一株微白黃鏈霉菌及其在微生物肥料中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株具有廣譜抗真菌活性的分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68(菌株保藏號為CGMCC No.12210)以及以該菌制備的微生物菌劑和以該菌為材料的微生物肥料的應(yīng)用技術(shù)。本發(fā)明提供的以分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68制備的微生物菌劑和以該菌為材料的微生物肥料的應(yīng)用技術(shù)不僅簡便、高效，而且對環(huán)境友好，且固體發(fā)酵的菌制劑孢子濃度可以達到百億。經(jīng)盆栽試驗證實，分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對小麥根腐病、甜瓜枯萎病、辣椒疫霉病及小麥全蝕病等土傳真菌病害的防治顯示了明顯的防控效果。本發(fā)明對于土傳真菌病害的綠色防控具有巨大的應(yīng)用前景。CGMCC No.1221020160314
【專利說明】
一株微白黃鏈霉菌及其在微生物肥料中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一株具有廣譜抗真菌活性和生防應(yīng)用潛力的來源于海洋的微白黃鏈 霉菌(Streptomyces albidoflavus)菌株W68,屬于海洋微生物的應(yīng)用和農(nóng)作物病害防治等 微生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 真菌性病害是造成農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)降低的最主要原因?；瘜W農(nóng)藥的頻繁使用導 致一些病原真菌抗藥性急劇增強、造成環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品的污染，以及破壞植物體內(nèi)外微生物 平衡而加劇病害的爆發(fā)流行等。
[0003] 土傳植物真菌病害的防治研究一直以來是一個熱點和難點，市面上的殺菌劑一般 來說對其沒有或是效果甚微。多年來人們也篩選到了一些抗土壤真菌的生防菌，如盾殼霉 (Coniothyrium minitans)用于紋枯病菌的防治、綠色木霉用于紋枯病菌及終極腐霉 (Py thium ul t imum)引起的苗病或根腐病在內(nèi)的各種病害的防治、灰綠鏈霉菌 (Streptomyces griseoviridis)用于棉花枯萎病的防治等。這些土壤真菌病害生防菌株雖 然都具有較強的抗真菌活性，但田間試驗效果較差，很多菌株發(fā)酵性能較差，并且在應(yīng)用中 通常有一定的地域局限性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一株具有廣譜抗病原真菌活性的微白黃鏈霉菌 (Streptomyces albidoflavus)菌株W68及其在防治土傳真菌病害中的應(yīng)用。
[0005] 實際上，本發(fā)明涉及一株微白黃鏈霉菌(Streptomyces albidoflavus)菌株W68。 [0006] 涉及活性成分為微白黃鏈霉菌(Streptomyces albidoflavus)菌株W68的菌劑。 [0007] 涉及用于防治土傳真菌病的微白黃鏈霉菌（Streptomyces albidoflavus)菌株 W68的菌劑。
[0008] 涉及微白黃鏈霉菌（Streptomyces albidoflavus)菌株W68作為微生物肥料在防 治土傳真菌病害中的應(yīng)用。
[0009] 所保護的是分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68以及以該菌制備的微生物制劑和 以該菌為材料的微生物肥料的應(yīng)用技術(shù)。
[0010] 本發(fā)明所述的深海微白黃鏈霉菌W68分離于海洋活性污泥，將定量的活性污泥裝 入含有小玻璃珠的無菌水中進行預處理，采用含有終濃度為SOμg/ml重鉻酸鉀的高氏一號 培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)，再使用PDA培養(yǎng)基進行純化培養(yǎng)。在NCBI數(shù)據(jù)庫中比對16S rDNA序 列，鑒定該菌屬于Streptomyces albidoflavus類群。目前該菌已于2016年3月14日保藏于 中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3 號(CGMCC)，保藏號為CGMCC No.12210
[0011] 本發(fā)明中所述分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68的生物學特征如下：
[0012] 表1.微白黃鏈霉菌W68的菌落特征
[0014] 微白黃鏈霉菌W68在各種培養(yǎng)基上的菌落特征見表1。平均培養(yǎng)時間為5-7天。在 PDA培養(yǎng)基上，氣生菌絲初期呈白色，粉狀，有白色和乳脂色次生叢。產(chǎn)孢后菌落呈現(xiàn)微黃 色。掃描電鏡觀察孢子絲成彎曲型，無螺旋，每條孢子絲含大約30到50個孢子;孢子呈圓柱 形，表面光滑，無凸起，無刺狀物（圖1)。
[0015] 本發(fā)明中所述分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68的抗真菌活性如下：
[0016] 分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68具有廣譜的抗真菌活性。平板對峙實驗顯示， 微白黃鏈霉菌W68對輪枝樣鐮刀菌(Fusarium verticillioides)、尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、平臍懦抱菌（Bipolaris sorokiniana)、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani)、 大麗輪枝孢菌(Verticillium dahliae)、灰色大角間座殼菌(Magnaporthe grisea)等引起 植物病害的多種病原真菌都具有很好的拮抗作用（圖2)。
[0017] 本發(fā)明中所述分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68的生防應(yīng)用技術(shù)及方法如下：
[0018] (1)以制備的微生物活菌制劑用于種子包被技術(shù)；
[0019] (2)以微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物菌劑或微生物肥料；
[0020] (3)以微白黃鏈霉菌W68為材料，以常見農(nóng)業(yè)廢棄物為固體發(fā)酵物料，可以獲得孢 子濃度為1 X 1〇1()個/g的微生物菌劑或微生物肥料；
[0021] (4)微生物菌劑或微生物肥料用途可用于包衣、浸種、蘸根、穴施、溝施、基肥使用。
[0022] 本發(fā)明中所述分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68的生防應(yīng)用效果如下：
[0023] 分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對小麥根腐病(Bipolaris sorokiniana)的 防控效果。在對小麥根腐病防治的盆栽試驗中，采用種子包被的方法，使用微白黃鏈霉菌 W68菌制劑提高了小麥種子在含有小麥根腐病菌的土壤中的出苗率，株高、植株干重均高于 發(fā)病組對照，且基本可以達到小麥種子在無病原菌土壤中的生長水平（圖3)。
[0024] 分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對甜瓜枯萎病(Fusarium oxysporum)的防控 效果。通過種子包被和灌根處理，使用微白黃鏈霉菌W68菌制劑可顯著克服由鐮刀菌枯萎病 所引起的作物連作障礙:在上年種過甜瓜的田間連續(xù)種植甜瓜，處理組的甜瓜苗成活率可 以達到93 %，空白對照組的苗成活率僅為13 % (圖4)。
[0025] 分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對辣椒疫霉病(Phytophthora capsici)的防 控效果。辣椒幼苗移栽時采用微白黃鏈霉菌W68菌制劑蘸根處理幼苗，可顯著減輕辣椒疫霉 病的發(fā)病程度。與對照組相比，蘸根處理過的植株生長周期延長約1-2周，干辣椒產(chǎn)量增加 5%(圖 5)。
[0026] 分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對小麥全蝕?。℅aeumannomyces · graminis) 的防控效果。深海微白黃鏈霉菌W68活菌制劑的使用可以明顯減少小麥抽穗期的病株率，降 低病情指數(shù)。與化學藥劑相比，微白黃鏈霉菌W68活菌制劑的防效明顯優(yōu)于化學試劑三唑 酮，與全蝕凈的防效相當。可見微白黃鏈霉菌W68活菌制劑可以完全替代化學藥劑的使用 (圖 6)。
【附圖說明】：
[0027]圖1是微白黃鏈霉菌W68在PDA培養(yǎng)基上的生長形態(tài)及掃描電鏡觀察圖。
[0028]圖2是微白黃鏈霉菌W68對多種植物病原菌的拮抗作用圖。
[0029] 圖3是微白黃鏈霉菌W68防控小麥根腐病的盆栽試驗結(jié)果圖。
[0030] 圖4是微白黃鏈霉菌W68防控甜瓜枯萎病的大田試驗結(jié)果圖。
[0031]圖5是微白黃鏈霉菌W68防控辣椒疫霉病的大田試驗結(jié)果圖。
[0032]圖6是微白黃鏈霉菌W68防控小麥全蝕病的大田試驗結(jié)果圖。
【具體實施方式】
[0033] 以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購買得到的。
[0034] 以下實施條例中，用到如下培養(yǎng)基：
[0035]高氏一號篩選培養(yǎng)基：可溶性淀粉20g，KN03 lg，K2HP〇4 0.5g，MgS〇4 · 7H20 0.5g， 恥(：10.58，卩6504.7!120 0.018，恥(：10.58，瓊脂2(^，自來水定容到100011^，？!17.2~7.4。 [0036] PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，馬鈴薯200g煮沸30分鐘后過濾取濾液，葡 萄糖20g，瓊脂15-20g，自來水定容到1000ml，自然pH; 115°C高溫滅菌。
[0037] ISP2培養(yǎng)基(酵母膏麥芽膏瓊脂）：酵母膏10g，葡萄糖4g，麥芽膏10g，瓊脂20g，自 來水定容到1000mL，pH 7.3。
[0038] ISP3培養(yǎng)基(燕麥粉瓊脂）：燕麥粉20g浸液，跡量鹽溶液lml，瓊脂20g，自來水定容 到1000mL，pH 7.2。
[0039] ISP4培養(yǎng)基（淀粉瓊脂）：可溶性淀粉 10g，MgC03 lg，K2HP〇4 lg，NaCl lg，NaN03lg， 瓊脂15g，自來水定容到1000ml，pH 7.2~7.4。
[0040] ISP5培養(yǎng)基(甘油天門冬素瓊脂）：L-天門冬素 lg，K2HP〇4 lg，跡量鹽溶液lml，甘油 l〇g，瓊脂20g，自來水定容到1000ml，pH 7 · 0~7 · 4
[0041] Bennete培養(yǎng)基:葡萄糖10g，牛肉膏l(xiāng)g，瓊脂15g，酵母膏l(xiāng)g，水解酪素 2g，自來水定 容到 1000mL，pH 7.3
[0042] Cazpek's 培養(yǎng)基（察氏）：蔗糖 30g，NaN03 2g，K2HP〇4 lg，MgS〇4 · 7H20 0.5g，KCl 0.58，卩6504.7!120 0.018，瓊脂2(^，自來水定容到10001^印!17.2~7.4。
[0043] Glu+Asp培養(yǎng)基（葡萄糖天門冬素瓊脂）：葡萄糖10g，天門冬素0.5g，K2HP04 0.5g， 瓊脂15g，自來水定容到1000mL，pH 7.2~7.4。
[0044] Glu+Asp+M培養(yǎng)基(葡萄糖天門冬素肉膏瓊脂）：葡萄糖10g，天門冬素0.5g，牛肉膏 2g，K2HP〇4 0.5g，瓊脂 15g，自來水定容到 1000mL，pH 6·8〇
[0045] 跡量鹽溶液：FeS〇4 · 7H20 0.1g，ZnS〇4 · 7H20 0.1g，MnCl2 · 4H20 O.lg，蒸餾水定 容至100ml。
[0046] 2 X YT液體培養(yǎng)基：蛋白胨16g，酵母粉lOg，NaCl 5g，自來水定容到lOOOmL，自然 pH〇
[0047] 實施例1
[0048] 菌株的分離、鑒定及生物學特性
[0049] -、菌株的分離和純化
[0050] 本實驗從海洋活性污泥中分離得到了若干株放線菌，過程如下：lg樣品加于滅菌 的裝有小玻璃珠和99ml無菌生理鹽水的300ml三角瓶中，28°C搖床培養(yǎng)lh。取1 ml懸液，采 用梯度稀釋的方法稀釋到1〇_4,取原液、1〇_2稀釋液和1〇_ 4稀釋液分別涂布重鉻酸鉀終濃度 為50μg/ml高氏一號培養(yǎng)基，分別于第5天、第7天和第10天挑取單菌落，再采用平板劃線法 于PDA培養(yǎng)基上進行純化和分離培養(yǎng)。
[0051] 利用20%甘油保存所得純化菌株于-80°c。
[0052]二、菌株的鑒定
[0053] 1、形態(tài)學鑒定
[0054]分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68的形態(tài)鑒定，運用平板劃線的方法在不同培 養(yǎng)基接種培養(yǎng)后進行形態(tài)觀察(表1)。
[0055] 2、分子鑒定
[0056] PCR擴增16S rDNA采用通用引物27F和1492R(退火溫度為56°C，靶序列約為 1400bp，序列如下：27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' ； 1492R:5'-TACGGCTACCTTACGACTT-3，。
[0057] PCR 反應(yīng)程序為 Γ。
[0058] 擴增序列進行純化測序后，通過NCBI的Blastn程序進行同源性比較，采用MEGA5軟 件運用Neighbor-Joining法建立系統(tǒng)發(fā)育樹。
[0059] 三、菌株的生物學特性
[0060] 使用Biolog GEN III微孔板對微白黃鏈霉菌W68進行94種表型測試，包括71種碳 源利用測試和23種化學敏感性測試(表2、表3)。
[0061 ] 表2.微白黃鏈霉菌W68對71種不同碳源的利用情況
[0062]
[0063] 備注:+表示可以利用，-表示不能利用
[0064] 表3.微白黃鏈霉菌W68對23種不同試劑的耐受性情況
[0066] 備注:+表示耐受，-表示不耐受 [0067]四、菌株的保藏
[0068] 分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68已于2016年3月14日保藏于中國微生物菌種 保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號）， 保藏號為CGMCC No.12210。
[0069] 實施例2
[0070] 分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68的抗真菌活性測試 [0071 ]采用平板對峙法測定微白黃鏈霉菌W68的抗真菌活性：
[0072] (1 )、鏈霉菌培養(yǎng)及收集:利用劃線法接種微白黃鏈霉菌微白黃鏈霉菌W68于TOA平 板上，28°C培養(yǎng)5-7天至產(chǎn)生足量孢子;刮取孢子于適量無菌水中制成孢子懸液備用。
[0073] (2)、病原菌的培養(yǎng):接種黃瓜立枯病菌、甘藍枯萎病菌、小麥根腐病菌、稻瘟病菌、 棉花枯萎病菌、棉花黃萎病菌于PDA平板上，28°C培養(yǎng)一周后使用。
[0074] (3)、平板對峙實驗：分別接種病原菌培養(yǎng)物菌塊于PDA平板中央，在距離病原菌 2.0cm左右接種微白黃鏈霉菌W68孢子懸液5ul，28°C培養(yǎng)3-5天，觀察病原菌生長情況。 [0075] 實施例3
[0076]微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物菌劑：
[0077] (1)液體種子的制備
[0078] 挑取在TOA平板上生長4-5天的微白黃鏈霉菌W68的氣生菌絲和孢子，接種至2 XYT 液體培養(yǎng)基中，28-30°C，180rpm振蕩培養(yǎng)1-2天后作為種子液使用。
[0079] (2)固體發(fā)酵種子的制備
[0080]將液體種子按質(zhì)量比10%接入裝有固體發(fā)酵物料的組培瓶中，28-30°C，培養(yǎng)4-6 天，得到固體發(fā)酵種子。
[0081 ] (3)微生物菌劑
[0082] 以農(nóng)業(yè)廢棄物畜禽糞便、食用菌菌渣、麩皮或豆柏等為基本原料，添加一定比例的 MnS〇4、（NH)2S〇4，料水比1:1。按照10 %的比例接種固體發(fā)酵種子。28-30 °C培養(yǎng)5-7天，發(fā)酵 培養(yǎng)結(jié)束后風干，孢子濃度可以達到IX 101()個/g，作為鏈霉菌微生物菌劑使用。
[0083] 實施例4
[0084] 微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物肥料制備：
[0085] (1)液體種子的制備
[0086] 挑取在TOA平板上生長4-5天的微白黃鏈霉菌W68的氣生菌絲和孢子，接種至2 XYT 液體培養(yǎng)基中，28-30°C，180rpm振蕩培養(yǎng)1-2天后作為種子液使用。
[0087] (2)固體發(fā)酵種子的制備
[0088]將液體種子按質(zhì)量比10%接入裝有固體發(fā)酵物料的組培瓶中，28-30°C，培養(yǎng)4-6 天，得到固體發(fā)酵種子。
[0089] (3)微生物肥料的制備
[0090] 以農(nóng)業(yè)廢棄物畜禽糞便、食用菌菌渣、麩皮或豆柏等為基本原料，添加一定比例的 MnS〇4、（NH)2S〇4，料水比1:1。按照10 %的比例接種固體發(fā)酵種子。28-30 °C培養(yǎng)5-7天，發(fā)酵 培養(yǎng)結(jié)束后風干，孢子濃度可以達到IX 101()個/g，作為鏈霉菌微生物肥料使用。
[0091] 實施例5
[0092] 分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68的微生物菌劑或微生物肥料對植物真菌病害 的防控應(yīng)用：
[0093 ] -、分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對小麥根腐病的防控
[0094] (1)試驗地點及環(huán)境條件：中國科學院微生物研究所室外自然環(huán)境分別進行三次 盆栽試驗。
[0095] (2)試驗藥劑:空白對照、微白黃鏈霉菌W68孢子懸液、70 %甲托粉劑
[0096] (3)試驗方法：
[0097] 種子處理:取小麥種子若干，10%84消毒液處理5min后，無菌水沖洗2次，然后無菌 水浸種4h;
[0098] 用微白黃鏈霉菌W68進行種子包被:取浸泡好的種子于培養(yǎng)皿中，分別使用lml羧 甲基纖維素鈉溶液和lml收集好的W68孢子懸液進行種子包被，混勻后28°C放置過夜；
[0099] 用甲托進行種子悶種：按照甲托的使用方法，對表面消毒過的小麥種子進行悶種 6h處理。
[0100] (4)處理排列:每個花盆種植10粒種子，每個處理做四個平行，隨機排列，室外自然 環(huán)境條件培養(yǎng)2-3周，觀察生長情況。該實驗重復三次。
[0101 ] (5)統(tǒng)計數(shù)據(jù):對植株的高度、地上部植株的濕重和干重、植物莖桿的直徑進行記 錄，統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)。
[0102] (6)結(jié)果分析:在對小麥根腐病防治的盆栽試驗中，采用種子包被的方法，使用微 白黃鏈霉菌W68菌制劑提高了小麥種子在含有小麥根腐病菌的土壤中的出苗率，株高、植株 干重均高于發(fā)病組對照，且基本可以達到小麥種子在無病原菌土壤中的生長水平（圖3)。
[0103] 二、分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對甜瓜枯萎病的大田試驗。
[0104] (1)試驗地點及環(huán)境條件:該實驗設(shè)在山西省忻州市東樓鄉(xiāng)。試驗田肥力中等，前 茬作物為甜瓜。甜瓜播種，栽培、管理件均勻一致，符合當?shù)氐霓r(nóng)業(yè)實踐。
[0105] (2)示范藥劑:空白對照、微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物菌劑或微生物肥料、其 它公司同類產(chǎn)品。
[0106] (3)小區(qū)面積與處理排列:每個處理70m2，用地膜覆蓋，每個處理種植2行甜瓜。
[0107] (4)施藥方法:采用浸種處理法，甜瓜播種前用菌肥浸泡1小時，播種后將泡過種子 的菌液罐于種穴中。
[0108] (5)數(shù)據(jù)統(tǒng)計:進行拍照，清點死苗，統(tǒng)計試驗結(jié)果。
[0109] (6)結(jié)果分析:通過對甜瓜種子的浸種處理，使用微白黃鏈霉菌W68為材料的微生 物菌劑或微生物肥料可顯著克服由鐮刀菌枯萎病所引起的甜瓜連作障礙:在上年種過甜瓜 的田間連續(xù)種植甜瓜，處理組的甜瓜苗成活率可以達到93%，空白對照組的甜瓜苗成活率 僅為13%(圖4)。
[0110] 三、分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對辣椒疫霉病的大田試驗。
[0111] (1)試驗地點及環(huán)境條件:該實驗設(shè)在山西省忻州市高城村。前茬作物為辣椒，品 種為北京紅。辣椒育苗。
[0112] (2)示范藥劑:空白對照、微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物菌劑或微生物肥料、其 他公司同類產(chǎn)品。
[0113] (3)小區(qū)面積與處理排列:每個處理70m2，用地膜覆蓋，每個處理種植2行辣椒。
[0114] (4)施藥方法:辣椒苗移栽時用菌肥蘸根處理2-3小時，移栽后將菌液灌于種穴中。
[0115] (5)數(shù)據(jù)統(tǒng)計:進行拍照，進行產(chǎn)量統(tǒng)計。
[0116] (6)結(jié)果分析:辣椒幼苗移栽時采用微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物菌劑或微生 物肥料對幼苗進行蘸根處理，可顯著減輕辣椒疫霉病的發(fā)病程度。與對照組相比，蘸根處理 過的植株生長周期延長約1-2周，且干辣椒產(chǎn)量增加5% (圖5)。
[0117] 四、分離自深海污泥的微白黃鏈霉菌W68對小麥全蝕病的大田試驗。
[0118] (1)試驗地點及環(huán)境條件:該試驗設(shè)在河北省景縣洚河流鎮(zhèn)東李莊村。前茬作物為 玉米，小麥常年單產(chǎn)每畝平均950斤左右。小麥播種，30斤/畝。每畝底施田豐牌小麥專用肥 100斤，灌溉情況播種時為搶墑播種，播后澆凍水1次，澆返青水，畝施尿素60斤。用10 %苯磺 隆+56%甲四氯鈉防治雜草，用25g/L高效氯氟氰菊酯防治小麥吸漿蟲、蚜蟲。
[0119] (2)示范藥劑:空白對照、微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物菌劑或微生物肥料、另 設(shè)化學藥劑對照50 %三唑酮WP和12.5 %全蝕凈FS。
[0120] (3)小區(qū)面積與處理排列:每公斤小麥種子使用50g菌肥。
[0121] (4)數(shù)據(jù)統(tǒng)計：調(diào)查出苗率，小麥拔節(jié)期和抽穗期各進行一次根系調(diào)查，采取對角 線5點取樣法，每點取20株，調(diào)查根系受侵染情況，按小麥全蝕病分級標準記錄、統(tǒng)計病株率 和病情指數(shù)。調(diào)查白穗，每點取1米雙行，調(diào)查總穗數(shù)與白穗數(shù)，統(tǒng)計白穗率。進行測產(chǎn)調(diào)查， 每個處理隨機5點取樣，調(diào)查1米雙行總穗數(shù)，統(tǒng)計畝穗數(shù)，每點取有效穗數(shù)20穗，干后脫粒， 統(tǒng)計穗粒數(shù)和千粒重，計算產(chǎn)量和增產(chǎn)效果。
[0122] (5)結(jié)果分析:深海微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物菌劑或微生物肥料的使用可 以明顯減少小麥抽穗期的病株率，降低病情指數(shù)。與化學藥劑相比，微白黃鏈霉菌W68為材 料的微生物菌劑或微生物肥料的防效明顯優(yōu)于化學藥劑三唑酮，與全蝕凈的防效相當?？?見以微白黃鏈霉菌W68為材料的微生物菌劑或微生物肥料可以完全替代化學藥劑的使用 (圖 6)。
【主權(quán)項】
1. 一株微白黃鏈霉菌（Streptomyces albidoflavus)菌株W68，其保藏號為CGMCC Νο·12210〇2. -種微生物菌劑，其特征在于:其活性成分為微白黃鏈霉菌菌株W68。3. -種權(quán)利要求2所述的微生物菌劑的應(yīng)用，其特征在于:所述微生物菌劑用于防治土 傳真菌病害。4. 權(quán)利要求3所述的微生物菌劑的應(yīng)用，所述的土傳真菌病可以是有下面一種真菌或 多種真菌引起的：輪枝樣鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、平臍蠕孢菌、立枯絲核菌、大麗輪枝孢菌、灰 色大角間座殼菌。5. 權(quán)利要求3所述的微生物菌劑，其特征在于:每克干重含分離自深海污泥的微白黃鏈 霉菌W68含I X 101()個孢子。6. 權(quán)利要求2所述的微生物菌劑，包括微生物肥料。7. 權(quán)利要求3所述的微生物菌劑的應(yīng)用，其包括防治小麥根腐病、甜瓜枯萎病、辣椒疫 霉病和小麥全蝕病。8. -種微生物肥料的制備方法： (1) 液體種子的制備 挑取在PDA平板上生長4-5天的微白黃鏈霉菌W68的氣生菌絲和孢子，接種至2 X YT液體 培養(yǎng)基中，28-30°C，180rpm振蕩培養(yǎng)1-2天后作為種子液使用。 (2) 固體發(fā)酵種子的制備 將液體種子按質(zhì)量比10%接入裝有固體發(fā)酵物料的組培瓶中，28-30°C，培養(yǎng)4-6天，得 到固體發(fā)酵種子。 (3) 微生物肥料的制備 以農(nóng)業(yè)廢棄物畜禽糞便、食用菌菌渣、麩皮或豆柏等為基本原料，添加一定比例的 MnS〇4、（NH)2S〇4，料水比1:1。按照10 %的比例接種固體發(fā)酵種子。28-30 °C培養(yǎng)5-7天，發(fā)酵 培養(yǎng)結(jié)束后風干，孢子濃度可以達到IXlO1t3個/g，作為鏈霉菌微生物肥料使用。
【文檔編號】C12N1/20GK105886428SQ201610207349
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月5日
【發(fā)明人】李少杰, 張振穎, 孫憲昀
【申請人】中國科學院微生物研究所