專利名稱：同時(shí)檢測(cè)己烯雌酚和雌二醇的絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
同時(shí)檢測(cè)己烯雌酚和雌二醇的絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器技術(shù)領(lǐng)域[0001]本實(shí)用新型涉及同時(shí)檢測(cè)己烯雌酚和雌二醇的絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器。具體 是將金納米粒子功能化的石墨烯用于制作印刷電極，實(shí)現(xiàn)一次性同時(shí)檢測(cè)己烯雌酚和雌二 醇。屬于新型功能材料、生物傳感和環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
[0002]己烯雌酚、雌二醇均屬于環(huán)境雌激素。所謂環(huán)境雌激素，是指環(huán)境中存在的一些能 夠像激素一樣影響生物體內(nèi)分泌功能的化學(xué)物質(zhì)，即“外因型內(nèi)分泌擾亂化學(xué)物質(zhì)”。它們 并不直接作為有毒物質(zhì)給生物體帶來異常的影響，而是具有類似激素的作用，即便數(shù)量極 少，也會(huì)使生物體的內(nèi)分泌失衡，而出現(xiàn)異常。人類可通過消化道、呼吸道、皮膚等途徑接觸 環(huán)境雌激素。當(dāng)體內(nèi)蓄積的環(huán)境雌激素在應(yīng)激(包括某些疾病)、妊娠及營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)，就從脂 肪組織中釋放出來進(jìn)入血液，并可能引起相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)。環(huán)境雌激素的生物學(xué)效應(yīng)包 括對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響、對(duì)生殖與發(fā)育的影響、致癌作用、神經(jīng)系統(tǒng)毒效應(yīng)和對(duì)免疫系統(tǒng)的 影響等。[0003]現(xiàn)有己烯雌酚、雌二醇的分析監(jiān)測(cè)方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)、液相色 譜-質(zhì)譜(LS-MS)等，這些方法為環(huán)境污染物的分析提供了準(zhǔn)確、可靠的分析檢測(cè)手段。然 而色譜分析方法，不但儀器昂貴，而且須進(jìn)行繁雜的前處理，如加標(biāo)、萃取、凈化、濃縮等，一 般分析一組試樣要花費(fèi)較長(zhǎng)的時(shí)間，且分析的費(fèi)用也較高，不便于推廣應(yīng)用。[0004]因此發(fā)展快速、簡(jiǎn)便、靈敏的己烯雌酚、雌二醇檢測(cè)手段顯得十分必要。[0005]本實(shí)用新型使用印刷電極構(gòu)建的免疫傳感器測(cè)定己烯雌酚和雌二醇，與其它檢測(cè) 方法相比，具有靈敏度高，特異性好，成本低廉、快速方便等優(yōu)勢(shì)，可實(shí)現(xiàn)己烯雌酚和雌二醇 的同時(shí)檢測(cè)。實(shí)用新型內(nèi)容[0006]本實(shí)用新型的技術(shù)方案是[0007]該傳感器的印刷電極是，在聚對(duì)苯二甲酸二乙酯(PET)基底上依次印刷導(dǎo)電銀 漿，制成電極條和電極觸點(diǎn)；印刷導(dǎo)電碳漿，制成輔助電極；印刷摻雜納米材料的導(dǎo)電碳油 墨，制成工作電極；印刷銀/氯化銀混合油墨，制成參比電極；印刷絕緣油墨覆蓋中間導(dǎo)電 部分，制成敏感池和絕緣層；在工作電極區(qū)域，制成一個(gè)電解池凹槽；在每個(gè)工作電極表 面，分別滴涂己烯雌酚抗體與雌二醇抗體中的一種抗體，引出線端與電化學(xué)工作站連接。[0008]所述納米材料為金納米粒子功能化的石墨烯，其作用是用來提高抗體固載量，增 強(qiáng)電子傳遞能力。[0009]所述電解池凹槽為一矩形凹槽，放置含有鐵氰化鉀的PBS緩沖溶液。[0010]所述絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器用于己烯雌酚和雌二醇同時(shí)檢測(cè)。[0011]本實(shí)用新型具備以下優(yōu)勢(shì)[0012](I)本實(shí)用新型采用金納米粒子功能化的石墨烯作為印刷電極制作材料，可增大工作電極的表面積，提高抗體固載量，增強(qiáng)電子傳遞的作用，提高了傳感器的靈敏度。[0013](2)本實(shí)用新型采用金納米粒子功能化的石墨烯具有良好的生物相容性，增強(qiáng)了傳感器的穩(wěn)定性，使檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性好。[0014](3)本實(shí)用新型傳感器利用抗原抗體的特異反應(yīng)，使傳感器特異性好。[0015](4)本實(shí)用新型傳感器檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、快速，易于推廣。[0016](5)本實(shí)用新型傳感器與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有制備簡(jiǎn)單、加工方便、成本低、易于商品化。[0017](6)本實(shí)用新型制備的雙通道傳感器，可實(shí)現(xiàn)對(duì)己烯雌酚和雌二醇的快速同時(shí)測(cè)定，提聞了檢測(cè)效率。


[0018]圖1為印刷電極六層網(wǎng)版的設(shè)計(jì)圖紙。[0019]圖2為印刷電極構(gòu)造圖。[0020]圖2標(biāo)號(hào)說明1、電極引條，2、電極觸點(diǎn)，3、對(duì)電極，4、工作電極，5、參比電極，6、 敏感池，7、絕緣層，8、矩形電解池凹槽。
具體實(shí)施方式
[0021]
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例進(jìn)一步說明本實(shí)用新型。[0022]實(shí)施例1絲網(wǎng)印刷電極的制備[0023]本實(shí)用新型結(jié)合圖1，進(jìn)行印刷電極的制備，整個(gè)印刷電極在厚度為O. 5mm、長(zhǎng)度為40mm、寬度為20mm的PET板。[0024]制備步驟如下[0025](I)在PET基底上印刷導(dǎo)電銀漿(ED-479SS，美國(guó)埃奇森公司)制成的電極條I和電極觸點(diǎn)2，100°C熱固化12h?！0026](2)印刷導(dǎo)電碳漿(ED-423SS，美國(guó)埃奇森公司)制成對(duì)電極3，100°C熱固化12h。[0027](3)印刷金納米粒子功能化石墨烯形成工作電極4,100°C熱固化12h。[0028](4)印刷銀/氯化銀混合參比油墨(美國(guó)埃奇森公司)制成參比電極5，100°C熱固化 12h。[0029](5)印刷絕緣油墨(ED-452SS，美國(guó)埃奇森公司)制成敏感池6，紫外光固化30s。[0030](6)印刷絕緣油墨(ED-452SS，美國(guó)埃奇森公司)覆蓋中間導(dǎo)電部分，制成絕緣層7 和電解池凹槽8，紫外光固化30s，雙通道絲網(wǎng)印刷電極制備完成。[0031]熱固化溫度和時(shí)間由商業(yè)油墨提供的油墨固化信息要求決定。[0032]實(shí)施例2本實(shí)用新型傳感器的制備及檢測(cè)[0033](I)取一片實(shí)施例1制備的雙通道絲網(wǎng)印刷電極，用超純水沖洗，去掉電極表面的其他物質(zhì)；在每個(gè)工作電極表面分別滴涂6PL IOPg^r1的己烯雌酚抗體與雌二醇抗體中的一種抗體，4°C條件下晾干。[0034](2)分別取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的BSA溶液，滴涂在電極表面，封閉電極上非特異性的活性位點(diǎn)，保持電極濕潤(rùn)4h，在4°C條件下晾干，然后用超純水清洗電極，晾干，絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器制備完成，直于4 C冰箱中備用。[0035](3)將被檢測(cè)樣品進(jìn)行預(yù)處理，分別取6PL滴涂于工作電極上，保持電極濕潤(rùn)2h。[0036](4)在矩形電解池凹槽8內(nèi)，加入ΙΟΟ μ pH為7. 4的含有SmmoH1鐵氰化鉀的 PBS緩沖溶液，利用方波伏安法，對(duì)樣品中己烯雌酚和雌二醇進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。
權(quán)利要求1.同時(shí)測(cè)定己烯雌酚和雌二醇的絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器，其特征在于，在聚對(duì)苯二甲酸二乙酯(PET)基底上依次印刷導(dǎo)電銀漿，制成電極條(I)和電極觸點(diǎn)(2);印刷導(dǎo)電碳衆(zhòng)，制成輔助電極(3);印刷摻雜納米材料的導(dǎo)電碳油墨,制成工作電極(4);印刷銀/氯化銀混合油墨，制成參比電極(5)印刷絕緣油墨覆蓋中間導(dǎo)電部分，制成敏感池(6)和絕緣層(7);在工作電極區(qū)域，制成一個(gè)電解池凹槽(8);在每個(gè)工作電極表面，分別滴涂己烯雌酚抗體與雌二醇抗體中的一種抗體，引出線端與電化學(xué)工作站連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定己烯雌酚和雌二醇的絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器，其特征在于，所述納米材料為金納米粒子功能化的石墨烯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定己烯雌酚和雌二醇的絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器，其特征在于，所述電解池凹槽為一矩形凹槽，放置含有鐵氰化鉀的PBS緩沖溶液。
專利摘要本實(shí)用新型涉及同時(shí)測(cè)定己烯雌酚和雌二醇的絲網(wǎng)印刷電極免疫傳感器。其特征在于，采用印刷板印制工作電極、對(duì)電極、參比電極，通過引出線與測(cè)試儀器連接同時(shí)檢測(cè)己烯雌酚和雌二醇。工作電極、對(duì)電極、參比電極分別采用金納米粒子功能化的石墨烯、碳、Ag/AgCl摻雜的油墨印刷而成，引出線為導(dǎo)電銀漿，引出線部分被絕緣層遮覆，本實(shí)用新型傳感器制作成本低、產(chǎn)品能一次性可拋使用、檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定、檢測(cè)操作方便，適用于環(huán)境雌激素己烯雌酚和雌二醇的一次性、快速、同時(shí)測(cè)定。
文檔編號(hào)G01N33/543GK202854091SQ20122041000
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月19日
發(fā)明者魏琴, 李玉陽(yáng), 張勇, 吳丹, 杜斌, 李賀, 劉偉華, 王自福, 王明泉, 王曉東, 馬洪敏, 李燕 申請(qǐng)人:濟(jì)南大學(xué)