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一種霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):11145803閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒,其特征在于,該試劑盒包括LAMP引物、2×反應(yīng)緩沖液、Bst DNA聚合酶、熒光目視檢測(cè)試劑、超純水和霍亂弧菌DNA模板;所述的LAMP引物包括外引物F3與B3和內(nèi)引物是FIP與BIP;其中以外引物F3和B3作為PCR診斷引物;

其中引物的序列分別為:

F3 CTGAAACCTTTGTTGCCGC

B3 GCCCATAGAAAGAGTCGCTG

FIP GGCAGGATGGTAACCCCTGAGTAAAGATCCAGGCCAAGTTCG

BIP TTACCGATGAAGAAGTCGCCGCTTGGCTTCAACCACTTCAGT;

所述的2×反應(yīng)緩沖液包括Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween20、Betaine和dNTPs。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒,其特征在于,所述的霍亂弧菌DNA模板取自細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒,其特征在于,所述的熒光目視檢測(cè)試劑采用鈣黃綠素?zé)晒庠噭瑹晒庠噭┰诜磻?yīng)前加入。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒,其特征在于,所述的2×反應(yīng)緩沖液包括Tris-HCL 35-55mM、KCL 18-32mM、MgSO4 15-25mM、(NH4)2SO4 22-28mM、Tween20 0.3-0.6℅、Betaine 1.5-3 M 和dNTPs3-4.5mM。

5.一種霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒的應(yīng)用,其特征在于,具體操作步驟包括:

(1)LAMP引物的設(shè)計(jì)與合成

(2)霍亂弧菌DNA模板的提取

(3)LAMP反應(yīng)體系建立

(4)LAMP檢測(cè)方法。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒的應(yīng)用,其特征在于,所述的LAMP反應(yīng)體系建立LAMP反應(yīng)體系以25μL計(jì),

2×反應(yīng)緩沖液 12.5 μL

Bst DNA聚合酶 1 μL

FIP 40 pmol

BIP 40 pmol

F3 5 pmol

B3 5 pmol

霍亂弧菌DNA 2 μL

超純水 補(bǔ)足25 μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒的應(yīng)用,其特征在于,所述的LAMP檢測(cè)方法是采用特異性檢測(cè)、敏感性檢測(cè)和熒光可視化檢測(cè)的方法。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試劑盒的應(yīng)用,其特征在于,所述的LAMP檢測(cè)方法采用實(shí)時(shí)濁度儀進(jìn)行密閉全程監(jiān)控。

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