專利名稱：一種精子核蛋白裂解液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)臨床上使用的試劑，是一種精子核蛋白裂解液。
背景技術(shù)：
目前，世界許多國(guó)家都在研究精子成熟過(guò)程中因受內(nèi)外環(huán)境影響形成
DNA碎片出現(xiàn)的DNA完整性異常，從而引起的精子形態(tài)和功能異常。由于在 男性不育檢測(cè)中DNA的完整性是精液的常規(guī)檢測(cè)，也是評(píng)估男性不育的主要 指標(biāo)，因此，如何檢測(cè)精子DNA完整性是生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重要課題之一。 國(guó)外比較領(lǐng)先的檢測(cè)方法為精子染色質(zhì)擴(kuò)散試驗(yàn)，其英文名為sperm chromatin dispersion，簡(jiǎn)稱SCD，其商品化的試驗(yàn)盒已推廣使用。SCD檢測(cè)方 法具有較多優(yōu)點(diǎn)，例如簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、分辨率高等，但是，由于試劑盒 包含知識(shí)產(chǎn)權(quán)，因此該試劑盒價(jià)格昂貴，受此限制，目前在我國(guó)尚未推廣應(yīng)用， 并且，這種試劑盒中的精子核蛋白裂解液采用聚乙二醇辛基苯基醚，十二院基 碘酸鈉等成份，這些成份均為化學(xué)試劑，其異味、剌激性及腐蝕性較大，并具 有毒性成份，污染環(huán)境等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，提供一種精子核蛋白裂解液，使它具有造價(jià)低、無(wú)腐蝕， 無(wú)毒，易于推廣應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種精子核蛋白裂解液， 每100毫升蒸餾水中含三羥甲基氨基甲烷4.844克、氯化鈉11.7克、二硫蘇糖醇1.86克、皂角或桔梗提取物8—15克及乙二胺四乙酸二鈉鹽12.32克，PH 值為中性。皂角或桔梗提取物為10克。
本發(fā)明裂解液的試驗(yàn)成功，為我國(guó)應(yīng)用SCD方法檢測(cè)精子DNA完整性提 供了重要的環(huán)節(jié)。本發(fā)明所述的裂解液中采用皂角或桔梗提取物替代了化學(xué)試 劑，從而減少了化學(xué)試劑的應(yīng)用，減少污染、無(wú)刺激性、無(wú)腐蝕、無(wú)毒，并使 裂解液制造成本大幅降低，易于推廣應(yīng)用。本發(fā)明裂解液為精子染色質(zhì)擴(kuò)散實(shí) 驗(yàn)試劑盒的裂解液，試驗(yàn)結(jié)果表明采用本發(fā)明所述的裂解液用SCD方法檢 測(cè)精子DNA完整性的效果與國(guó)外同類試劑盒的檢測(cè)效果完整性一致。SCD試 驗(yàn)后經(jīng)染色能夠在光學(xué)顯微鏡下清晰的觀察保留尾巴的單個(gè)精子DNA的完整 性，根據(jù)暈環(huán)的大小，能夠準(zhǔn)確判定精子DNA是否有碎片，從而對(duì)男性生育 力進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估。
本發(fā)明所述裂解液可由附圖l、 2、 3、 4、 5、 6、 7中清楚得出正常精子 沒(méi)有DNA碎片，具有大大的暈環(huán)或中等暈環(huán)，如附圖l、 2所示，存在DNA 碎片的精子沒(méi)有暈環(huán)形成或有很小的暈環(huán)，或沒(méi)有暈環(huán)且著色很淡，呈退化跡 象。如附圖3、 4、 5所示，上述試驗(yàn)進(jìn)一步表明，本發(fā)明裂解液能夠準(zhǔn)確判定 精子DNA是否具有完整性。上述試驗(yàn)結(jié)果還可具體描述為計(jì)數(shù)500個(gè)精子， 觀察精子暈環(huán)大小，根據(jù)暈環(huán)與精子頭部橫徑的比例，粗分為大、中、小和無(wú) 暈環(huán)4個(gè)等級(jí)，大和中暈環(huán)表示精子DNA完整無(wú)碎片，小和無(wú)暈環(huán)表示精子 DNA斷裂為碎片。小暈環(huán)以《精子頭直徑四分之一為判斷標(biāo)準(zhǔn)，中暈環(huán)>精子 頭直徑四分之一而《精子頭直徑三分之二，大環(huán)暈>精子頭直徑三分之二。
本發(fā)明裂解液所含的皂角提取物不使蛋白變性，絲毫不破壞精子尾部。本 發(fā)明所述的裂解液實(shí)現(xiàn)了精子DNA檢測(cè)簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、廉價(jià)、分辨率高的目的。
本發(fā)明裂解液以試劑盒商品推廣應(yīng)用，試劑盒包括
1、 DNA變性染液；
2、 精子核蛋白裂解液； DNA變性染液為公知技術(shù)。


附圖1是呈現(xiàn)大暈環(huán)的正常精子；附圖2是呈現(xiàn)中暈環(huán)的正常精子；附圖 3是呈現(xiàn)極小暈環(huán)的有DNA碎片的異常精子；附圖4是沒(méi)有暈環(huán)的有DNA碎 片的異常精子；附圖5是沒(méi)有暈環(huán)且退化的精子；附圖3、 4、 5所示均為有 DNA碎片的異常精子；附圖6是有三個(gè)正常精子和一個(gè)異常精子的圖片；附 圖7是有兩個(gè)正常精子和三個(gè)異常精子的圖片。
上述圖片均為采用本發(fā)明裂解液進(jìn)行檢驗(yàn)的結(jié)果。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所述的精子核蛋白裂解液，每100毫升蒸餾水中含三羥甲基氨基甲 垸4.844克、氯化鈉11.7克、二硫蘇糖醇1.86克、皂角或桔梗提取物8—15 克及乙二胺四乙酸二鈉鹽12.32克，PH值為中性。其中三羥甲基氨基甲烷分 子式為(HOCH2) 3CNH2，PH值為7.5，所述皂角或桔梗提取物選用的最 佳值為10克。
權(quán)利要求
1、一種精子核蛋白裂解液，其特征在于每100毫升蒸餾水中含三羥甲基氨基甲烷4.844克、氯化鈉11.7克、二硫蘇糖醇1.86克、皂角或桔梗提取物8-15克及乙二胺四乙酸二鈉鹽12.32克，PH值為中性。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種精子核蛋白裂解液，其特征在于皂角或 桔梗提取物為10克。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種精子核蛋白裂解液，每100毫升蒸餾水中含三羥甲基氨基甲烷4.844克、氯化鈉11.7克、二硫蘇糖醇1.86克、皂角或桔梗提取物8-15克及乙二胺四乙酸二鈉鹽12.32克，pH值為中性。本發(fā)明裂解液所含的皂角提取物不使蛋白變性，絲毫不破壞精子尾部。本發(fā)明所述的裂解液實(shí)現(xiàn)了精子DNA檢測(cè)簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、廉價(jià)、分辨率高的目的。
文檔編號(hào)G01N1/30GK101319973SQ20081001650
公開日2008年12月10日 申請(qǐng)日期2008年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月28日
發(fā)明者張麗紅, 王磊光, 毅 邱 申請(qǐng)人:山東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所