專利名稱：磺胺-喹諾酮二聯(lián)檢測卡的制作方法
技術領域：
本實用新型屬于免疫化學快速檢測技術領域，具體涉及一種能夠同時檢測磺胺類和喹諾酮類藥物的快速檢測卡。
背景技術：
磺胺類藥,英文名稱為Sulfonamides,是通過人工合成的氨苯磺胺衍生物,主要用于預防和治療細菌感染性疾病。代表藥物有磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基異惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺喹惡啉等?；前奉愃幬镆话銥榘咨虻S色結晶性粉末，遇光易變質，顏色逐漸變深，大多數(shù)本類藥物不易在水中溶解，但易溶于稀堿。形成鈉鹽后易溶于水，其水溶液呈強堿性?；前奉愃幬锬芤种聘锾m氏陽性菌及一些陰性菌，可以治療多種細菌感染，在獸醫(yī)臨床上廣泛應用于治療由敏感細菌感染的各種畜禽疾病。主要是通過干擾細菌的葉酸代謝而抑制細菌的生長繁殖。有些細菌生長時需要的一種“生長物質” 一對氨苯甲酸(PABA)，而磺胺類藥的化學結構與氨基苯甲酸很象，它可以與氨苯甲酸競爭二氫葉酸合成酶，妨礙二氫葉酸的形成從而最終影響細菌核蛋白的合成，從而抑制細菌的生長繁殖。由于磺胺類藥物在體內的作用和代謝時間較長，通過任何途徑攝入的磺胺都有可能在人體內蓄積。蓄積濃度超過一定值時，就會對人體造成損害。短時間大劑量或長時間小劑量的刺激可分別引起急性或慢性中毒，影響機體的泌尿、免疫系統(tǒng)，破壞肌肉、腎臟和甲狀腺等組織，如誘發(fā)人的甲狀腺癌等。另外，人體內長期存在磺胺會導致許多細菌對磺胺類藥物產生抗藥性。因此，國際食品法典委員會(CAC)和許多國家規(guī)定，動物性食品中磺胺類總量的最大殘留限量(MRL)為0. lmg/kg。喹諾酮類(Quinolones, QNs),是一類人工合成的含4_喹諾酮基本結構，對細菌DNA螺旋酶具有選擇性抑制的抗生素。1962年最早的喹諾酮類藥物萘啶酸首先用于臨床，由于其抗菌譜窄、口服吸收差、副作用高等原因現(xiàn)在已很少使用。當前應用的喹諾酮大多為含有氟原子的氟喹諾酮類。這類 藥物抗菌譜廣，對革蘭氏染色呈陰性桿菌活性較高，對其他抗生素耐藥的德細菌也具有良好的抗菌作用，無交叉耐藥性；在體內分布廣，體內和組織中藥物濃度高；口服吸收好，半衰期長，使用方便；與頭孢菌素類藥物相比，抗菌作用相似，但價格便宜。目前在獸醫(yī)臨床上常用的藥物主要有諾氟沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、氟甲喹等十幾種，隨著應用的增加，其各種毒副作用也逐漸顯現(xiàn)出來，主要體現(xiàn)在頭暈、低血糖、惡心、胃腸道癥狀、中樞神經系統(tǒng)和過敏反應。特別是近幾年，嚴重的不良反應發(fā)生率約為1. 6% 1.8%，引起了全世界的關注。為了保障動物源性食品的安全，歐盟、美國及我國等很多國家都對喹諾酮類藥物在動物源性食品中殘留制定了最大殘留限量(MRL)。我國農業(yè)部文件(農質發(fā)20093號文件)中規(guī)定了 2009年我國畜禽產品監(jiān)測項目，禽肉中4種喹諾酮類藥物殘留是重要的監(jiān)測項目之一?，F(xiàn)有的磺胺和喹諾酮類檢測方法多為色譜法，但是這些方法的靈敏度受樣品的凈化、濃縮等步驟的影響較大，再者這些方法需要復雜的儀器，過程繁瑣，不適應現(xiàn)場大量樣本的篩查，且目前現(xiàn)有的快速檢測產品存在一定的局限性，無法同時檢測磺胺和喹諾酮類物質的殘留。本檢測方法簡便、靈敏，可同時檢測磺胺和喹諾酮類藥物殘留，不需要昂貴的儀器設備和專業(yè)的分析人員，特別適合企業(yè)進行現(xiàn)場監(jiān)測，易于推廣。

實用新型內容本實用新型的目的是提供一種靈敏度高、操作簡單，檢測時間短，能夠同時檢測磺胺和喹諾酮的試紙卡。本實用新型的特征在于包括盒體和盒體內的試紙條，試紙條包括底板、反應膜、樣品墊、結合物釋放墊和吸水墊。盒體上有相應的樣品槽9和觀察窗10。與常規(guī)試紙條不同的是，所述樣品墊和所述結合物釋放墊有重疊區(qū)，所述結合物釋放墊和所述反應膜有重疊區(qū)，所述吸水墊和所述反應膜有重疊區(qū)。優(yōu)選的重疊區(qū)保證了樣品液流動的連續(xù)性，延長了反應時間，使反應能夠充分發(fā)生，有效地降低了實驗誤差。沿樣品液流動方向，底板I分為三個區(qū)域加樣區(qū)、反應膜設置區(qū)和吸水墊設置區(qū)。反應膜2設于反應膜設置區(qū)上；結合物釋放墊4、樣品墊3設置于加樣區(qū)上，結合釋放墊靠近反應膜處設置；所述結合物釋放墊上包被有抗磺胺和抗喹諾酮偶聯(lián)物金標抗體的混合物。所述吸水墊設置區(qū)上設有吸水墊5 ;所述反應膜上設有T線6和C線7，T線依次包被有磺胺蛋白偶聯(lián)物、喹諾酮蛋白偶聯(lián)物，C線包被有兔抗鼠的質控線。所述兩條T線與一條C線相互平行且與樣品流動方向垂直。在反應膜上檢測線印跡和質控線印跡的組合排列可為紫紅色的條帶。所述T線靠近結合物釋放墊，所述C線靠近吸水墊。試紙條還包括固定膜8，可覆蓋于所述樣品墊、所述結合物釋放墊和所述吸水墊上，固定膜與所述樣品墊對應的區(qū)域設有樣品槽9。所述固定膜為防水材質，可用于固定檢測卡的各個組件，避免樣品或試劑與外界環(huán)境中的物質發(fā)生反應，影響檢測結果。所述樣品墊的長度可為18mm，所述結合物釋放墊的長度可為6mm，所述反應膜的長度可為20mm，所述吸水墊的長度可為20mm。所述T線距離所述結合物釋放墊的垂直距離可為6mm ;所述C線距離所述吸水墊的垂直距離可為6mm ;所述T線和所述C線的垂直距離可為5mm，所述T線間的垂直距離可為3. 5mm。所述反應膜、所述樣品墊、所述結合物釋放墊和所述吸水墊可通過雙面膠固定于盒體的底板上，它們與底板之間可設有高分子材料制成的背襯膜，用以阻止粘合劑中的有機溶劑對包被的蛋白和抗體的破壞。所述試紙卡具體為長70mm,寬20mm的條狀。所述磺胺抗體可為磺胺單克隆抗體或多克隆抗體。所述喹諾酮抗體可為喹諾酮單克隆抗體和多克隆抗體。所述與磺胺和喹諾酮的偶聯(lián)物可為牛血清白蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白等。所述盒體可為硬質塑料，具體可為PVC材質。所述樣品吸收墊可由玻璃纖維棉或玻璃棉制成。所述結合物釋放墊可由玻璃纖維棉或玻璃棉制成。所述吸水墊可為厚濾紙或無紡布制成。所述反應膜為硝酸纖維素膜(NC膜)。本檢測卡的檢測原理為硝酸纖維素膜(NC)含有預先固定于測試區(qū)(T)的包被抗原、控制區(qū)(C)的二抗和固定于結合釋放墊上的金標抗體。樣品中的被檢物在毛細滲移的過程中與膠體金標記的特異性抗體結合，抑制了抗體和T區(qū)包被抗原的結合，使T區(qū)不顯色，結果為陽性；反之，T區(qū)出現(xiàn)一條肉眼可見的紅色條帶，結果為陰性。本實用新型磺胺-喹諾酮二聯(lián)檢測卡具有以下特點1、試紙卡具有很高的特異性。在實際檢測中，可以同時檢測磺胺和喹諾酮。并且能夠顯示出每一種化合物的檢測結果。檢測限見表I。表I檢測限
權利要求1.一種磺胺-喹諾酮二聯(lián)檢測卡，它包括盒體和盒體內的試紙條，所述的檢測卡盒體，其特征在于盒體上有相應的樣品槽和觀察窗，具體材料可為硬質塑料；所述的試紙條，其特征在于包括底板、反應膜、樣品吸收墊、結合物釋放墊和吸水墊；樣品吸收墊可由玻璃纖維棉或玻璃棉制成；所述結合物釋放墊可由玻璃纖維棉或玻璃棉制成；所述吸水墊可為厚濾紙或無紡布；所述反應膜為硝酸纖維素膜； 沿樣品液流動方向，底板(I)分為三個區(qū)域加樣區(qū)、反應膜設置區(qū)和吸水墊設置區(qū)；反應膜(2)設于反應膜設置區(qū)上；樣品吸收墊(3)、結合物釋放墊(4)設置于加樣區(qū)上，結合物釋放墊靠近反應膜處設置；所述吸水墊設置區(qū)上設有吸水墊(5);所述反應膜上設有檢測線T線(6)和質控線C線(7)，T線依次包被有磺胺、喹諾酮，C線包被有兔抗鼠的質控線。
2.根據(jù)權利要求1所述的磺胺-喹諾酮二聯(lián)檢測卡，其特征在于所述兩條檢測線T線與一條質控線C線相互平行且與樣品流動方向垂直，檢測線印跡和質控線印跡的組合排列可為紫紅色的條帶。
3.根據(jù)權利要求1所述的磺胺-喹諾酮二聯(lián)檢測卡，其特征在于所述檢測卡還包括固定膜(8)，覆蓋于所述樣品吸收墊、所述結合物釋放墊和所述吸水墊上，固定膜與所述樣品吸收墊對應的區(qū)域設有樣品槽(9 )。
4.根據(jù)權利要求1所述的磺胺-喹諾酮二聯(lián)檢測卡，其特征在于所述檢測卡包括的樣品墊的長度可為18_，所述結合物釋放墊的長度可為6_，所述反應膜的長度可為20_，所述吸水墊的長度可為20 mm ;所述T線距離所述結合物釋放墊的垂直距離可為6mm ;所述C線距離所述吸水墊的垂直距離可為6mm ;所述T線和所述C線的垂直距離可為5mm，所述T線間的垂直距離可為3. 5mm。
5.根據(jù)權利要求1所述的磺胺-喹諾酮二聯(lián)檢測卡，其特征在于所述反應膜、所述樣品吸收墊、所述結合物釋放墊和所述吸水墊可通過雙面膠固定于盒體的底板上，在他們與底板之間可設有高分子材料制成的背襯膜。
專利摘要本實用新型公開了一種磺胺-喹諾酮二聯(lián)檢測卡。本實用新型包括盒體和盒體內的試紙條。試紙條包括底板、反應膜、樣品吸收墊、結合物釋放墊和吸水墊；盒體上有相應的樣品槽和觀察窗。沿樣品液流動方向，底板(1)分為三個區(qū)域加樣區(qū)、反應膜設置區(qū)和吸水墊設置區(qū)；結合物釋放墊(4)、樣品吸收墊(3)設置于加樣區(qū)上；結合物釋放墊上包被有抗磺胺偶聯(lián)物和抗喹諾酮偶聯(lián)物金標抗體的混合物；反應膜上設有T線(6)和C線(7)，T線依次包被有磺胺蛋白偶聯(lián)物、喹諾酮蛋白偶聯(lián)物，C線包被有兔抗鼠的質控線。本實用新型操作簡單，檢測時間短，易于推廣，應用價值高。
文檔編號G01N33/577GK202903796SQ20122039996
公開日2013年4月24日 申請日期2012年8月14日 優(yōu)先權日2012年8月14日
發(fā)明者何丹婷, 李向梅, 趙寧, 邢澤柳, 蘇麗芳 申請人:北京維德維康生物技術有限公司