mL，保溫2~4小時，繼續(xù)加熱至85~90°C，保溫4小時，過濾收集反應(yīng)液，備用； 步驟四、干燥；將反應(yīng)液干燥制得肝素鈉粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述酶解法提取分離肝素鈉的方法，其特征在于，步驟一原料處理過程加入濃度為0.lwt%的防腐劑I~2ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述酶解法提取分離肝素鈉的方法，其特征在于，步驟一原料處理過程中的豬小腸來源于新鮮或冷凍的豬小腸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述酶解法提取分離肝素鈉的方法，其特征在于，步驟二生物酶原液直接取自碾碎的豬胰臟或者用市售的胃酶和胰酶，按照1:2的質(zhì)量比例配制。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述酶解法提取分離肝素鈉的方法，其特征在于，步驟三酶解過程加熱至45~55°C時，加入膠原蛋白酶15mL，保溫3小時。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述酶解法提取分離肝素鈉的方法，其特征在于，步驟四采用冷凍干燥或真空干燥的方法`制得肝素鈉粗品。
【文檔編號】C08B37/10GK103772530SQ201410023683
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】李可慶 申請人:江蘇集賢綠色化學(xué)科技研究院有限公司