門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性分析方法
【專利摘要】本發(fā)明為門冬氨酸鉀原料、門冬氨酸鎂原料及其相關(guān)制劑如口服制劑、注射劑等的安全性分析方法，可更簡便地控制藥品質(zhì)量，尤其針對如門冬氨酸鉀注射液、門冬氨酸鉀鎂注射液、注射用門冬氨酸鉀鎂等較口服制劑風(fēng)險較高的注射劑，可更好控制藥品非預(yù)期的嚴重不良反應(yīng)風(fēng)險。
【專利說明】口冬氨酸鐘、n冬氨酸鑲及其相關(guān)制劑的安全性分析方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 口冬氨酸鐘是口冬氨酸的鐘鹽，n冬氨酸鎮(zhèn)是口冬氨酸的鎮(zhèn)鹽，為電解質(zhì)補充藥。 口冬氨酸是體內(nèi)草醜己酸的前體，在H駿酸循環(huán)中起重要作用，促進能量代謝，是高能磯酸 化合物合成分解的催化劑；參與核巧酸生成，是細胞修復(fù)和再生的重要物質(zhì)；可促進膽汁 及膽色素的排泄，有排黃、減少肝脂肪、增加肝糖原等作用；促進T淋己細胞發(fā)育分化為成 熟T淋己細胞，有抗病毒和抗腫瘤的作用。同時，n冬氨酸也參加鳥氨酸循環(huán)，使N&與CA 生成尿素達到解毒作用?？诙彼崤c細胞有很強的親和力，可作為鐘離子進入細胞的載體， 使鐘離子重返細胞內(nèi)，促進細胞除極化和細胞代謝，維持也肌收縮力，從而改善也肌收縮功 能，并降低耗氧量，因而在缺氧狀態(tài)下，對也臟具有保護作用。鎮(zhèn)是重要的陽離子，是多種酶 系的成分及激活劑，與鐘代謝關(guān)系密切。低鎮(zhèn)時腎保鐘作用降低可加重缺鐘。補鎮(zhèn)后能激 活軸-鐘-H磯酸腺巧酶（Na+-K+-ATP酶），調(diào)節(jié)鐘于巧離子的膜轉(zhuǎn)運，促進鐘內(nèi)流，阻止鐘 進一步外流，使細胞內(nèi)鐘含量增加，在機體補鐘時起到顯著的保鐘作用。
[0002] 口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)制劑國內(nèi)外有如有口冬氨酸鐘注射液、n冬氨酸鐘片、n 冬氨酸鐘鎮(zhèn)片、n冬氨酸鐘鎮(zhèn)注射液等上市，在臨床上可應(yīng)用于補鐘。
[0003] 口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)的合成多采用口冬氨酸與鐘鹽或鎮(zhèn)鹽反應(yīng)的原理，由于 口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)易溶于水，n冬氨酸與鐘鹽或鎮(zhèn)鹽反應(yīng)后產(chǎn)生的反應(yīng)液粘稠，結(jié)晶 性很差且吸濕性強，無法用傳統(tǒng)工藝制得合格原料，n冬氨酸鐘鎮(zhèn)復(fù)方制劑多采用口冬氨 酸與鐘鹽（如氨氧化鐘）和氧化鎮(zhèn)投料的生產(chǎn)工藝，該生產(chǎn)工藝在實際生產(chǎn)中易產(chǎn)生質(zhì)量 問題而產(chǎn)生安全性隱患及影響臨床應(yīng)用效果，如投料不準確，不同批次之間質(zhì)量不均一、不 穩(wěn)定，引入了較大量雜質(zhì)等，尤其對于注射劑，直接用口冬氨酸與鐘鹽（如氨氧化鐘）和氧 化鎮(zhèn)投料的生產(chǎn)工藝將無法去除原料引入的雜質(zhì)，所增加的臨床應(yīng)用不安全因素可能帶來 較嚴重的后果。
[0004] 雖然化200810101612. 4和化200810101613. 9分別提供了一種高質(zhì)量的口冬氨 酸鐘和口冬氨酸鎮(zhèn)原料的制備方法，但未提供其雜質(zhì)的具體指標(biāo)，并且，即使是高質(zhì)量的口 冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)原料，具體制劑的工藝制備過程中也可能新增加雜質(zhì)，尤其是涉及的 安全性雜質(zhì)。2012年09月19日國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的藥品不良反應(yīng)信息通報 (第50期）警惕口冬氨酸鐘鎮(zhèn)注射劑的嚴重過敏反應(yīng)化ttp://www. sfda. gov. cn/WSOl/ CL0078/74984. html)，進一步反映了 口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑中存在潛在過 敏的因素，所述的過敏反應(yīng)的藥物是在藥品經(jīng)檢驗質(zhì)量合格的基礎(chǔ)上發(fā)生的，即藥品本身 符合相關(guān)的藥品法定質(zhì)量標(biāo)準，排除了如無菌、熱原（細菌內(nèi)毒素）等的影響，而現(xiàn)有國內(nèi) 外相關(guān)的藥品標(biāo)準中未涉及有控制的雜質(zhì)，成為最為可能的潛在因素。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 藥品的安全、有效、質(zhì)量可控為藥品本身的要求，本發(fā)明所述的口冬氨酸鐘、n冬 氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑有效性已得到證明，質(zhì)量控制方面，也分別有國家批準的標(biāo)準用W控 巧||，質(zhì)量控制方法也有局限性，尤其針對安全性的影響因素，如上述的口冬氨酸鐘鎮(zhèn)注射劑 的嚴重過敏反應(yīng)，目前尚缺少可靠的方法予w檢測和控制，而動物試驗（如豚鼠的過敏試 驗）繁瑣，且周期長，存在個體差異性，不能準確定量區(qū)別產(chǎn)品的質(zhì)量情況。
[0006] 鑒于上述背景，本發(fā)明研究建立了 口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的安全 性雜質(zhì)分析方法，W對其進行更好的質(zhì)量控制，具體的除安全性雜質(zhì)分析W外的口冬氨酸 鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的質(zhì)量指標(biāo)控制方法，在目前可獲得國家食品藥品監(jiān)督管理 局批準的相關(guān)口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的質(zhì)量標(biāo)準中有所體現(xiàn)。
[0007] 發(fā)明人經(jīng)過研究，意外發(fā)現(xiàn)其富馬酸、馬來酸雜質(zhì)及含量與過敏反應(yīng)相關(guān)，并據(jù)此 建立了 W富馬酸、馬來酸為安全性雜質(zhì)質(zhì)控指標(biāo)的控制方法，富馬酸與馬來酸經(jīng)常作為酸 根與很多藥物成鹽并用作靜脈途徑給藥（如富馬酸伊布利特注射液、馬來酸桂脈齊特注射 液等），且富馬酸是人體內(nèi)組織的正常成分，本身具有良好的安全性。目前尚無直接的文獻 證據(jù)表明，該雜質(zhì)為直接引起如上述口冬氨酸鐘鎮(zhèn)注射劑的嚴重過敏反應(yīng)的原因，發(fā)明人 經(jīng)過研究，如豚鼠的過敏試驗結(jié)果表明，較高富馬酸、馬來酸含量的口冬氨酸鐘鎮(zhèn)注射液， 其致敏性提高，表明該雜質(zhì)的不同增加程度與過敏反應(yīng)有相關(guān)性，n冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn) 及其相關(guān)制劑在一定破壞條件下（如熱），其上述雜質(zhì)含量不同程度增加，藥品質(zhì)量發(fā)生變 化，即使不是富馬酸、馬來酸雜質(zhì)本身直接引起可能的嚴重過敏反應(yīng)，而或是質(zhì)量變化過程 中產(chǎn)生的其他未知雜質(zhì)引起的過敏反應(yīng)，但富馬酸、馬來酸作為間接的安全性指標(biāo)，可W反 應(yīng)該質(zhì)量變化，從而作為安全性質(zhì)控指標(biāo)W反應(yīng)口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的 質(zhì)量情況，而現(xiàn)有技術(shù)的質(zhì)控標(biāo)準無法真實反應(yīng)該質(zhì)量變化。
[0008] 藥物的雜質(zhì)不一定都和安全性有關(guān)，多是反應(yīng)藥物制備工藝對藥物的影響或藥物 的貨架期穩(wěn)定性，如和制備工藝引入的反應(yīng)副產(chǎn)物、中間體，多與藥物的純度有關(guān)，或和有 效性有關(guān)，如對應(yīng)異構(gòu)體雜質(zhì)。富馬酸、馬來酸作為本發(fā)明安全性有關(guān)的雜質(zhì)，可W采用現(xiàn) 代分析方法檢測其含量。
[0009] 在原料合成過程中，不同的反應(yīng)、干燥溫度，及制劑過程中，不同的制劑工藝，如固 體制劑的濕法制粒，干燥，如n冬氨酸鐘注射液、n冬氨酸鐘鎮(zhèn)注射液，均需要終端高溫過 度滅菌工藝，而注射用口冬氨酸鐘鎮(zhèn)則采用無菌生產(chǎn)工藝，用冷凍干燥方法制備，無需經(jīng)過 高溫處理，即不同的滅菌工藝及處方工藝措施，藥物的雜質(zhì)可能不同，尤其針對終端滅菌工 藝制劑，不同的滅菌設(shè)備、不同的滅菌溫度、不同的滅菌時間，雜質(zhì)水平明顯不同，從而造成 臨床的安全性隱患，即使同一滅菌工藝，可能會因為操作人員、設(shè)備狀態(tài)、生產(chǎn)地點等情況 變化而產(chǎn)品的雜質(zhì)發(fā)生變化。
[0010] 本發(fā)明是該樣實現(xiàn)的：
[0011] 口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的安全性分析方法，W富馬酸、馬來酸作為 安全性控制指標(biāo)。
[0012] 口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的安全性雜質(zhì)分析方法，W富馬酸、馬來酸 作為安全性雜質(zhì)指標(biāo)，采用高效液相色譜法檢測，W波長為190?240nm進行檢測，包括：
[0013] a.取口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)或其相關(guān)制劑，用水或流動相溶解，必要時濾過，配 成每1ml中約含0. 5?5. Omg的溶液，作為供試品溶液，另取馬來酸及富馬酸對照品適量， 加流動相溶解并稀釋制成含富馬酸1?5 y g/ml和馬來酸0. 2?5 y g/ml的混合溶液，作 為對照品溶液；
[0014] b.取上述溶液適量，分別注入液相色譜化記錄色譜圖，供試品溶液的色譜圖中如 有與富馬酸、馬來酸峰保留時間一致的峰，按外標(biāo)法w峰面積計算，即得。
[0015] 高效液相色譜法中液相色譜柱選自W陽離子交換樹脂為填充劑，可W為賴酸基陽 離子交換樹脂為填充劑，流動相為酸水溶液，如0. 01?0. 〇4mol/L硫酸水溶液，如0. 02mol/ L硫酸水溶液。
[001引 檢測波長為210nm,室溫?45°C，流速；0. 3?1. Oml/min。
[0017] 方法可W為：取口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑適量，加流動相溶解并稀釋 制成每Iml中約含1. Omg的溶液，作為供試品溶液，另取馬來酸及富馬酸對照品適量，加流 動相溶解并稀釋制成含馬來酸1 y g/ml及富馬酸5 y g/ml的混合溶液，作為對照品溶液，照 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄VD)試驗。用賴酸基陽離子交換樹脂為填 充劑，W 0. 〇3mol/L硫酸溶液為流動相，檢測波長為210皿，柱溫：室溫，流速；0. 4ml/min，精 密量取供試品溶液與對照品溶液各20 y 1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液 的色譜圖中如有與馬來酸及富馬酸峰保留時間一致的峰，按外標(biāo)法W峰面積計算，即得。
[0018] 高效液相色譜法中液相色譜柱可W選自W娃焼鍵合娃膠為填充劑的色譜柱，流動 相由無機或有機鹽的水溶液與色譜純有機溶劑組成，無機或有機鹽的水溶液與色譜純有機 溶劑體積比為98 : 1?30 : 70,上述的無機或有機鹽選自鐘或軸的磯酸鹽、構(gòu)稼酸鹽，色 譜純有機溶劑選自醇類或膳類有機溶劑，娃焼鍵合娃膠選自C2?C18焼基娃焼鍵合娃膠、 氨基娃焼鍵合娃膠、氯基娃焼鍵合娃膠。如；色譜柱為氨基鍵合娃膠柱，流動相為0.05mol/ L磯酸二氨鐘溶液：己膳（45 : 55)，檢測波長200皿，柱溫；室溫?45°C，流速；0. 5? 1. 3ml/min。
[0019] 方法可W為：取口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑適量，加流動相溶解并稀釋 巧||成每Iml中約含1. Omg的溶液，作為供試品溶液，另取馬來酸及富馬酸對照品適量，加流 動相溶解并稀釋制成含馬來酸1 y g/ml及富馬酸5 y g/ml的混合溶液，作為對照品溶液， 照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄VD)試驗。用氨基鍵合娃膠色譜柱，W 0.05mol/L磯酸二氨鐘溶液：己膳（45 : 55)為流動相，檢測波長為200皿，柱溫；4(TC，流 速；0. 8ml/min，精密量取供試品溶液與對照品溶液各20 y 1，分別注入液相色譜儀，記錄色 譜圖，供試品溶液的色譜圖中如有與馬來酸及富馬酸峰保留時間一致的峰，按外標(biāo)法W峰 面積計算，即得。
[0020] 本發(fā)明的口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的安全性雜質(zhì)分析方法經(jīng)方法 學(xué)研究，方法專屬性強，溶劑、主藥成分、輔料不干擾雜質(zhì)的測定，進行強制破壞性（酸、 堿、氧化、熱、光）試驗，馬來酸、富馬酸均能達到良好的分離，馬來酸濃度在0. 1068 y g/ ml?2. 1360 yg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積A呈線性關(guān)系，富馬酸濃度在0.4978 yg/ml? 9. 9559 y g/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積A呈線性關(guān)系，進樣精密度馬來酸RSD為0. 33% ;富 馬酸RSD為0. 14%，均符合測定要求；馬來酸、富馬酸的定量限均為O.OSng，檢測限均為 0. 024ng，準確度（回收率）、重復(fù)性、中間精密度、耐用性等試驗均符合中國藥典2010版二 部關(guān)于HPLC測定的要求。
[0021] 本發(fā)明的口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的安全性雜質(zhì)分析方法，W富馬 酸、馬來酸作為安全性雜質(zhì)指標(biāo)的其他測定方法，也可W為用離子交換色譜柱，采用電導(dǎo)檢 測器進行檢測。
[0022] 對于本發(fā)明而言，結(jié)合實施例的豚鼠過敏性試驗，及制備工藝可行性，n冬氨 酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑的安全性雜質(zhì)分析控制，其限量可制定為：富馬酸限量 《0. 2%，馬來酸《0. 02%。

【具體實施方式】
[0023] 實施例1
[0024] 同化200810101612. 4實施例1，同法制備得到口冬氨酸鐘原料；在燒瓶中加入 1340毫升的純化水，攬拌下加入56. 1克氨氧化鐘，全部溶解后，加入133. 1克k 口冬氨 酸。加畢，回流2小時，用氨氧化鐘和口冬氨酸調(diào)節(jié)溶液P冊.0?8. 0,過濾，濾液減壓蒸去 約80%溶劑（水），在攬拌下將所得粘稠狀物加入1340毫升-4(TC的己醇中，邊加邊攬拌， 大量固體生成，加畢，靜置1小時，離也，5(TC減壓真空干燥，即得k 口冬氨酸鐘。
[00幼 實施例2
[0026] 同化200810101612. 4實施例8,同法制備得到口冬氨酸鐘原料：在反應(yīng)蓋中加入 400升的純化水，攬拌下加入56. 1千克氨氧化鐘，全部溶解后，加入133. 1千克k 口冬氨 酸，加畢，回流3小時，用氨氧化鐘和口冬氨酸調(diào)節(jié)溶液P冊.0?8. 0。過濾，濾液蒸去水分， 在攬拌下將所得粘稠狀物加入400升-1(TC的無水己醇中，邊加邊攬拌，大量白色固體生 成，加畢，靜置1小時，離也，粉碎，105C減壓干燥，整粒，即得k 口冬氨酸鐘。
[0027] 實施例3
[002引同化200810101612. 4實施例13制備方法制備得到口冬氨酸鐘注射液：取同實施 例1方法制備的口冬氨酸鐘1712g( W無水物計），加入到約7L的注射用水中，加熱攬拌使 溶解，待全部溶解完全后，調(diào)節(jié)抑至7. 0,加入7. 5g針用活性炭，保溫攬拌30分鐘，粗濾除 炭，用少量注射用水洗涂活性炭層，補注射用水至10以用0. 22 y m的微孔濾膜濾過，灌裝成 1000支，烙封，121度滅菌12分鐘，即得。
[0029] 實施例4
[0030] 除滅菌工藝為121度20分鐘外，其他同實施例3同法制備得到口冬氨酸鐘注射 液。
[00引]實施例5
[003引同專利化200810101613. 9實施例1方法制備口冬氨酸鎮(zhèn)：在反應(yīng)蓋中加入1340 升的純化水，攬拌下加入20. 1千克氧化鎮(zhèn)，全部溶解后，加入133. 1千克k 口冬氨酸。加 畢，回流2小時，用氧化鎮(zhèn)或口冬氨酸調(diào)節(jié)溶液抑5. 5?7. 5。過濾，濾液減壓蒸去約80% 溶劑（水），在攬拌下將所得粘稠狀物加入1340毫升-4(TC的己醇中，邊加邊攬拌，大量固 體生成。加畢，靜置1小時，離也，5(TC減壓真空干燥，得k 口冬氨酸鎮(zhèn)。
[003引 實施例6
[0034] 同專利化200810101613. 9實施例8方法制備口冬氨酸鎮(zhèn)：在反應(yīng)蓋中加入400升 的純化水，攬拌下加入20千克氧化鎮(zhèn)，全部溶解后，加入133. 1千克k 口冬氨酸。加畢，回 流3小時，用鎮(zhèn)鹽和口冬氨酸調(diào)節(jié)溶液抑5. 5?7. 5。過濾，濾液蒸去水分，在攬拌下將所 得粘稠狀物加入400升-10°C的無水己醇中，邊加邊攬拌，大量白色固體生成。加畢，靜置1 小時，離也，粉碎，105°C減壓干燥，整粒，得k 口冬氨酸鎮(zhèn)。
[00對 實施例7
[0036] 取實施例1 口冬氨酸鐘5kg和實施例5制備得到的口冬氨酸鎮(zhèn)化g，加入約80L注 射用水，攬拌使溶解，用口冬氨酸或氨氧化鐘調(diào)節(jié)抑至5. 0?7. 0,加入配制量0. 1 % (g/ ml)的針用活性炭，6(TC保溫攬拌30分鐘，過濾脫炭，用少量注射用水洗涂活性炭層，補注 射用水至10化，攬拌混勻，用0. 22 y m的濾芯精濾，W每支10ml灌裝于安流瓶，烙封，12rC 滅菌12分鐘，即得口冬氨酸鐘鎮(zhèn)注射液。
[0037] 實施例8
[0038] 除滅菌工藝為121度45分鐘外，其他同實施例7同法制備得到口冬氨酸鐘鎮(zhèn)注射 液。
[00測 實施例9
[0040] 取實施例1 口冬氨酸鐘化g、實施例5制備得到的口冬氨酸鎮(zhèn)5kg和甘露醇化g， 加入約4化注射用水，加熱攬拌使溶解，用口冬氨酸或氨氧化鐘調(diào)節(jié)抑至5. 0?7. 0,加入 配制量0.1 % (g/ml)的針用活性炭，6(TC保溫攬拌30分鐘，過濾脫炭，用少量注射用水洗 涂活性炭層，補注射用水至50以攬拌混勻，用0. 22 y m的濾芯精濾，W每支5ml灌裝于西林 瓶，冷凍干燥，真空壓塞，進氣出箱，社鉛塑組合蓋，即得。
[0041] 所述的冷凍干燥工藝為；制品入箱，品溫至-45C W下時保溫2小時；開啟冷凝器 制冷，至-5(TC W下，開啟真空粟，干燥箱抽真空達15pa W下時加熱板層，按程序升溫；W 5°C /小時升溫至-20。再W4°C /小時升溫至-10。W 2°C /小時升至(TC，4°C /小時升 至45C，待品溫升至43C后保溫4-6小時。
[004引 實施例10
[0043] 取實施例7的樣品，50度條件下加速穩(wěn)定性試驗6個月，取出，即得。
[0044] 實施例11
[0045] 安全性雜質(zhì)測定。
[004引方法1;取實施例1-實施例10的口冬氨酸鐘、n冬氨酸鎮(zhèn)及其相關(guān)制劑適量，加 流動相溶解并稀釋制成每Iml中約含1. Omg的溶液，作為供試品溶液，另取馬來酸及富馬酸 對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成含馬來酸1 y g/ml及富馬酸5 y g/ml的混合溶液，作 為對照品溶液，照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄VD)試驗。用賴酸基陽離 子交換樹脂為填充劑，W 0. 03mol/L硫酸溶液為流動相，檢測波長為210nm，柱溫；室溫，流 速；0. 4ml/min，精密量取供試品溶液與對照品溶液各20 y 1，分別注入液相色譜儀，記錄色 譜圖，供試品溶液的色譜圖中如有與馬來酸及富馬酸峰保留時間一致的峰，按外標(biāo)法W峰 面積計算，各雜質(zhì)含量見表1。如圖1所示，12. 577min為馬來酸色譜峰，20. 519min為富馬 酸色譜峰。
[0047] 表1方法1測定雜質(zhì)含量結(jié)果（％ )
[0048]

【權(quán)利要求】
1. 門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性分析方法，其特征在于以富馬酸、馬 來酸作為安全性指標(biāo)的分析檢測。
2. 門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性分析方法，其特征在于以富馬酸、馬 來酸作為安全性指標(biāo)，采用高效液相色譜法檢測，以波長為190?240nm進行檢測，包括： a. 取門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂或其相關(guān)制劑，用水或流動相溶解，必要時濾過，配成每 lml中約含0. 5?5. Omg的溶液，作為供試品溶液，另取馬來酸及富馬酸對照品適量，加流動 相溶解并稀釋制成含富馬酸1?5 y g/ml和馬來酸0. 2?5 y g/ml的混合溶液，作為對照 品溶液； b. 取上述溶液適量，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液的色譜圖中如有與 富馬酸、馬來酸峰保留時間一致的峰，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性雜質(zhì)分析方 法，其特征在于高效液相色譜法中液相色譜柱選自以陽離子交換樹脂為填充劑，流動相為 酸水溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性分析方法， 其特征在于高效液相色譜法中液相色譜柱以磺酸基陽離子交換樹脂為填充劑，以0. 01? 0. 04mol/L硫酸水溶液為流動相。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性雜質(zhì)分析 方法，其特征在于高效液相色譜法中液相色譜柱以磺酸基陽離子交換樹脂為填充劑，以 0? 02mol/L硫酸水溶液為流動相，檢測波長為210nm，室溫?45°C，流速：0? 3?1. Oml/min。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性分析方法， 為：取門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑適量，加流動相溶解并稀釋制成每lml中約含 1. Omg的溶液，作為供試品溶液，另取馬來酸及富馬酸對照品適量，加流動相溶解并稀釋制 成含馬來酸1 U g/ml及富馬酸5 y g/ml的混合溶液，作為對照品溶液，照高效液相色譜法 (中國藥典2010年版二部附錄VD)試驗。用磺酸基陽離子交換樹脂為填充劑，以0. 03mol/ L硫酸溶液為流動相，檢測波長為210nm，柱溫：室溫，流速：0. 4ml/min，精密量取供試品溶 液與對照品溶液各20 yl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液的色譜圖中如有 與馬來酸及富馬酸峰保留時間一致的峰，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性分析方法， 其特征在于高效液相色譜法中液相色譜柱選自以硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，流動相 由無機或有機鹽的水溶液與色譜純有機溶劑組成，無機或有機鹽的水溶液與色譜純有機溶 劑體積比為98 : 1?30 : 70,上述的無機或有機鹽選自鉀或鈉的磷酸鹽、枸櫞酸鹽，色譜 純有機溶劑選自醇類或腈類有機溶劑，硅烷鍵合硅膠選自C2?C18烷基硅烷鍵合硅膠、氨 基硅烷鍵合硅膠、氰基硅烷鍵合硅膠。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性分析方 法，其特征在于色譜柱為氨基鍵合硅膠柱，流動相為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液：乙腈 (45 : 55)，檢測波長200nm，柱溫：室溫?45°C，流速：0? 5?1. 3ml/min。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性分析方法， 為：取門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑適量，加流動相溶解并稀釋制成每lml中約含 1. Omg的溶液，作為供試品溶液，另取馬來酸及富馬酸對照品適量，加流動相溶解并稀釋制 成含馬來酸1 y g/ml及富馬酸5 y g/ml的混合溶液，作為對照品溶液，照高效液相色譜法 (中國藥典2010年版二部附錄VD)試驗。用氨基鍵合硅膠色譜柱，以0. 05mol/L磷酸二氫 鉀溶液：乙腈（45 : 55)為流動相，檢測波長為200nm，柱溫：40°C，流速：0.8ml/min，精密 量取供試品溶液與對照品溶液各20 yl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液的 色譜圖中如有與馬來酸及富馬酸峰保留時間一致的峰，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。
10.權(quán)利要求1-9任意一項門冬氨酸鉀、門冬氨酸鎂及其相關(guān)制劑的安全性雜質(zhì)分析 方法，其安全性雜質(zhì)限量控制為：富馬酸< 0. 2%，馬來酸< 0. 02%。
【文檔編號】G01N30/88GK104422746SQ201310362768
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月20日
【發(fā)明者】胡軍, 劉烽, 謝景鳳, 樂琴波, 付國莉, 張勇 申請人:北京京衛(wèi)信康醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司