一種羊肚菌菌種分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食用菌菌種分離領(lǐng)域，具體涉及一種羊肚菌菌種分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羊肚菌(M.esculenta)又稱羊肚菜、羊蘑，屬于羊肚菌科，羊肚菌屬，于1818年被發(fā)現(xiàn)，因其結(jié)構(gòu)與盤菌相似，上部呈褶皺網(wǎng)狀，像個羊肚，因此取名為羊肚菌。羊肚菌味道鮮美、脆嫩可口，營養(yǎng)非常豐富，含豐富的蛋白質(zhì)、多糖、碳水化合物、多種維生素、20多種氨基酸以及多種微量元素，被譽為食品之冠。羊肚菌具有補腎壯陽、補腦、提神之功效，長期食用可防癌抗癌，抑制腫瘤，預(yù)防感冒，增強人體免疫力，是宴席上的珍品，又是醫(yī)藥中久負盛名的良藥，過去人們把羊肚菌作為貢品獻給皇帝，如今已成為出口西歐國家的高檔食品，是一種不含任何激素，無任何副作用的天然保健品，現(xiàn)主要分布于云南、四川、甘肅、新疆、陜西、河北、遼寧等地。
[0003]目前，羊肚菌的人工栽培出現(xiàn)很多問題，重復(fù)性差，產(chǎn)量不高，參差不齊，品質(zhì)差，很難實現(xiàn)生產(chǎn)推廣，其很大原因是菌種不純造成的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對上述不足之處而提供的一種羊肚菌菌種分離方法，該方法分離得到的羊肚菌菌種非常純，能改善人工栽培中出現(xiàn)的重復(fù)性差，產(chǎn)量不高，采收時菌株參差不齊，品質(zhì)差等問題，該方法得到的羊肚菌純菌種在栽培過程中穩(wěn)定性好，栽培得到的子實體長勢好，長勢均勻，產(chǎn)量高。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:
[0006]一種羊肚菌菌種分離方法，包括以下步驟:
[0007](I)種菇選擇:選擇第一潮菇，單生，個體健壯的羊肚菌，并做記號；
[0008](2)消毒:種菇采收后用0.2%升汞溶液消毒Imin后取出，再用無菌水沖洗，最后用無菌濾紙把水分吸干；或用75%酒精棉球?qū)w及菌柄進行消毒；
[0009](3)收集孢子:用無菌刀切掉多余菌柄，剩余1.0?2.1cm，把菇直立，菌柄朝下插入鋁線制作的支持物上，然后放入鋪有無菌濾紙條的平皿上，蓋上鐘罩，然后將其置于17 ?25°C，放置 24 ?36h ；
[0010](4)單孢分離:將收集有孢子的濾紙條浸入無菌水，采用稀釋分離法，將孢子濃度稀釋為300?400個/mL ;在無菌條件下，吸取0.1mL孢子懸浮液滴到平板培養(yǎng)基上，用涂布棒將其涂勻，然后置于24?25°C培養(yǎng)；將單個孢子萌發(fā)而成的菌落移至斜面試管中重新培養(yǎng)，得羊肚菌純種。
[0011]本發(fā)明提供的一種羊肚菌菌種分離方法，具有以下有益效果:分離方法簡單，成本低，分離出的菌種純，對人工栽培過程中菌種穩(wěn)定性、菌種長勢、產(chǎn)量有很大幫助。
【具體實施方式】
[0012]實施例
[0013]一種羊肚菌菌種分離方法，包括以下步驟:
[0014](I)種菇選擇:選擇第一潮菇，單生，個體健壯的羊肚菌，并做記號；
[0015](2)消毒:種菇采收后用0.2%升汞溶液消毒Imin后取出，再用無菌水沖洗，最后用無菌濾紙把水分吸干；或用55%酒精棉球?qū)w及菌柄進行消毒；
[0016](3)收集孢子:用無菌刀切掉多余菌柄，剩余1.0?2.1cm，把菇直立，菌柄朝下插入鋁線制作的支持物上，然后放入鋪有無菌濾紙條的平皿上，蓋上鐘罩，然后將其置于17?25°C，放置24?36h，無菌濾紙條上有褐色羊肚菌孢子印；
[0017](4)單孢分離:
[0018]制備無菌水:取10支試管，其中I支裝1mL蒸餾水，其余9支裝9mL蒸餾水，高壓滅菌得無菌水；
[0019]制備孢子懸液:將一小塊含有孢子的濾紙條浸入1mL無菌水試管中，震蕩試管使孢子分散成懸液，取ImL孢子懸液于第2支試管中，震蕩試管使孢子分散成懸液，按照上述操作依次進行，使其孢子濃度稀釋為300?400個/mL ；
[0020]平板涂布法:在無菌條件下，吸取0.1mL孢子懸浮液滴到平板培養(yǎng)基上，用涂布棒將其涂勻，蓋上皿蓋，封口，然后置于24?25°C培養(yǎng)；
[0021]保種:經(jīng)過鏡檢確定孢子萌發(fā)的菌落是由單個孢子萌發(fā)而成，可使用打孔器打孔把菌落移至斜面試管中重新培養(yǎng)，打孔器外徑應(yīng)小于顯微鏡視野范圍，確保得到純種。
[0022]將收集有孢子的濾紙條浸入無菌水，采用稀釋分離法，將孢子濃度稀釋為300?400個/mL ;在無菌條件下，吸取0.1mL孢子懸浮液滴到平板培養(yǎng)基上，用涂布棒將其涂勻，然后置于24?25°C培養(yǎng)5天；然后挑單胞，將單胞移至斜面試管中重新培養(yǎng)，得羊肚菌純種。
【主權(quán)項】
1.一種羊肚菌菌種分離方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)種菇選擇:選擇第一潮菇，單生，個體健壯的羊肚菌，并做記號； (2)消毒:種菇采收后用0.2%升汞溶液消毒Imin后取出，再用無菌水沖洗，最后用無菌濾紙把水分吸干；或用75%酒精棉球?qū)w及菌柄進行消毒； (3)收集孢子:用無菌刀切掉多余菌柄，剩余1.0?2.1cm，把菇直立，菌柄朝下插入鋁線制作的支持物上，然后放入鋪有無菌濾紙條的平皿上，蓋上鐘罩，然后將其置于17?25°C，放置 24 ?36h ； (4)單孢分離:將收集有孢子的濾紙條浸入無菌水，采用稀釋分離法，將孢子濃度稀釋為300?400個/mL ;在無菌條件下，吸取0.1mL孢子懸浮液滴到平板培養(yǎng)基上，用涂布棒將其涂勻，然后置于24?25°C培養(yǎng)；將單個孢子萌發(fā)而成的菌落移至斜面試管中重新培養(yǎng)，得羊肚菌純種。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種羊肚菌菌種分離方法，包括以下步驟：(1)種菇選擇；(2)消毒；(3)收集孢子：菇直立，菌柄朝下插入鋁線制作的支持物上，然后放入鋪有無菌濾紙條的平皿上，蓋上鐘罩，置于17～25℃放置24～36h；(4)單孢分離：將含有孢子的濾紙條浸入無菌水，采用稀釋分離法，將孢子濃度稀釋為300～400個/mL；無菌條件下，吸取0.1mL孢子懸浮液滴到平板培養(yǎng)基上，用涂布棒將其涂勻，然后置于24～25℃培養(yǎng)；將單個孢子萌發(fā)而成的菌落移至斜面試管中重新培養(yǎng)，得羊肚菌純種。該方法分離得到的羊肚菌菌種非常純，能改善人工栽培中出現(xiàn)的重復(fù)性差，產(chǎn)量不高，采收時菌株參差不齊，品質(zhì)差等問題。
【IPC分類】C12N1/14
【公開號】CN104928195
【申請?zhí)枴緾N201510406158
【發(fā)明人】黃春貴
【申請人】青川縣智農(nóng)農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年7月10日