本發(fā)明涉及吡啶胺基嘧啶衍生物的鹽，具體的說，本發(fā)明涉及n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸鹽、其制備方法、包含該鹽的藥物組合物及該鹽在治療哺乳動物尤其人類由egfr激活型或耐藥型突變體介導的疾病、特別是癌癥中的應用。
背景技術：
：表皮生長因子受體(egfr)被確認為是在細胞生長和增值過程中至關重要的驅(qū)動因素。表皮生長因子受體家族由egfr(erb-b1)、erb-b2(her-2/neu)、erb-b3和erb-b4組成。表皮生長因子受體與大部分癌癥的疾病進程有關，如肺癌、結腸癌、乳腺癌等。egfr的過度表達和突變已被明確證實是預后不好的乳腺癌的主要危險因素。目前，研究前沿的已經(jīng)是不可逆的第三代egfr抑制劑。專利申請cn201410365911.4公開如下式(i)結構化合物，該化合物對egfr激活型突變(如19號外顯子缺失激活突變、或l858r激活突變)和t790m耐藥型突變的抑制活性顯著高于對野生型egfr(wtegfr)的抑制活性，有很好的選擇性，并且毒副作用較低，安全性好。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術問題是提供式(i)化合物的甲磺酸鹽、其制備方法，包含該鹽的藥物組合物及該鹽在治療哺乳動物尤其人類由egfr激活型或耐藥型突變體介導的疾病、特別是癌癥中的應用。本發(fā)明提供了式(i)化合物的甲磺酸鹽。本發(fā)明提供了式(i)化合物的甲磺酸鹽的制備方法。本發(fā)明進一步提供了式(i)化合物的甲磺酸鹽的制備方法，包括在溶劑當中將式(i)化合物直接與甲磺酸反應得到。本發(fā)明提供了藥物組合物，包括式(i)化合物的甲磺酸鹽及藥學上可接受的載體。本發(fā)明進一步提供藥物組合物，包括式(i)化合物的甲磺酸鹽，以及藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。本發(fā)明提供了用作抗腫瘤藥物的式(i)化合物的甲磺酸鹽。本發(fā)明還提供式(i)化合物的甲磺酸鹽在制備治療哺乳動物尤其人類由egfr激活型或耐藥型突變體介導的疾病、特別是癌癥的藥物中的用途。本發(fā)明還提供式(i)化合物的甲磺酸鹽在制備治療癌癥的藥物中的用途。本發(fā)明還提供式(i)化合物的甲磺酸鹽在治療哺乳動物尤其人類由egfr激活型或耐藥型突變體介導的疾病、特別是癌癥方面中的用途。本發(fā)明還提供含有式(i)化合物的甲磺酸鹽的藥物組合物在制備治療哺乳動物尤其人類由egfr激活型或耐藥型突變體介導的疾病、特別是癌癥的藥物中的用途。本發(fā)明還提供含有式(i)化合物的甲磺酸鹽的藥物組合物在制備治療癌癥的藥物中的用途。本發(fā)明還提供一種治療哺乳動物尤其人類由egfr激活型或耐藥型突變體介導的疾病、特別是癌癥的方法，所述方法包括對患者施用式(i)化合物的甲磺酸鹽、或包括治療有效量的式(i)化合物的甲磺酸鹽和藥物可接受載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。本發(fā)明還提供一種治療癌癥的方法，所述方法包括對患者施用式(i)化合物的甲磺酸鹽、或包括治療有效量的式(i)化合物的甲磺酸鹽和藥物可接受載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。本發(fā)明所提及癌癥包括但不限于，例如肺癌、卵巢癌、宮頸癌、乳腺癌、胃癌、結腸直腸癌、胰腺癌、膠質(zhì)瘤、膠質(zhì)母細胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肝細胞癌、胃腸道基質(zhì)瘤(gist)、甲狀腺癌、膽管癌、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、間變性大細胞淋巴瘤、急性髓細胞白血病(aml)、多發(fā)性骨髓瘤、間皮瘤，尤其對于表皮生長因子受體790位蘇氨酸突變?yōu)榈鞍彼?egfrt790m)的腫瘤類型有更好的應用。舉例來說，本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽可作為和用于治療非小細胞癌(egfrt790m)的藥物。本發(fā)明提供的式(i)化合物的制備方法如下，該方法是參考專利申請cn201410365911.4實施例1的方法，其中中間體1c與中間體2a的制備是直接引用專利申請cn201410365911.4的實施例。由間體1c與中間體2a經(jīng)取代或偶聯(lián)反應得到化合物(ii)，化合物(ii)硝基被還原得到化合物(iii)，化合物(iii)與丙烯酰氯經(jīng)?；玫交衔?i)。中間體1c與中間體2a取代或偶聯(lián)反應包括也可以在過渡金屬催化劑催化下進行，所述過渡金屬催化劑包括但不限于三(二亞芐基丙酮)二鈀/4，5-雙二苯基膦-9，9-二甲基氧雜蒽；還原硝基的方法采用本領域中公知的常規(guī)還原劑，包括但不限于鐵粉、鋅粉、硫化鈉、h2/二氧化鉑。本發(fā)明提供的式(i)化合物的甲磺酸鹽的制備方法如下：在溶劑中式(i)化合物直接與甲磺酸反應成鹽得到式(i)化合物的甲磺酸鹽，所述溶劑包括但不限于丙酮與水的混合溶劑。本發(fā)明的式(i)化合物的甲磺酸鹽可給藥于哺乳動物包括人，可以口服、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、局部給藥(粉劑、軟膏劑或滴劑)、或瘤內(nèi)給藥。本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽的給藥劑量可以大約為0.05～50mg/kg體重/天，例如0.1～45mg/kg體重/天，更例如0.5～35mg/kg體重/天。本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽可以配制為用于口服給藥的固體劑型，包括，但不限于膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑等。在這些固體劑型中，本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽作為活性成分與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，例如與檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(1)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸等；(2)粘合劑，例如羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠等；(3)保濕劑，例如，甘油等；(4)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復合硅酸鹽和碳酸鈉等；(5)緩溶劑，例如石蠟等；(6)吸收加速劑，例如，季銨化合物等；(7)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯等；(8)吸附劑，例如，高嶺土等；和(9)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉等，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中也可包含緩沖劑。所述固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材料例如腸溶衣和其他本領域公知的材料進行包衣或微囊化。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性成分的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放。可采用的包埋組分的實例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時，活性成分也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽可以配制為用于口服給藥的液體劑型，包括，但不限于藥學上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿和酊劑等。除了作為活性成分的式(i)化合物的甲磺酸鹽外，液體劑型可包含本領域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水和其他溶劑，增溶劑和乳化劑，例如，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油類，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油等或這些物質(zhì)的混合物等。除了這些惰性稀釋劑外，本發(fā)明液體劑型也可包含常規(guī)助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料等。所述懸浮劑包括，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇只、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂等或這些物質(zhì)的混合物。本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽可以配制為用于腸胃外注射的劑型，包括，但不限于生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，以及用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽也可以配制為用于局部給藥的劑型，包括如軟膏劑、散劑、栓劑、滴劑、噴射劑和吸入劑等。作為活性成分的本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽在無菌條件下和生理上可接受的載體及任選的防腐劑、緩沖劑，或必要時可能需要的推進劑一起混合。本發(fā)明還提供藥物組合物，它含有本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽，以及藥學上可接受載體、賦形劑或稀釋劑。在制備藥物組合物時，通常是將本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽與藥學上可接受載體、賦形劑或稀釋劑混合?？梢园闯Ｒ?guī)制備方法將所述本發(fā)明組合物配制為常規(guī)藥物制劑。例如片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、乳液劑、混浮劑、分散液、溶液劑、糖漿劑、酏劑、軟膏劑、滴劑、栓劑、吸入劑、噴射劑等。本發(fā)明所述的式(i)化合物的甲磺酸鹽可以單獨給藥，或者與其他藥學上可接受的治療劑聯(lián)合給藥，特別是與其他抗腫瘤藥物組合。所述治療劑包括但不限于：作用于dna化學結構的藥物抗腫瘤藥如順鉑，影響核苷酸合成的抗腫瘤藥物如甲氨蝶呤(mtx)、5-氟尿嘧啶(5fu)等，影響核酸轉(zhuǎn)錄的抗腫瘤藥物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、光輝霉素等，作用于微管蛋白合成的抗腫瘤藥物如紫杉醇、長春瑞濱等，芳香化酶抑制劑如氨魯米特、蘭特隆、來曲唑、瑞寧德等，細胞信號通路抑制劑如表皮生長因子受體抑制劑伊馬替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、埃羅替尼(erlotinib)等。待組合的各成分可同時或順序的給予，以單一制劑形式或以不用制劑的形式給予。所述組合不僅包括本發(fā)明化合物和一種其他活性劑的組合，而且也包括本發(fā)明化合物和兩種或更多種其他活性劑的組合。本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽灌胃給藥的絕對生物利用度的測定方法如下：靜脈給藥：健康sd大鼠，隨機分組。測試化合物按一定劑量d靜脈給藥，于給藥前及給藥后5min、15min、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、8.0h、12h和24h經(jīng)眼球后靜脈叢取血，分離制備血漿，采用液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中藥物的濃度，得到藥物濃度-時間曲線。灌胃給藥：健康sd大鼠，隨機分組。測試物質(zhì)按一定劑量d灌胃給藥，于給藥前和給藥后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12和24h經(jīng)大鼠眼球后靜脈叢取靜脈血，分離制備血漿，采用液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中藥物的濃度，得到藥物濃度-時間曲線。經(jīng)劑量校正，按藥時曲線下面積(auc0-t)計算，得到絕對生物利用度f，計算公式f＝(auc灌胃×d靜脈)/(auc靜脈×d灌胃)×100％。本發(fā)明式(i)化合物的甲磺酸鹽抑制動物移植瘤生長的藥效可用常規(guī)方法測定，一種優(yōu)選的評價方法為對人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用。實驗方法：人肺癌h1975細胞株(5×106個/只)接種于裸小鼠右側背部皮下。待腫瘤生長至平均(100～150)mm3時根據(jù)腫瘤大小和小鼠體重隨機分組。測試化合物按一定劑量灌胃給藥，溶劑對照組灌胃給予等量溶劑，每天給藥一次，連續(xù)給藥21天。整個實驗過程中，每周測量兩次小鼠的體重和腫瘤的大小，觀察是否出現(xiàn)毒性反應。腫瘤體積的計算公式為：腫瘤體積(mm3)＝0.5×(腫瘤長徑×腫瘤短徑2)。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的式(i)化合物的甲磺酸鹽在動物體內(nèi)具有優(yōu)異的生物利用度。本發(fā)明提供的式(i)化合物的甲磺酸鹽能更好的抑制動物移植瘤的生長，并顯示良好的安全性。附圖說明附圖1是實施例2制備得到式(i)化合物的甲磺酸鹽和對照例2物質(zhì)(即專利申請cn201410365911.4實施例16)在25mg/kg給藥劑量下的人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的腫瘤體積變化曲線。附圖2是實施例2制備得到式(i)化合物的甲磺酸鹽和對照例2物質(zhì)(即專利申請cn201410365911.4實施例16)在25mg/kg給藥劑量下的人肺癌h1975裸小鼠的體重變化曲線。下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于舉例說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則份數(shù)和百分比分別為重量份和重量百分比。具體實施方式i.制備實施例實施例1：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺中間體1c：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-3-硝基吡啶-2，5-二胺，制備方法引用專利申請cn201410365911.4實施例中間體2a：3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1h-吲哚，制備方法引用專利申請cn201410365911.4實施例化合物(ii)：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-3-硝基吡啶-2，5-二胺的合成在圓底燒瓶中加入3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1h-吲哚(73mg，0.3mmol)、n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-3-硝基吡啶-2，5-二胺(100mg，0.3mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(14mg，0.015mmol)，4，5-雙二苯基膦-9，9-二甲基氧雜蒽(14mg，0.03mmol)，磷酸鉀(127mg，0.6mmol)和8ml二氧六環(huán)，氬氣保護下，95℃反應5h。過濾，濾液減壓蒸干，硅膠柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)，得到140mg產(chǎn)物。收率為86％。msm/z：545[m+1]。化合物(iii)：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]吡啶-2，3，5-三胺的合成在圓底燒瓶中加入n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-3-硝基吡啶-2，5-二胺(150mg，0.27mmol)、二氧化鉑(60mg)和10ml甲醇，通入氫氣，室溫反應1h。過濾，制備板分離(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，得到80mg目標化合物。收率為56％。msm/z：515[m+1]?；衔?i)：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的合成向圓底燒瓶中加入n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]吡啶-2，3，5-三胺(80mg，0.16mmol)和5ml二氯甲烷，冰水浴冷卻，加入0.5n丙烯酰氯的二氯甲烷溶液(0.5ml，0.25mmol)。冰水浴下反應1.5小時，反應液用50ml乙酸乙酯稀釋，飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，制備板分離純化(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，得到20mg目標產(chǎn)物。收率為23％。msm/z：569[m+1]。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ10.41(s，1h)，10.27(s，1h)，8.68(s，1h)，8.44(s，1h)，8.28(t，j＝8.5hz，2h)，8.18(s，1h)，7.52(d，j＝8.0hz，1h)，7.29-7.14(m，3h)，6.98(s，1h)，6.28(d，j＝17.1hz，1h)，5.76(d，j＝10.4hz，1h)，5.00(q，j＝9.0hz，2h)，3.89(s，3h)，3.61(s，2h)，3.28(s，2h)，2.80(s，3h)，2.73(s，6h)。其中化合物(ii)、(iii)、(i)的制備方法參考專利申請cn201410365911.4實施例1。實施例2：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺甲磺酸鹽的合成在三口瓶中加入n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺1g(1.76mmol)，35ml丙酮，7ml水，169mg甲烷磺酸，50℃加熱至全溶。減壓蒸干，加入乙腈，再減壓蒸干。向殘留物中加入丙酮，超聲，過濾，濾餅烘干得到685mg目標產(chǎn)物。收率為59％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ9.80(s，1h)，9.23(s，1h)，8.53(s，1h)，8.42(s，1h)，8.30(d，j＝5.4hz，2h)，8.23(s，1h)，7.52(d，j＝8.2hz，1h)，7.25(t，j＝7.2hz，1h)，7.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.15(t，j＝7.4hz，1h)，6.70(dd，j＝17.0，10.2hz，1h)，6.34(dd，j＝17.0，1.7hz，1h)，5.83(dd，j＝10.3，1.6hz，1h)，5.02(q，j＝9.1hz，2h)，3.88(s，3h)，3.65(t，j＝6.0hz，2h)，3.33(t，j＝6.0hz，2h)，2.86(s，6h)，2.81(s，3h)，2.44(s，3h)。ii.活性測試實施例測試實施例1：sd大鼠(spraguedawley大鼠)藥物吸收實驗靜脈給藥：健康sd大鼠，雌雄各半共16只，體重200～280g，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，隨機分成四組。分別按下表所列劑量靜脈給予上述實施例1、實施例2、對照例1和對照例2的物質(zhì)，于給藥前及給藥后5min、15min、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、8.0h、12h和24h經(jīng)大鼠眼球后靜脈叢取靜脈血0.2ml，分離制備血漿，采用液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中藥物的濃度，得到藥物濃度-時間曲線。其主要的藥物動力學參數(shù)如下表1所示：參數(shù)實施例1實施例2對照例1對照例2劑量d(mg/kg)2.54.03.04.0cmax(ng/ml)81.3429.7327.5630.2auc0-t(ng·h/ml)307.3405.9437.8810.7t1/2(h)3.963.132.721.71表1表1中，對照例1物質(zhì)結構如下，按專利申請cn201410365911.4實施例2方法制備得到，對照例2物質(zhì)結構如下，按專利申請cn201410365911.4實施例16方法制備得到，t1/2：消除半衰期；cmax：血漿中藥物的最高濃度；auc0-t：藥時曲線下面積灌胃給藥：健康sd大鼠，雌雄各半共16只，體重200～280g，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，隨機分成四組。分別按下表所列劑量灌胃給予上述實施例1、實施例2、對照例1和對照例2的物質(zhì)，于給藥前和給藥后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12和24h經(jīng)大鼠眼球后靜脈叢取靜脈血0.2ml，分離制備血漿，采用液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中藥物的濃度，得到藥物濃度-時間曲線。其主要的藥物動力學參數(shù)如下表2所示：參數(shù)實施例1實施例2對照例1對照例2劑量d(mg/kg)1010610cmax(ng/ml)17.644.5412.6328.3auc0-t(ng·h/ml)231.728777.66172.2t1/2(h)4.148.338.605.76f(％)18.8528.288.98.5表2，其中對照例1、2的結構與制備方法同表1經(jīng)劑量校正后，按auc0-t計算，得到絕對生物利用度f，計算公式f＝(auc灌胃×d靜脈)/(auc靜脈×d灌胃)×100％，得到的絕對生物利用度f見上表2。結論：實施例2的式(i)化合物的甲磺酸鹽灌胃給藥的絕對生物利用度最高達到28.28％，明顯優(yōu)于實施例1式(i)化合物、對照例1和對照例2灌胃給藥的絕對生物利用度。測試實施例2：對人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用觀察本發(fā)明實施例2制備得到的式(i)化合物的甲磺酸鹽和對照例2物質(zhì)(對照例2的結構如下，制備方法參考專利申請cn201410365911.4實施例16)對人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的抑制作用。細胞培養(yǎng)：h1975培養(yǎng)在加有10％fbs的rpmi-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，放在37℃含有5％co2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。收取指數(shù)生長期的細胞并計數(shù)，以供接種。實驗動物：balb/cnude裸鼠，15只，雄性，6周，18-20g，每組5只，購自上海動物實驗中心。設3個實驗組，分別為：0.5％羧甲基纖維素鈉溶劑對照組，實施例2(25mg/kg)組與對照例2(25mg/kg)組。實驗方法：人肺癌h1975細胞株(5×106個/只)接種于實驗小鼠于右側背部皮下，定期觀察腫瘤生長情況，用游標卡尺測量移植瘤直徑，待腫瘤生長至平均(100～150)mm3時根據(jù)腫瘤大小和小鼠體重隨機分組。實施例2與對照例2的物質(zhì)各自按25mg/kg灌胃給藥，溶劑對照組灌胃給予等量溶劑，每天給藥一次，連續(xù)21天。整個實驗過程中，每周測量兩次小鼠的體重和腫瘤的大小，觀察是否出現(xiàn)毒性反應。腫瘤體積計算公式：腫瘤體積(mm3)＝0.5×(腫瘤長徑×腫瘤短徑2)。三個實驗組腫瘤增長生長曲線見附圖1，體重曲線見附圖2。結論：本發(fā)明實施例2的式(i)化合物的甲磺酸鹽對人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的生長具有良好的抑制作用，抑制效果明顯優(yōu)于對照例2；并且顯示良好的安全性。在本文中提及的所有文獻均通過引用被并入本申請中。此外還應指明的是，在閱讀了本申請的上述公開內(nèi)容之后，本領域技術人員可以無需背離本發(fā)明的精神和范圍，對本發(fā)明作出各種修飾、改動或修改，但這些變化形式同樣都應落于本申請所附權利要求書所記載的范圍。當前第1頁12