本發(fā)明涉及生物培育領(lǐng)域，具體涉及一種北蟲(chóng)草的培育方法。
背景技術(shù)：
北蟲(chóng)草，又稱北冬蟲(chóng)夏草。在分類學(xué)上屬子囊菌亞門、核菌綱、麥角菌目、蟲(chóng)草屬。是昆蟲(chóng)的蛹感染蟲(chóng)草菌后形成的蟲(chóng)與菌的復(fù)合體。北蟲(chóng)草主要分布在我國(guó)東北三省部分地區(qū)的沃土中。其營(yíng)養(yǎng)與天然野生冬蟲(chóng)夏草有相似的醫(yī)療和保健功效，是一味名貴的藥用真菌。
北蟲(chóng)草的生長(zhǎng)基本條件主要是營(yíng)養(yǎng)、空氣、溫度、水份、濕度、光線、ph值等七大因素，現(xiàn)科學(xué)研究人員已經(jīng)對(duì)其進(jìn)行了深入研究，并獲得了較好的成果，可以說(shuō)實(shí)現(xiàn)了北蟲(chóng)草生長(zhǎng)條件的掌控。而如何根據(jù)北蟲(chóng)草的生長(zhǎng)條件人工培育出北蟲(chóng)草是現(xiàn)有技術(shù)中研究的課題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決上述課題，本發(fā)明提供一種北蟲(chóng)草的培育方法，其包括下述步驟：
（1）北蟲(chóng)草母種培育；
在100重量份水中，混合20%馬鈴薯浸出液、2%瓊脂、2%葡萄糖、2%蛋白胨、2%磷酸二氫鉀、2%硫酸鎂消毒滅菌后制得母種培養(yǎng)基；將北蟲(chóng)草母種菌種移植在該母種培養(yǎng)基上，23℃下培育15天后，改為22℃繼續(xù)培育8-10天；
（2）北蟲(chóng)草原種培育；
將玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、水95.35%、硫酸鎂0.5%混合均勻后高壓滅菌、ph值調(diào)至6.5制備原種培養(yǎng)基；
在無(wú)菌條件下，在原種培養(yǎng)基上接種米粒大小的母種菌塊，24-26℃發(fā)菌培養(yǎng)5-6天；
（3）北蟲(chóng)草栽培；
以大米或小米與水的重量比為1:1.7-1.8混合后高壓滅菌制得培養(yǎng)基，將步驟（2）中培育后的菌塊移植在該培養(yǎng)基中；
在溫度18-22℃、濕度65-70%的條件下發(fā)菌，23天后，每天散射光照不少于8小時(shí)，晚上日光照照射16小時(shí)，室內(nèi)溫度20-22℃、夜里降低3-5℃、空氣濕度控制在70%，每天通氣2-3次，每次通氣20-40分鐘；
出座后溫度控制在18-20℃，繼續(xù)培育七天后，溫度控制在20-22℃，光線散射光充足、濕度提到85%，待北蟲(chóng)草平面突起形成小米粒原基時(shí)，補(bǔ)充新鮮空氣；待子座長(zhǎng)出1公分長(zhǎng)后，濕度提高到90%，15-20天后采收。
此外，在原種培養(yǎng)基中加入2%的營(yíng)養(yǎng)液。
研究人等經(jīng)過(guò)多年的艱辛努力，他們根據(jù)野生蟲(chóng)草生長(zhǎng)基本條件原理，堅(jiān)持實(shí)踐，反復(fù)試驗(yàn)，獲得了上述培育技術(shù)，采用馬令薯浸出液、葡萄糖、蛋白胨、米等培養(yǎng)基配方，進(jìn)行母種培養(yǎng)基；液體原種培養(yǎng)基；栽培種培養(yǎng)基等制作；并進(jìn)行嚴(yán)格消毒滅菌，冷卻，無(wú)雜菌接種，一系列精細(xì)管理流程技術(shù)措施后，一年內(nèi)基地種植了一百多萬(wàn)瓶北蟲(chóng)草，長(zhǎng)勢(shì)良好，預(yù)計(jì)產(chǎn)干品可達(dá)3000余公斤。產(chǎn)品已送往省醫(yī)學(xué)科學(xué)院質(zhì)量檢測(cè)，各種藥物營(yíng)養(yǎng)成份含量指數(shù)達(dá)到野生蟲(chóng)草基本相同。其中蟲(chóng)草多糖、蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草素的含量高于野生蟲(chóng)草50-100%。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳述，但本發(fā)明并不限定于此。
實(shí)施例
北蟲(chóng)草母種制法及培養(yǎng)
（一）一級(jí)母種培養(yǎng)基配制方法
洗凈玻璃試管，稱好各種原材料，先把馬令薯洗凈削皮去芽眼，然后切片，放在鋁鍋燒煮。按水的比例加20%切片后的馬令薯，煮開(kāi)后保溫20分鐘，再用6層紗布過(guò)濾，捏緊渣汁，去渣，再補(bǔ)足水份原等量。再把按各2%剪碎的瓊脂，葡萄糖，蛋白胨，磷酸二氫鉀、硫酸鎂等微量元素按比例原料倒入鍋內(nèi)，文火溶解后再過(guò)濾。此時(shí)就可分裝玻璃試管。每支試管裝量1/5。擦凈管口，塞好棉塞，再放在滅菌鍋消毒。
當(dāng)消毒鍋固緊蓋后立即加熱升溫至0.5公斤/公分2后。即放凈冷氣降壓至0后，重新升溫至1.2公斤/公分2，文火保溫40分鐘，然后開(kāi)蓋冷卻至常溫，乘熱進(jìn)行三分之二斜面面積。隔2天后，觀察玻璃管的冷凝水回落在底面，觀察平面仍很平坦和無(wú)雜菌叢生就可等待接種。
（二）一級(jí)母種的接種方法
如果確定母種轉(zhuǎn)管后接種的母種。先消毒接種室，再消毒母種試管和其它器具。其方法是將所用的母種試管、接種工具全部放在超凈工作臺(tái)上，關(guān)好門窗，再將消毒氣化劑點(diǎn)燃汽化，迅速關(guān)好門窗，同時(shí)把紫外線燈打開(kāi)，待氣化40min就可準(zhǔn)備接種。
接種的方法是先把母種外表、器皿具在點(diǎn)燃的酒精燈上消毒10秒鐘時(shí)間，再把母種試管口對(duì)準(zhǔn)酒精燈火焰，并把棉塞輕輕拉出。再用接種鏟把菌種劃成數(shù)段，然后用接種刀按數(shù)段的接種段片再劃成米粒大少的菌種移植在新的試管斜面中間培養(yǎng)基上。最后把原來(lái)的棉塞在酒精燈上消毒3秒鐘后迅速塞回試管口，這樣就完成一支母種試管接種的工作任務(wù)，以后就按此方法順序類推接種。
（三）北蟲(chóng)草母種發(fā)菌管理方法
當(dāng)北蟲(chóng)草母種移植在培養(yǎng)基上后，立即將接好的菌移送在23℃左右的溫室里恒溫培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)5-7天的適宜溫度發(fā)菌，所接入的菌種開(kāi)始萌發(fā)菌絲。并向斜面周邊延伸生長(zhǎng)。此時(shí)就檢查所接入的菌種周圍有否雜菌生長(zhǎng)，一旦發(fā)現(xiàn)雜菌立即揀出去掉。到了12-15天后，蟲(chóng)草母種的菌絲在適宜的溫度已經(jīng)長(zhǎng)到斜面試管2/3面積時(shí)，這時(shí)候室溫降至22℃左右，目的是使菌絲緩慢生長(zhǎng)，起到復(fù)壯的作用。到了20天以后，整個(gè)菌絲布滿斜面，等3-5天后就可接北蟲(chóng)草原種了。
四、北蟲(chóng)草原種培養(yǎng)技術(shù)方法
當(dāng)北蟲(chóng)草母種培養(yǎng)成功后，就可以培養(yǎng)北蟲(chóng)草原種，具體培養(yǎng)方法是：
（一）培養(yǎng)基配方：
①玉米粉1%；②葡萄糖2%；③蛋白胨1%；④酵母粉0.5%；⑤磷酸二氫鉀0.1%，水95.35%；⑥硫酸鎂0.5%；⑦ph值調(diào)至6.5左右。
（二）培養(yǎng)方法
①制作原種培養(yǎng)基：將這些原料溶于水后裝在500毫升玻璃瓶中，每個(gè)玻璃瓶裝量150毫升，然后用8層紗布做成蓋蓋住瓶口扎緊，立即放在高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行消毒，待壓力表上升至0.5公斤/公分2壓力時(shí)，即放凈冷氣的指針降至0后，再關(guān)掉放氣閥門，待溫度表指針逐漸上升至1.2公斤/公分2后就開(kāi)始保溫45分鐘后，慢慢下降指針至0，然后開(kāi)蓋冷卻至常溫，再移入接種箱等待接種。
②原種接種方法：先把已消毒好的北蟲(chóng)草液體原種培養(yǎng)基移放在超凈工作臺(tái)上。并把北蟲(chóng)草母種和接種勾，酒精燈，消毒棉等接種物也放在超凈工作臺(tái)上，工作服一起消毒。此時(shí)就開(kāi)始在接種室開(kāi)氣化消毒劑，立即關(guān)閉所有門、窗、密閉消毒同時(shí)打開(kāi)紫外線燈。待40min后，將煙霧放凈，關(guān)閉紫外線燈，接種人員就可進(jìn)行接種。接種的方法是，穿好工作服，打開(kāi)超凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)，點(diǎn)燃酒精燈，左手拿著母種試管對(duì)準(zhǔn)火焰口，右手拿著鐵勾在酒精燈火焰消毒3-5秒種后立即伸進(jìn)母種試管內(nèi)把菌種分成5-7段，再用左手迅速將紗布瓶蓋打開(kāi)，右手即把一段菌塊勾入瓶?jī)?nèi)速將瓶蓋按原樣蓋緊。第二瓶接種的方法隨第一瓶一樣同。
當(dāng)北蟲(chóng)草原種接好后，就迅速移入26℃恒溫培養(yǎng)室里發(fā)菌培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)適宜的溫度6天的發(fā)菌培養(yǎng)，栽培者要檢查北蟲(chóng)草菌液的顏色為深棕色，瓶口聞?dòng)泻軡獾谋毕x(chóng)草氣味，就能辨別出菌種的優(yōu)劣質(zhì)量。如有發(fā)菌瓶?jī)?nèi)濃度低、氣味臭，并有五顏六色的菌液，就是有雜菌污染的菌液，不用。通氧培養(yǎng)。
五、北蟲(chóng)草栽培方法
北蟲(chóng)草栽培室內(nèi)栽培，搭架子，散射光線很需要，床架要牢固，通風(fēng)條件要好，有水電方便使用噴水加濕，調(diào)節(jié)光線，操作靈活，水泥地、沙地都可，門窗要大一點(diǎn)，并裝有防蠅紗窗等設(shè)施。
1、北蟲(chóng)草栽培容器是廣口罐頭瓶或?qū)Ｓ闷髅?，封蓋可用封口膜，用皮套套緊。
2、栽培種植北蟲(chóng)草培養(yǎng)基配方和消毒。①大米或小麥30克，選擇無(wú)霉變高質(zhì)量的，水量1:1.7～1.8比量。也可在水中加些營(yíng)養(yǎng)液。封口膜封平，立即移放在高壓殺菌鍋內(nèi)消毒。滅菌也可以用常壓滅菌鍋。
3、當(dāng)消毒培養(yǎng)基移放進(jìn)高壓滅菌鍋內(nèi)消毒時(shí)，壓力表指針上升到0.5公斤/公分2時(shí)，立即打開(kāi)放氣閥，讓壓力表指針慢慢降至0時(shí)，說(shuō)明放凈冷氣，然后關(guān)閉閥門，待鍋內(nèi)溫度升至1.2公斤/公分2后，恒定保溫1小時(shí)，再慢慢退溫至0指針，（節(jié)省時(shí)間也可慢慢打開(kāi)放氣閥放氣降壓）并開(kāi)蓋冷卻至常溫等待接種。
待溫度降至30℃以下就可接種。其方法是將接種槍等器具，菌種，滅過(guò)菌的培養(yǎng)基放入接種室內(nèi)，用以上的方法進(jìn)行氣化消毒，按無(wú)雜菌要求進(jìn)行接種。稀釋后的菌種每瓶500ml可接種200瓶，移入培養(yǎng)室發(fā)菌培養(yǎng)。
菌瓶未搬進(jìn)以前，先用殺菌劑將培養(yǎng)室徹底消毒，然后把已接好菌種的北蟲(chóng)草排放在牢固的架子上。在發(fā)菌階段的前4-5天室溫度控制在16-20℃之間，以后調(diào)整至18-22℃之間，濕度控制在65-70%之間。每天進(jìn)行對(duì)流通氣50-80min，可根據(jù)培養(yǎng)室內(nèi)的實(shí)際情況調(diào)整。經(jīng)過(guò)7-15天的培養(yǎng)，北蟲(chóng)草菌絲長(zhǎng)滿全瓶。再經(jīng)過(guò)4-5天散射光的培養(yǎng)，使菌絲營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)成熟，，同時(shí)挑凈雜菌，繼續(xù)做好清潔衛(wèi)生防蠅工作。
在催蕾出子座過(guò)程中主要做好四方面工作。①每天散射光照不少于8小時(shí)，晚上還用日光照照射16小時(shí)；②室內(nèi)溫度20-22℃，夜里適當(dāng)降低3-5℃。③室內(nèi)空氣濕度控制在70%左右。④每天通氣2-3次，每次通氣20-40分鐘，待菌絲由白色轉(zhuǎn)為桔黃色后并陸續(xù)紐結(jié)成園丘狀隆起原基，分秘黃色水珠，就進(jìn)行做好長(zhǎng)北蟲(chóng)草子座準(zhǔn)備工作。
①出子座管理的溫度，出子座前6-7天，室溫控制在18-20℃，以后室溫適當(dāng)提高2℃，但不能超過(guò)25℃。②光線散射光要充足，但不能直射光照。③濕度提到85%。待北蟲(chóng)草平面突起形成小米粒原基時(shí)，要適當(dāng)通氣補(bǔ)充新鮮空氣，但不揭瓶蓋，可在瓶蓋上刺孔5-8個(gè)（20號(hào)的針頭），以利瓶?jī)?nèi)氣體交換。待子座長(zhǎng)出1公分長(zhǎng)后。將室內(nèi)濕度提高到90%左右?？臻g墻壁噴水以提高濕度。當(dāng)北蟲(chóng)草子座長(zhǎng)至1-2cm時(shí)，可補(bǔ)一次營(yíng)養(yǎng)液，按照通風(fēng)換氣相結(jié)合的辦法進(jìn)行管理15-20天后即可采收。