一種二萜類化合物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種二萜類化合物及其制備方 法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前對急慢性炎癥的治療主要以抗生素、激素類藥物為主，這些藥物的治療雖然 能收到良好的效果，但因耐藥菌株的不斷增加，有越來越多的病例盡管用抗生素治療，病情 卻得不到有效控制，而且抗生素在臨床應(yīng)用中產(chǎn)生副作用的病例是屢見不鮮。部分炎癥疾 病系病毒感染所致，抗生素基本無效。近年來，中外研究人員逐漸將目光投向資源豐富、純 天然的中草藥、民族藥，希望從中尋找新的抗炎藥物。目前從中草藥、民族藥中發(fā)現(xiàn)了白芥 子苷、阿魏酸、升麻苷、槲皮苷、苦參生物堿、大黃素、魚腥草素、南蛇藤素等一系列天然抗炎 藥物。這些天然藥物表現(xiàn)出的良好抗炎活性日益證明從天然產(chǎn)物中篩選抗炎藥物是一個很 有前景的方向。
[0003]黑果土當(dāng)歸（ArabiaHand. -Mazz)系五加科（Araliaceae)橡木屬 植物，民間以其根入藥，入脾、胃二經(jīng)。該植物有補中益氣、托毒外出、消炎的功效，用于淋巴 腺炎、慢性化膿性骨髓炎和癤癰等癥。該屬植物化學(xué)成分主要含二萜、三萜皂苷、香豆素、黃 酮、木脂素及留醇。目前對黑果土當(dāng)歸植物化學(xué)成分以及藥理活性的研究報道較少。本發(fā) 明試圖對黑果土當(dāng)歸中具有抗炎作用的化合物做深入研究，以期發(fā)現(xiàn)其中的抗炎活性天然 產(chǎn)物，為篩選高效、低毒的抗炎藥物提供依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一目的是提供一種二萜類化合物；第二目的在于提供所述二萜類化合 物的制備方法；第三目的在于提供所述二萜類化合物的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的，所述的二萜類化合物是以黑果土當(dāng)歸根為 原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，該化合物 分子式為C2QH3Q03,命名為14-氧-對映-8 (9)，15-海松二稀酸（14-oxo-ent-pimara -8 (9)，15-diene_19-〇icacid)，具有下述結(jié)構(gòu)式：
[0006] 本發(fā)明的第二目的是這樣實現(xiàn)的，是以黑果土當(dāng)歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶 劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲得，具體為： A、 浸膏提取：將黑果土當(dāng)歸根晾干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒徑大小的顆粒，加入黑果 土當(dāng)歸根重量比4~8倍的體積百分濃度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次，每 次l~3h，合并提取液，提取液過濾，減壓濃縮提取液至比重為1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有機溶劑萃?。航鯽中加入重量比2~4倍量的水，依次用與水等體積的石油醚、乙 酸乙酯和正丁醇溶劑進(jìn)行萃取，每種溶劑萃取4~6次，蒸去溶劑分別得到石油醚萃取物b、 乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d; C、 硅膠柱層析： 1) 將石油醚萃取物b上硅膠柱，裝柱硅膠為100~200目，用量為萃取物b重量6~8倍 量；用體積比為25:1~0:1的石油醚-乙酸乙酯有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮， 經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分； 2) 將1)中以5:1配比的石油醚-乙酸乙酯有機溶劑進(jìn)行洗脫得到的洗脫液e上硅 膠柱，裝柱硅膠為200~300目，用量為洗脫液e體積6~8倍量；用體積比15:1~0:1的石油 醚-乙酸乙酯有機溶劑梯度洗脫、濃縮，經(jīng)TLC檢測，合并相同的部分； D、 高效液相色譜分離：將C步驟2)中以2:1配比的石油醚-乙酸乙酯有機溶劑 進(jìn)行洗脫得到的洗脫液采用半制備高效液相色譜儀分離純化，即得所述的二萜類化合 物 14-氧-對映-8 (9)，15-海松二稀酸（14-〇x〇-ent_pimara-8 (9)，15-diene_19-〇ic acid) 〇
[0007] 本發(fā)明二萜類化合物是首次被分離出來的，通過核磁共振和其他波譜技術(shù)測定方 法確定為二萜類化合物，并表征其具體結(jié)構(gòu)為：
化合物 14-氧-對映-8(9)，15-海松二稀酸（14-〇x〇-ent_pimara -8(9)，15-diene-19-〇icacid)，為白色無定型粉末（溶劑為氯仿），|(x1d2'L3-14.8(c 0.15，CHC13);IR(KBr)譜在 3347，1710，1688，1645cm1 有吸收，表明分子中存在羧 基、羥基和雙鍵。HRESI-MS(附圖1)顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z317. 2128 [M-H] (calcd. 317. 2116)，結(jié)合NMR譜確定其分子式為C2(]H3(]03，不飽和度為6。4NMR(附圖2,數(shù)據(jù)歸屬 見表1)顯示分子中有3個甲基單峰，分別為1.29 (3H，s)，1.16 (3H，s)及0.99 (3H，s))，有 1個單取代雙鍵信號6.04 (1H，17.6，10.8Hz，H-15)，5.07 (1H，4 /= 10.8Hz,H-16a)，4.98 (1H，4 /= 17.6Hz,H-16b));13CNMR(附圖 3， 數(shù)據(jù)歸屬見表1)顯示分子中有20個碳，其中有7個季碳（含2個羰基碳和2個烯碳），2 個次甲基（含1個烯碳），8個亞甲基（含1個烯碳），及3個甲基。結(jié)合HSQC相關(guān)譜（附 圖4)，并對比文獻(xiàn)數(shù)據(jù)可證實，該化合物與已知化合物7-〇x〇-13-epi-pimara-8, 15-dien -18-oicacid結(jié)構(gòu)相似，區(qū)別在于分子中的酮羰基203.5)連接在分子中的14位， 而不是7位。進(jìn)一步經(jīng)HMBC相關(guān)（附圖5)、COSY相關(guān)（附圖6)和ROESY(附圖7)及與 文南犬（ChangL.C.，SongL.L. ,ParkE.J. ,LuyengiL. ,LeeK.J. ,FarnsworthN.R., PezzutoJ.M. ,KinghornD.BioactiveconstituentsofThujaoccidentails.Journal ofNaturalProducts. 2000,63(9): 1235-1238.)對比證實，使化合物的結(jié)構(gòu)最終得到 確認(rèn)，化合物具有下述結(jié)構(gòu)式：
通過SCIFINDER數(shù)據(jù)庫檢索和文獻(xiàn)查詢證實該化合物為新化合物。
[0008] 表1 本發(fā)明化合物的 1H-和13c-nmr(CDC13)數(shù)據(jù)
本發(fā)明的第三目的是這樣實現(xiàn)的，所述的二萜類化合物在制備預(yù)防和/或治療炎癥藥 物中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明所述的二萜類化合物進(jìn)行了體外抗炎活性測試，實驗結(jié)果顯示出良好的抑 制脂多糖（LPS)誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264. 7)產(chǎn)生一氧化氮（N0)的作用，可為醫(yī)用工業(yè) 提供有應(yīng)用價值的新化合物或先導(dǎo)化合物。
[0010] 本發(fā)明的優(yōu)點： 1、本發(fā)明中的二萜類化合物對LPS誘導(dǎo)RAW264. 7細(xì)胞產(chǎn)生N0有顯著的抑制作用，提 示其具有良好的抗炎活性，可以作為抗炎活性成分或先導(dǎo)化合物。
[0011] 2、本發(fā)明中的二萜類化合物可為天然存在的有機化合物，原料來源廣泛，并且化 合物制備操作流程簡單，所獲得的化合物純度高，隨后的工業(yè)化生產(chǎn)易實現(xiàn)。
【附圖說明】
[0012] 圖1是本發(fā)明化合物高分辨質(zhì)譜（HRESI-MS); 圖2是本發(fā)明化合物的核磁共振氫譜（:HNMR); 圖3是本發(fā)明化合物的核磁共振碳譜（13CNMR); 圖4是本發(fā)明化合物的HSQC相關(guān)譜； 圖5是本發(fā)明化合物的HMBC相關(guān)譜； 圖6是本發(fā)明化合物的COSY相關(guān)譜； 圖7是本發(fā)明化合物的R0ESY相關(guān)譜。
【具體實施方式】
[0013] 下面結(jié)合實施例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以 限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進(jìn)，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0014] 本發(fā)明所述的二萜類化合物，是以黑果土當(dāng)歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃 取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，該化合物分子式為C2(]H3(]03，命名為14-氧-對 映-8(9)，15-海松二稀酸（14-〇叉〇-6]11：-卩;[1]1&抑-8(9)，15-(116116-19-〇;[0&(^(1)，具有下述 結(jié)構(gòu)式：
[0015] 本發(fā)明所述的二萜類化合物的制備方法，是以黑果土當(dāng)歸根為原料，經(jīng)浸膏提取、 有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲得，具體為： A、 浸膏提取：將黑果土當(dāng)歸根晾干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒徑大小的顆粒，加入黑果 土當(dāng)歸根重量比4~8倍的體積百分濃度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次，每 次l~3h，合并提取液，提取液過濾，減壓濃縮提取液至比重為1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有機溶劑萃?。航鯽中加入重量比2~4倍量的水，依次用與水等體積的石油醚、乙 酸乙酯和正丁醇溶劑進(jìn)行萃取，每種溶劑萃取4~6次，蒸去溶劑分別得到石