本發(fā)明屬于有機(jī)合成和藥物領(lǐng)域，涉及一種阿撲棉酚衍生物及其制備方法和抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

棉酚是一種黃色的多酚類化合物，天然存在于錦葵科的某些植物中。棉酚是一個非常有前景的天然化合物，有著廣泛的生物活性，例如它具有抗腫瘤和抗生育的作用，近來研究顯示棉酚還具有抗瘧、抗寄生蟲和抗病毒等多種生物活性，特別是對艾滋病毒、流感病毒、皰疹病毒等多種膜病毒顯示出較強(qiáng)的抑制或殺滅作用，同時(shí)棉酚也是第一個來源于植物且非常有價(jià)值的干擾素誘生劑，是一種潛在的廣譜抗病毒化合物。棉酚是一個具有手性的阻旋型旋光異構(gòu)體，分為(+)-棉酚和(-)-棉酚，實(shí)驗(yàn)已證實(shí)(-)-棉酚生物活性通常要比(+)-棉酚和消旋棉酚更好。(-)-棉酚又名AT-101，(-)-棉酚正用于臨床Ⅱ期研究，是目前唯一一個可用于口服的Bcl-2、Mcl-1和Bcl-XL蛋白的抑制劑。Bcl-2蛋白家族是細(xì)胞程序性死亡中重要的調(diào)控因子，該家族蛋白過度表達(dá)會引發(fā)各種癌癥。棉酚對Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白如Bcl-2、Mcl-1和Bcl-XL等均有著較強(qiáng)的抑制作用，尤其是(-)-棉酚的表現(xiàn)尤為突出。但是棉酚分子中的醛基可與人體蛋白質(zhì)的氨基酸殘基作用形成希夫堿，從而產(chǎn)生毒性，限制了它在臨床中的應(yīng)用，因此目前棉酚的修飾改造主要集中在對醛基的去除和修飾這一方面。2016年我們設(shè)計(jì)合成了一系列新型棉酚希夫堿衍生物，最優(yōu)化合物對NCI-60的GI50值為0.1-2.0μM，是首個活性優(yōu)于棉酚并且毒性大大降低的棉酚希夫堿類化合物(參考文獻(xiàn)：Lu Y..ACS Medicinal Chemistry Letters,2016,DOI：10.1021/acsmedchemlett.6b00302)，展現(xiàn)出了良好的發(fā)展前景。另外，體內(nèi)和體外研究表明將棉酚的醛基去除所得的阿撲棉酚是一個能夠保留棉酚活性并降低毒性的很好的化合物，但是其抗腫瘤活性還有待提高(參考文獻(xiàn)：Becattini B.et al.Chem.Biol,2004,11,389-395)。實(shí)驗(yàn)表明對棉酚的異丙基進(jìn)行改造有著巨大潛力，已經(jīng)有對其改造的報(bào)道，但是活性提高并不顯著(參考文獻(xiàn)：Wei J.et al..J.Med.Chem.,2009,52,4511-4523；Wei J.et al.Mol.Cancer Ther.2009,8,904-913)。目前有多個Bcl-2蛋白家族抗凋亡蛋白抑制劑進(jìn)入臨床研究，但是僅有ABT-199于今年獲批用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病。

另一方面，體外活性測試結(jié)果表明本發(fā)明所合成的化合物對IL-17A的有著明顯的抑制作用。白介素-17(interleukin-17,IL-17)細(xì)胞因子家族，在宿主防御病原微生物如細(xì)菌和真菌的感染以及機(jī)體自身免疫疾病和癌癥等疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。目前IL-17A是該家族中研究最為清楚的成員，主要由CD4⁺T細(xì)胞亞群Th17(T helper 17)細(xì)胞分泌。IL-17A通過與細(xì)胞表面受體IL-17RA結(jié)合激活下游信號，進(jìn)而發(fā)揮其生理或病理功能。IL-17A表達(dá)失調(diào)會引發(fā)多種自身免疫疾病，如多發(fā)性硬化，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸炎，強(qiáng)直性脊柱炎等。對研究IL-17A信號通路的表明，阻斷IL-17A-IL-17RA的蛋白-蛋白相互作用能夠有效抑制IL-17A介導(dǎo)的多種疾病。目前IL-17A的有效抑制劑基本上都是單克隆抗體，如諾華公司研發(fā)的Secukinumab(AIN457)，阿斯利康公司研發(fā)的單抗藥物Brodalumab(LY2439821)等。目前并沒有有效的小分子抑制劑作用于IL-17A-IL-17RA信號通路，與此相關(guān)的研究也非常少，到2016年為止僅有兩篇文獻(xiàn)報(bào)道的化合物可以有IL-17A的抑制作用，因此亟需開發(fā)出IL-17A小分子抑制劑，拓寬臨床的用藥選擇。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)與不足，提供一種阿撲棉酚衍生物，具有式(I)所示的結(jié)構(gòu)中的任意一種：

其中，

R¹為H、Me、Et、Cl、Br、CF₃或OH

R²為H、

本發(fā)明還提供上述阿撲棉酚衍生物的制備方法：通過如下反應(yīng)式i，ii來實(shí)現(xiàn)，將反應(yīng)式i中的化合物1，2-氨基吡啶衍生物，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)用無水DCM/MeOH溶液溶解；30min后，加入相應(yīng)的異腈，于室溫下攪拌，TLC監(jiān)測反應(yīng)，柱層析分離得到反應(yīng)產(chǎn)物2作為反應(yīng)ii的原料；無水無氧條件下，將乙硫醇加入到無水氯化鋁中，冷卻至0℃，將反應(yīng)產(chǎn)物2溶于無水二氯甲烷滴入到上述溶液中；反應(yīng)結(jié)束后，加水淬滅反應(yīng)，調(diào)pH至3～5，靜置，抽濾，濾渣用二氯甲烷洗，真空干燥，所得固體即為目標(biāo)產(chǎn)物3。

具體包括以下步驟：將0.2mmol、1.0eq反應(yīng)式i中的化合物1，0.48mmol、2.4eq 2-氨基吡啶衍生物，0.02mmol、0.1eq三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)用0.5mL無水DCM/MeOH(v:v＝2:1)溶液溶解；30min后，加入0.48mmol、2.4eq相應(yīng)的異腈，于室溫下攪拌，TLC監(jiān)測反應(yīng)，柱層析分離得到反應(yīng)產(chǎn)物2，作為反應(yīng)ii的原料；無水無氧條件下，將乙硫醇2mL加入到25.0eq無水氯化鋁中，冷卻至0℃，將1.0eq反應(yīng)產(chǎn)物2溶于無水二氯甲烷滴入到上述溶液中，反應(yīng)結(jié)束后，加水淬滅反應(yīng)，調(diào)pH至3～5，靜置，抽濾，濾渣用二氯甲烷洗，真空干燥，所得固體即為目標(biāo)產(chǎn)物3。

其中，起始原料化合物1由報(bào)道的合成方法(參考文獻(xiàn)：J.Med.Chem.2010,53,5502-5510)所得。

本發(fā)明還提供式(I)所示結(jié)構(gòu)的阿撲棉酚衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，所述的式(I)中阿撲棉酚衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，優(yōu)選為(1)或(2)：

(1)5,5'-二{3-(金剛烷胺)-咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-8)；

(2)5,5'-二{3-氨基唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-13)。

本發(fā)明還提供式(I)所示結(jié)構(gòu)的阿撲棉酚衍生物在制備抗白介素IL-17A活性的藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，所述的式(I)中阿撲棉酚衍生物在制備抗白介素IL-17A活性的藥物中的應(yīng)用，優(yōu)選為(1)或(2)：

(1)5,5'-二{7-氯-3-(環(huán)己胺)-咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-5)；

(2)5,5'-二{3-氨基唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-13)。

體外抗癌活性實(shí)驗(yàn)表明，上述式(I)中大部分阿撲棉酚衍生物對人類60種癌細(xì)胞(NCI-60，數(shù)據(jù)由美國國家衛(wèi)生研究所NIH提供)均有較好的抑制作用。另外，部分化合物也展現(xiàn)出良好的抗白介素IL-17A活性。IL-17A不僅與自身免疫疾病相關(guān)，而且與癌癥的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，基于此，上述阿撲棉酚衍生物可用于制備抗癌藥物。

一種抗癌藥物，包含上述阿撲棉酚衍生物；

優(yōu)選的，所述的抗癌藥物還包含一種或多種所述阿撲棉酚衍生物藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。

本發(fā)明以阿撲棉酚為先導(dǎo)化合物，利用多組分的合成方法集中改造異丙基，迅速構(gòu)建了阿撲棉酚的系列衍生物。本發(fā)明還系統(tǒng)性研究了所述阿撲棉酚衍生物體外抗癌細(xì)胞增殖的活性，測試結(jié)果表明最優(yōu)化合物L(fēng)YZ-8體外抗癌活性GI₅₀值介于0.08～1.0μM之間，是目前棉酚抗腫瘤活性(GI₅₀＝0.79～5.01μM)的3～31倍，并且優(yōu)于之前我們報(bào)道的棉酚希夫堿類衍生物(GI₅₀＝0.1～2.0μM)。另外目前并沒有有效的化學(xué)藥物作用于IL-17A，本發(fā)明的阿撲棉酚衍生物對IL-17A也有著很好的抑制作用，極具應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

通過以下詳細(xì)說明可以進(jìn)一步理解本發(fā)明的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)。所提供的實(shí)施例僅是對本發(fā)明方法的說明，而不以任何方式限制本發(fā)明揭示的其余內(nèi)容。

【實(shí)施例1】

5,5'-二{3-(環(huán)己胺)咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-1)的制備

稱取化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)于圓底燒瓶中，加入0.5mL無水DCM/MeOH(v/v＝2:1)溶液溶解。30min后，加入環(huán)己烷異腈(52mg,0.48mmol,2.4eq)，于室溫下攪拌。TLC監(jiān)測反應(yīng)，柱層析分離得到產(chǎn)物作為下一步反應(yīng)的原料。無水無氧條件下，將乙硫醇2mL加入到無水氯化鋁(667mg,5.0mmol,25.0eq)中。冷卻至0℃，將上一步得到的產(chǎn)物(180mg,0.2mmol,1.0eq)溶于無水二氯甲烷滴入到上述溶液中。3h后，加水淬滅反應(yīng)，調(diào)pH至3～5，靜置，抽濾，濾渣用二氯甲烷洗，真空干燥，得黃棕色固體148mg，產(chǎn)率為91％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.45(s,1H),14.37(s,1H),8.83(s,1H),8.81(s,1H),7.93–7.83(m,4H),7.74(s,1H),7.73(s,1H),7.54–7.46(m,2H),6.83(s,2H),6.81(s,1H),2.74–2.55(m,2H),1.82(s,3H),1.77(s,3H),1.71-1.65(m9,2H),1.51–1.49(m,4H),1.44–1.28(m,4H),1.28–1.17(m,2H),1.04–0.85(m,6H),0.59–0.50(m,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ149.08,149.02,146.96,146.87,144.05,143.97,138.31,136.05,136.00,135.57,134.04,133.95,131.71,131.11,129.21,129.17,129.09,128.88,128.59,125.01,124.75,118.54,118.33,117.49,117.21,116.97,116.06,115.77,115.00,114.28,111.65,107.31,106.43,106.13,54.21,53.39,33.04,32.95,25.08,24.90,24.22,24.19,24.13,24.10,20.53,20.41,20.01,19.89.

【實(shí)施例2】

5,5'-二{3-(環(huán)己胺)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-2)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，4-甲基-2-氨基吡啶(52mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，環(huán)己烷異腈(52mg,0.48mmol,2.4eq)制得。黃棕色固體，產(chǎn)率為95％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.19(s,1H),14.11(s,1H),10.23(s,1H),10.18(s,1H),9.58(s,1H),9.52(s,1H),8.83–8.61(m,2H),8.45–8.08(m,2H),7.71(d,J＝4.0,2H),7.69(s,1H),7.66(s,1H),7.38(t,J＝7.6,2H),6.83(s,1H),6.82(s,1H),2.92–2.79(m,1H),2.68–2.61(m,1H),2.56(s,6H),1.83(s,3H),1.78(s,3H),1.71–1.64(m,2H),1.59–1.47(m,4H),1.45–1.20(m,6H),1.09–0.91(m,6H),0.64–0.52(m,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ149.12,149.08,149.01,146.99,146.95,146.86,144.09,144.02,142.98,136.01,133.95,133.86,128.96,128.93,128.79,128.75,128.67,124.15,118.48,118.30,118.02,117.29,117.15,117.02,115.05,114.03,110.04,109.98,107.39,107.37,106.62,106.57,54.32,53.50,33.07,32.96,25.16,24.99,24.26,24.20,24.16,24.12,20.96,20.07,19.96.

【實(shí)施例3】

5,5'-二{3-(環(huán)己胺)-7-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-3)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，4-乙基-2-氨基吡啶(59mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，環(huán)己烷異腈(52mg,0.48mmol,2.4eq)制得。紅棕色固體，產(chǎn)率為96％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.26(s,1H),14.16(s,1H),10.26(s,1H),10.22(s,1H),9.60(s,1H),9.54(s,1H),8.76(s,1H),8.75(s,1H),8.35–8.24(m,1H),8.19–8.05(m,1H),7.72(t,J＝4.3,4H),7.69(s,1H),7.65(s,1H),7.45(t,J＝6.6,2H),6.84(d,J＝4.6,2H),2.87(dd,J＝14.6,7.2,4H),2.74–2.57(m,2H),1.84(s,3H),1.80(s,3H),1.75–1.62(m,4H),1.58–1.50(m,4H),1.42–1.36(m,2H),1.30(t,J＝7.4,6H),1.06–0.90(m,7H),0.69–0.49(m,2H)

【實(shí)施例4】

5,5'-二{7-溴-3-(環(huán)己胺)-咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-4)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，4-溴-2-氨基吡啶(83mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，環(huán)己烷異腈(52mg,0.48mmol,2.4eq)制得。紅棕色固體，產(chǎn)率為94％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.72(brs,1H),10.21(s,1H),9.57(s,1H),8.79(d,J＝7.3,1H),8.28(s,1H),8.20(s,1H),7.75–7.65(m,2H),6.84(s,1H),2.72–2.60(m,1H),1.79(s,3H),1.64–1.49(m,2H),1.47–1.23(m,3H),1.11–0.79(m,4H),0.62–0.44(m,1H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ149.07,146.97,144.03,138.31,133.89,129.68,128.90,125.78,119.13,118.52,115.12,114.13,107.50,106.41,53.55,33.09,30.70,25.00,24.31,24.26

【實(shí)施例5】

5,5'-二{7-氯-3-(環(huán)己胺)-咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-5)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，4-氯-2-氨基吡啶(62mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，環(huán)己烷異腈(52mg,0.48mmol,2.4eq)制得。紅棕色固體，產(chǎn)率為93％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.72(brs,1H),10.17(s,1H),9.59(s,1H),8.83(d,J＝6.1,1H),8.26(s,1H),8.06(s,1H),7.71(s,1H),7.62–7.54(m,1H),6.88(s,1H),2.77–2.65(m,1H),1.81(s,3H),1.67–1.54(m,2H),1.47–1.39(m,2H),1.36–1.28(m,1H),1.12–0.89(m,4H),0.70–0.52(m,1H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ149.06,146.90,144.06,135.80,133.84,129.60,128.90,125.98,118.56,117.08,116.55,115.18,111.22,107.46,106.72,53.70,33.08,30.68,25.01,24.29,24.25,20.15.

【實(shí)施例6】

5,5'-二{7-三氟甲基-3-(環(huán)己胺)-咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-6)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，4-三氟甲基-2-氨基吡啶(78mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，環(huán)己烷異腈(52mg,0.48mmol,2.4eq)制得。紅棕色固體，產(chǎn)率為96％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.19(s,1H),9.59(s,1H),9.04(d,J＝6.7,1H),8.27(s,2H),7.76(d,J＝6.7,1H),7.72(s,1H),6.86(s,1H),2.83–2.65(m,1H),1.80(s,3H),1.66–1.53(m,2H),1.49–1.37(m,2H),1.32–1.27(m,1H),1.11–1.01(m,2H),0.96–0.87(m,1H),0.75–0.32(m,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ149.07,146.99,144.03,138.32,133.89,130.82,128.97,126.18,124.27,121.56,118.53,117.05,115.21,110.64,110.54,107.51,53.50,33.19,30.67,24.95,24.38,24.33,20.06.

【實(shí)施例7】

5,5'-二{3-(環(huán)己胺)-8-羥基咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-7)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，3-甲氧基-2-氨基吡啶(60mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，環(huán)己烷異腈(52mg,0.48mmol,2.4eq)制得。黃棕色固體，產(chǎn)率為88％。

¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ8.23(dd,J＝10.3,6.8,2H),7.79(s,2H),7.31(t,J＝10.7,2H),7.18–7.12(m,2H),7.01(s,1H),6.95(s,1H),2.97–2.87(m,1H),2.85–2.78(m,1H),1.96(s,3H),1.94(d,J＝2.9,3H),1.89–1.82(m,1H),1.81–1.75(m,1H),1.71–1.65(m,3H),1.60–1.55(m,1H),1.531.48(m,2H),1.47–1.43(m,1H),1.41–1.35(m,1H),1.33–1.26(m,1H),1.13–0.96(m,6H),0.94–0.77(m,3H).

【實(shí)施例8】

5,5'-二{3-(異丁基胺)-咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-8)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，異丁烷異腈(40mg,0.48mmol,2.4eq)制得。黃棕色固體，產(chǎn)率為80％。

¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ8.72(t,J＝6.2,2H),8.00–7.75(m,6H),7.54–7.50(m,2H),7.00(s,1H),6.97(s,1H),2.86–2.61(m,4H),1.94(t,J＝4.1,6H),1.74–1.64(m,1H),1.58–1.51(m,1H),0.80(dd,J＝13.5,6.6,6H),0.65(dd,J＝11.3,6.7,6H).

【實(shí)施例9】

二甲基4,4'-(((1,1',6,6',7,7'-六羥基-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-5,5'-二烯)二(咪唑并[1,2-a]吡啶基))雙(氨基))二丁酸酯(LYZ-9)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，4-氨基丁酸甲酯異腈(61mg,0.48mmol,2.4eq)制得。紅棕色固體，產(chǎn)率為71％。¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ＝8.71(t,J＝5.8,2H),8.11–7.90(m,3H),7.89–7.82(m,2H),7.78(d,J＝4.7,1H),7.58–7.48(m,2H),7.02–6.96(m,2H),3.56(s,3H),3.51(s,3H),3.10–2.89(m,4H),2.20–2.02(m,4H),1.95(d,J＝6.0,6H),1.72–1.55(m,4H).

【實(shí)施例10】

5,5'-二{3-(4-叔丁基環(huán)己基胺)-6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-10)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，4-叔丁基環(huán)己烷異腈(79mg,0.48mmol,2.4eq)制得。棕黑色固體，產(chǎn)率為91％。¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ＝8.85(d,J＝3.6,1H),8.83–8.73(m,1H),8.04–7.97(m,1H),7.96–7.94(m,1H),7.93–7.91(m,1H),7.88(s,2H),7.85–7.79(m,1H),7.24–7.09(m,1H),7.06–6.96(m,1H),2.92–2.78(m,1H),2.74–2.65(m,1H),1.96(s,3H),1.94(s,3H),1.82–1.66(m,3H),1.57–1.48(m,3H),1.42–1.36(m,1H),1.30–1.26(m,1H),1.20–1.11(m,2H),1.06–0.98(m,2H),0.90–0.88(m,1H),0.87–0.86(m,1H),0.79(s,9H),0.68(s,9H),0.63(s,1H),0.61(d,J＝3.0,1H),0.54–0.48(m,2H).

【實(shí)施例11】

5,5'-二{3-(金剛烷胺)-咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-8)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，金剛烷異腈(77mg,0.48mmol,2.4eq)制得。黃棕色固體，產(chǎn)率為89％。

¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ8.91–8.76(m,2H),8.60(d,J＝6.9,1H),7.82–7.72(m,6H),7.45–7.34(m,2H),7.29–7.24(m,1H),7.20(d,J＝8.2,1H),2.01–1.96(m,3H),1.92(s,3H),1.84–1.79(m,2H),1.69–1.66(m,2H),1.63–1.48(m,12H),1.46–1.41(m,4H),1.32–1.27(m,2H),1.25–1.13(m,6H),0.88–0.81(m,2H).

【實(shí)施例12】

5,5'-二{3-氨基-6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-12)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，5-氯-2-氨基吡啶(62mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，叔丁基異腈(40mg,0.48mmol,2.4eq)制得。黃棕色固體，產(chǎn)率為74％。

¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ8.82(s,1H),7.86(s,2H),7.01(s,1H),1.96(s,3H).

【實(shí)施例13】

5,5'-二{3-氨基唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-13)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，叔丁基異腈(40mg,0.48mmol,2.4eq)制得。黃棕色固體，產(chǎn)率為76％。

¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ8.66(s,1H),8.64(s,1H),7.89–7.84(m,5H),7.51–7.47(m,2H),7.12–6.96(m,1H),7.02(s,1H),6.96(s,1H),1.97(s,6H).¹³C NMR(100MHz,MeOH-d₄)δ149.66,147.37,144.13,135.90,134.98,134.88,131.01,129.40,124.11,115.87,113.76,111.21,104.94,19.47.

【實(shí)施例14】

3,3'-二甲基-5,5'-二{3-(1-萘基胺)咪唑并[1,2-a]吡啶基}-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-14)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，1-萘基異腈(40mg,0.48mmol,2.4eq)制得。紅棕色固體，產(chǎn)率為83％。

¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ8.63(t,J＝8.2,1H),8.39(m,1H),8.16(s,1H),8.02(d,J＝6.5,1H),7.84–7.79(m,3H),7.55–7.38(m,2H),7.21–7.15(m,1H),7.02(s,1H),6.58(s,1H),1.98(s,3H).

【實(shí)施例15】

5,5'-二{3-[(4-羥基苯基)胺]咪唑并[1,2-a]吡啶基}-3,3'-二甲基-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-15)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，4-叔丁基苯基異腈(40mg,0.48mmol,2.4eq)制得。棕黑色固體，產(chǎn)率為81％。

¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ8.40(d,J＝5.6,1H),8.00(s,2H),7.71(s,1H),7.49(s,1H),7.15–6.99(d,J＝16.6,2H),6.86–6.54(m,3H),1.75(s,3H).¹³C NMR(100MHz,MeOD-d₄)δ150.77,148.77,145.38,145.33,144.75,139.15,136.45,134.57,130.46,126.44,121.39,119.94,118.13,118.11,116.85,115.48,115.42,113.36,111.42,108.79,106.24,20.58.

【實(shí)施例16】

3,3'-二甲基-5,5'-二{3-(苯乙胺)咪唑并[1,2-a]吡啶基}-[2,2'-聯(lián)二萘]-1,1',6,6',7,7'-六羥基(LYZ-16)的制備

制備方法如實(shí)施例1，由化合物1(103mg,0.2mmol,1.0eq)，2-氨基吡啶(45mg,0.48mmol,2.4eq)，三氟甲烷磺酸鈧(Sc(OTf)₃)(10mg,0.02mmol,0.1eq)，苯乙胺異腈(40mg,0.48mmol,2.4eq)制得。棕黑色固體，產(chǎn)率為77％。

¹H NMR(400MHz,MeOH-d₄)δ8.51(t,J＝6.2,1H),7.90–7.81(m,2H),7.44(t,J＝6.7,1H),7.28–6.90(m,5H),6.76(d,J＝6.6,1H),3.25–3.12(m,2H),2.76–2.57(m,2H),1.99–1.91(m,3H).¹³C NMR(100MHz,MeOH-d₄)δ151.14,149.07,148.98,145.60,145.54,140.36,140.17,137.84,137.72,136.48,133.18,133.06,131.76,131.70,130.81,130.71,129.87,129.65,129.48,129.33,127.32,127.17,125.81,125.75,120.23,120.18,117.40,117.38,117.13,117.08,112.71,106.97,48.64,48.25,37.49,37.36,20.97,20.91.

【實(shí)施例17】阿撲棉酚衍生物體外抗NCI-60腫瘤細(xì)胞系活性

NCI體外篩選系統(tǒng)由60種不同的人體腫瘤細(xì)胞株組成，測定每個受試化合物在一定濃度范圍抑制各種腫瘤細(xì)胞生長的能力或細(xì)胞毒性的程度。其篩選過程分為兩個階段，首先對化合物進(jìn)行60種細(xì)胞株的單劑量(10μM)篩選(見表1)，然后根據(jù)單劑量的篩選結(jié)果來判斷是否選擇進(jìn)行五劑量篩選并給出半數(shù)增長抑制率(GI₅₀)。后者將所有60種腫瘤細(xì)胞株細(xì)胞接種在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，將受試化合物10倍梯度稀釋，一般最高濃度采用10μmol。每個化合物測試5種不同濃度。不同濃度的樣品加入細(xì)胞懸液后培育48小時(shí)，此后用細(xì)胞染色法測定細(xì)胞的生長曲線，用sulforhodamine(SRB)染色，再測定吸光度用以估計(jì)活細(xì)胞數(shù)目。根據(jù)比色結(jié)果做出60條劑量——抑制率曲線，最后計(jì)算出化合物的50％生長抑制濃度(GI₅₀)，優(yōu)選化合物的GI₅₀見表2。

表1.本發(fā)明部分化合物對NCI-60細(xì)胞株單劑量(10μM)的抑制結(jié)果

^“a”優(yōu)選化合物

表2.本發(fā)明優(yōu)選化合物對NCI-60的50％生長抑制濃度(GI₅₀)

^αND:未測試

體外癌細(xì)胞抗增殖活性測試結(jié)果表明：本發(fā)明代表性的7個阿撲棉酚衍生物中大部分對所測試的癌細(xì)胞均有抑制活性(表1)，從表1中還可以看出式(I)中R²取代基的大小對抗腫瘤活性的影響非常明顯，取代基越大，抗腫瘤活性越好，其中LYZ-8最好，有著較大基團(tuán)的LYZ-1、LYZ-9和LYZ-14的活性稍弱；另外R²未取代的LYZ-13也有很好的抗腫瘤活性。進(jìn)一步NCI60測試結(jié)果表明優(yōu)選的阿撲棉酚衍生物的抑制效果更為明顯，其中LYZ-8最好，對所有的癌細(xì)胞的抑制活性GI₅₀值介于0.08～1.0μM之間，對肺癌、結(jié)腸癌的抑制作用尤為明顯，其中對肺癌NCI-H460(90nM)結(jié)腸癌HCT-116(80nM)均達(dá)到了納摩爾水平。不僅優(yōu)于母體化合物棉酚(GI₅₀＝0.79～5.01μM)，而且優(yōu)于我們之前報(bào)道的棉酚希夫堿類化合物(GI₅₀＝0.1～2.0μM)。

【實(shí)施例18】阿撲棉酚衍生物體外抗白介素IL-17A活性

通過用1mL完全培養(yǎng)基(含有30mM HEPES(羥乙基哌嗪乙磺酸)，100單位/mL青霉素，100ug/mL鏈霉素，3.25mM L-谷氨酰胺，0.2uMβ-巰基乙醇和10％胎牛血的RPMI-1640培養(yǎng)基)重分散解凍PBMC(peripheral blood mononuclear cells)，然后逐滴加入2mL，4mL，8mL，最后16mL完全培養(yǎng)基，并輕輕吹打。將細(xì)胞離心5分鐘，將細(xì)胞沉淀重懸于完全培養(yǎng)基中。通過使細(xì)胞溶液通過23號注射器針頭和40微米的細(xì)胞濾網(wǎng)破碎細(xì)胞團(tuán)塊。將總共30μL每孔10萬個細(xì)胞加入的TC處理的384孔聚苯乙烯板。將含有抗人CD3抗體，抗人CD28抗體和IL-23和制備的化合物的混合物同時(shí)加入總體積為30uL的細(xì)胞中。添加的刺激劑的最終濃度抗CD3抗體，抗CD28抗體和IL-23分別為160ng/mL，500ng/mL和5ng/mL，DMSO含量為0.3％。多孔板用AeraSeal密封膜密封并在37℃，95％濕度和5％CO 2下孵育48小時(shí)。.

在孵育期后，將板以200g旋轉(zhuǎn)5分鐘。將上清液在1％BSA/PBS中稀釋一倍，測試IL-17用來自R&D systems(目錄#D317E)的人IL-17ELISA試劑盒。采用酶標(biāo)儀測量492nm處的吸光度。492出的吸光值基于IL-17標(biāo)準(zhǔn)曲線轉(zhuǎn)化為IL17的濃度，如下所示：

pg/mL IL-17＝EC50*[[(Top-Bottom)/(A492-Bottom)]-1](1/-Hill)

計(jì)算抑制IL-17分泌的IC₅₀，根據(jù)沒有添加刺激物和化合物的孔的平均值確定的最大抑制以及來自單獨(dú)使用刺激物和無添加化合物的孔的平均值的最小抑制，使用標(biāo)準(zhǔn)的4-參數(shù)擬合后轉(zhuǎn)換得出。

表3本發(fā)明部分化合物體外抗白介素IL-17A半數(shù)抑制濃度IC₅₀結(jié)果

體外抗白介素IL-17A活性測試結(jié)果表明：本發(fā)明代表性的7個化合物對白介素IL-17A均有著很好的抑制效果，都達(dá)到了μM水平，其中LYZ-5和LYZ-13的抑制效果尤為明顯。目前IL-17A的有效抑制劑基本上都是單克隆抗體，目前并沒有有效的小分子抑制劑作用于IL-17A-IL-17RA信號通路，與此相關(guān)的研究也非常少，IL-17A不僅與自身免疫疾病相關(guān)，而且與癌癥的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，因此將本發(fā)明化合物應(yīng)用于靶向白介素IL-17A的研究極具價(jià)值。

以上數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明化合物可用于制備抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)藥物。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。