本發(fā)明涉及一種高效植物多糖多酚小rna提取方法，屬植物提取技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

從植物中提取多糖多酚小rna，是當(dāng)前開展植物研究工作的重要前提，當(dāng)前在進(jìn)行植物多糖多酚小rna提取作業(yè)時，主要是通過大量使用裂解液、沉淀劑等方式實現(xiàn)對植物中小rna提取作業(yè)的需要，雖然這種方式可有效的獲得植物相關(guān)多糖多酚小rna提取物，但在實際工作中法，當(dāng)前的提取方法獲得植物小rna往往均不能有小的對植物所含的多糖多酚進(jìn)行有效的清理，從而導(dǎo)致提取得到的植物小rna中含有大量的雜質(zhì)，從而導(dǎo)致后續(xù)小rna檢測工作難度大，嚴(yán)重影響了檢測工作的工作效率和精度，除此之外，由于當(dāng)前傳統(tǒng)的植物小rna提取中，主要依靠大量使用裂解液等原料進(jìn)行，因此也不同程度導(dǎo)致了提取作業(yè)的操作工序存在較大的差異，提取作業(yè)過程中易產(chǎn)生大量的化學(xué)污染物，因此針對這一問題，迫切需要開發(fā)一種全新的植物小rna提取方式，以滿足實際使用的需要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的就在于克服上述不足，提供一種高效植物多糖多酚小rna提取方法

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種高效植物多糖多酚小rna提取方法，包括以下步驟：

第一步，制備提取基材，首先選取生長旺盛且無病蟲害的植物組織，將截取的植物組織通過液氮進(jìn)行凍干，并在-80℃—-40℃環(huán)境中進(jìn)行保存從而獲得成品提取基材；

第二步，制備提取液，將第一步制備的提取基材置于液氮預(yù)冷的研磨設(shè)備中進(jìn)行研磨作業(yè)，制備得到80—200目的粉末狀植物組織，然后將粉末狀植物組織添加到ctab裂解液中并混合均勻，然后將混合物在20℃—40℃環(huán)境中靜置3—10分鐘，且靜置后的混合物溫度為0℃—10℃；其中研磨作業(yè)時，研磨溫度不高于-40℃；

第三步，一次離心作業(yè)，將第二步制備的混合物防治到離心機(jī)上，在0℃—10℃恒定溫度下，以10000—22000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5—10分鐘，然后將離心得到的液體通過真空負(fù)壓分離設(shè)備進(jìn)行固液分離，然后在分離后的液體中加入trizol試劑并攪拌均勻后靜置1—5分鐘，然后在分離后的液體中加入濃度為15％—25％的peg8000溶液和1mnacl溶液并攪拌均勻，然后靜置10—30分鐘；

第四步，二次離心作業(yè)，將第三步制備的過濾液在0℃—10℃恒定環(huán)境下添加到離心機(jī)中，并向過濾液中添加入異丙醇，然后由離心機(jī)對混合物以10000—22000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5—10分鐘，然后將混合液在-40℃—0℃環(huán)境中靜置1—3小時，然后將混合液溫度自然升溫至0℃—4℃后，以離心機(jī)在10000—22000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5—10分鐘，然后靜置5—10分鐘，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物備用；

第五步，提純，向第四步中制備得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，對沉淀物進(jìn)行清洗，然后將清洗后的沉淀物自然陰干，然后由有機(jī)溶劑對干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小rna。

進(jìn)一步的，所述的第二步中，ctab裂解液的濃度為2％，ctab裂解液的使用量與粉末狀植物組織量的比為1：1—5。

進(jìn)一步的，所述的trizol試劑的濃度為2％—20％，且分離后的液體量與trizol試劑使用量的比為1：1.5—5。

進(jìn)一步的，所述的15％—25％的peg8000溶液和1mnacl溶液的使用比為1：1—1.5，15％—25％的peg8000溶液和1mnacl溶液的總量與分離后的液體量比為1：2—10。

進(jìn)一步的，所述的第四步中，異丙醇使用量為過濾液總量的1/10—1/3。

本發(fā)明工藝簡單，操作簡便且操作效率高，一方面可極大的提高多糖多酚小rna提取做的的工作效率和純度，降低提取作業(yè)的工作成本及提取作業(yè)中污染性原料的使用量，另一方面本發(fā)明實施方法便于掌握，操作控制精度高，可有效的提高多糖多酚小rna提取作業(yè)的規(guī)范性和標(biāo)準(zhǔn)型，便于多糖多酚小rna提取作業(yè)技術(shù)的交流和經(jīng)驗積累。

附圖說明

圖1為本發(fā)明流程示意圖；

具體實施方式

實施例1

如圖1所示，一種高效植物多糖多酚小rna提取方法，包括以下步驟：

第一步，制備提取基材，首先選取生長旺盛且無蟲害的植物組織，將截取的植物組織通過液氮進(jìn)行凍干，并在-40℃環(huán)境中進(jìn)行保存從而獲得成品提取基材；

第二步，制備提取液，將第一步制備的提取基材置于液氮預(yù)冷的研磨設(shè)備中進(jìn)行研磨作業(yè)，制備得到100目的粉末狀植物組織，然后將粉末狀植物組織添加到ctab裂解液中并混合均勻，然后將混合物在35℃環(huán)境中靜置5分鐘，且靜置后的混合物溫度為5℃；其中研磨作業(yè)時，研磨溫度為-40℃；

第三步，一次離心作業(yè)，將第二步制備的混合物防治到離心機(jī)上，在0℃恒定溫度下，以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作8分鐘，然后將離心得到的液體通過真空負(fù)壓分離設(shè)備進(jìn)行固液分離，然后在分離后的液體中加入trizol試劑并攪拌均勻后靜置3分鐘，然后在分離后的液體中加入濃度為15％的peg8000溶液和1mnacl溶液并攪拌均勻，然后靜置20分鐘；

第四步，二次離心作業(yè)，將第三步制備的過濾液在0℃恒定環(huán)境下添加到離心機(jī)中，并向過濾液中添加入異丙醇，然后由離心機(jī)對混合物以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5分鐘，然后將混合液在0℃環(huán)境中靜置1—3小時，然后將混合液溫度自然升溫至4℃后，以離心機(jī)在22000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5分鐘，然后靜置10分鐘，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物備用；

第五步，提純，向第四步中制備得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，對沉淀物進(jìn)行清洗，然后將清洗后的沉淀物自然陰干，然后由有機(jī)溶劑對干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小rna。

本實施例中，所述的第二步中，ctab裂解液的濃度為2％，ctab裂解液的使用量與粉末狀植物組織量的比為1：2。

本實施例中，所述的trizol試劑的濃度為2％，且分離后的液體量與trizol試劑使用量的比為1：1.5。

本實施例中，所述的15％—25％的peg8000溶液和1mnacl溶液的使用比為1：1.5，15％—25％的peg8000溶液和1mnacl溶液的總量與分離后的液體量比為1：2。

本實施例中，所述的第四步中，異丙醇使用量為過濾液總量的1/10。

實施例2

如圖1所示，一種高效植物多糖多酚小rna提取方法，包括以下步驟：

第一步，制備提取基材，首先選取生長旺盛且無蟲害的植物組織，將截取的植物組織通過液氮進(jìn)行凍干，并在-80℃環(huán)境中進(jìn)行保存從而獲得成品提取基材；

第二步，制備提取液，將第一步制備的提取基材置于液氮預(yù)冷的研磨設(shè)備中進(jìn)行研磨作業(yè)，制備得到200目的粉末狀植物組織，然后將粉末狀植物組織添加到ctab裂解液中并混合均勻，然后將混合物在40℃環(huán)境中靜置3分鐘，且靜置后的混合物溫度為10℃；其中研磨作業(yè)時，研磨溫度為-50℃；

第三步，一次離心作業(yè)，將第二步制備的混合物防治到離心機(jī)上，在℃恒定溫度下，以15000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作7分鐘，然后將離心得到的液體通過真空負(fù)壓分離設(shè)備進(jìn)行固液分離，然后在分離后的液體中加入trizol試劑并攪拌均勻后靜置3分鐘，然后在分離后的液體中加入濃度為15％的peg8000溶液和1mnacl溶液并攪拌均勻，然后靜置15分鐘；

第四步，二次離心作業(yè)，將第三步制備的過濾液在5℃恒定環(huán)境下添加到離心機(jī)中，并向過濾液中添加入異丙醇，然后由離心機(jī)對混合物以20000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作6分鐘，然后將混合液在-5℃環(huán)境中靜置3小時，然后將混合液溫度自然升溫至4℃后，以離心機(jī)在20000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5分鐘，然后靜置6分鐘，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物備用；

第五步，提純，向第四步中制備得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，對沉淀物進(jìn)行清洗，然后將清洗后的沉淀物自然陰干，然后由有機(jī)溶劑對干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小rna。

本實施例中，所述的第二步中，ctab裂解液的濃度為2％，ctab裂解液的使用量與粉末狀植物組織量的比為1：3。

本實施例中，所述的trizol試劑的濃度為8％，且分離后的液體量與trizol試劑使用量的比為1：1.5。

本實施例中，所述的17％的peg8000溶液和1mnacl溶液的使用比為1：1.2，15％的peg8000溶液和1mnacl溶液的總量與分離后的液體量比為1：7。

本實施例中，所述的第四步中，異丙醇使用量為過濾液總量的1/5。

本發(fā)明工藝簡單，操作簡便且操作效率高，一方面可極大的提高多糖多酚小rna提取做的的工作效率和純度，降低提取作業(yè)的工作成本及提取作業(yè)中污染性原料的使用量，另一方面本發(fā)明實施方法便于掌握，操作控制精度高，可有效的提高多糖多酚小rna提取作業(yè)的規(guī)范性和標(biāo)準(zhǔn)型，便于多糖多酚小rna提取作業(yè)技術(shù)的交流和經(jīng)驗積累。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。