本發(fā)明涉及疾病診斷領(lǐng)域，具體地，涉及尿液中的登革熱特異性iga抗體作為登革熱的診斷標(biāo)志物。

背景技術(shù)：

登革熱是由登革病毒(denguevirus，denv)感染引起的、經(jīng)蚊子傳播的疾病。登革熱是一種熱帶病毒病，主要分布于東南亞和西太平洋地區(qū)。但是，近年來(lái)，隨著國(guó)際貿(mào)易和旅游業(yè)的日益頻繁，以及氣候改變等諸多因素的影響，登革熱已經(jīng)波及到了溫帶，甚至是寒帶地區(qū)，成為了目前世界上分布最廣、發(fā)病人數(shù)最多，威脅最為嚴(yán)重的蟲(chóng)媒病毒病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年感染登革病毒的人數(shù)近3.9億，發(fā)病人數(shù)9600萬(wàn)，其中50萬(wàn)重癥病例需入院治療，給全球公共衛(wèi)生系統(tǒng)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。在我國(guó)，登革熱被列入法定乙類傳染病，主要流行于廣東、福建、浙江和云南等地。近年來(lái)，隨著媒介范圍的不斷擴(kuò)大和國(guó)際交往的日益頻繁，我國(guó)僅有三省未見(jiàn)登革熱的報(bào)告病例，登革熱已成為嚴(yán)重威脅我國(guó)公共衛(wèi)生安全的重要蚊媒傳染病之一。

根據(jù)2009年世界衛(wèi)生組織發(fā)布的登革熱診療指南，登革熱患者被分為普通登革熱和重癥登革熱。普通登革熱主要表現(xiàn)為急性發(fā)熱，全身肌肉、骨骼和關(guān)節(jié)疼痛，并可出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等消化道癥狀。通常愈后良好。但是，少數(shù)患者會(huì)在退熱后癥狀加重，如果有下列情況之一者可診斷為重癥登革熱，病死率高達(dá)5-20％：1)嚴(yán)重出血包括皮下血腫、嘔血、黑便、陰道流血、肉眼血尿、顱內(nèi)出血等；2)休克；3)重要臟器功能障礙或衰竭：肝臟損傷(alt和/或ast>1000iu/l)、ards、急性心功能衰竭、急性腎功能衰竭、腦病(腦炎、腦膜腦炎)等。

登革病毒可分為4個(gè)血清型(denv-1、denv-2、denv-3和denv-4)。不同血清型登革病毒感染均可導(dǎo)致重癥登革熱。目前，重癥登革熱的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，并存在多種假說(shuō)。其中的抗體依賴增強(qiáng)假說(shuō)被廣泛接受。該假說(shuō)認(rèn)為，不同血清型登革病毒間存在交叉反應(yīng)，但缺乏交叉保護(hù)作用。初次感染登革病毒的病人，臨床上表現(xiàn)相對(duì)溫和，并可誘導(dǎo)針對(duì)同一血清型病毒的持久保護(hù)力；但是，如果該患者再次感染了異型登革病毒，則異型登革病毒會(huì)借助之前體內(nèi)存在的無(wú)交叉保護(hù)的抗體，來(lái)增強(qiáng)病毒的感染能力。臨床上常出現(xiàn)嚴(yán)重的癥狀，可危及生命。

登革病毒感染的臨床表現(xiàn)十分復(fù)雜，而且多數(shù)癥狀與瘧疾、傷寒以及基孔肯亞熱等疾病難以區(qū)分，單純依據(jù)患者的流行病學(xué)資料和臨床表現(xiàn)很難明確診斷，因此，通常需要實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)一步確診。目前，登革熱的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)，主要包括病毒分離、病毒核酸和ns1抗原的檢測(cè)，血清中igm和igg抗體亦具有確診意義。上述診斷標(biāo)志物主要存在于患者血液。但是，對(duì)于新生兒和有出血癥狀的患者，血液標(biāo)本相對(duì)難以獲得；同時(shí)出于基層疾控和家庭早期診斷的需求，發(fā)展其他便捷可行的快速診斷方法受到廣泛重視。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中只能基于血液診斷登革熱的不足，提供尿液中的登革熱特異性iga抗體作為登革熱的診斷標(biāo)志物及相關(guān)的用途。

本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是在普通登革熱患者，還是重癥登革熱患者的尿液中均存在登革熱特異性iga抗體，而且在重癥登革熱患者的尿液中，登革熱特異性iga抗體的檢出率顯著高于普通登革熱患者，故而可以通過(guò)檢測(cè)尿液中的登革熱特異性iga抗體來(lái)協(xié)助確診患者是否患重癥登革熱。因此，為了實(shí)現(xiàn)上述目的，第一方面，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)登革熱特異性iga抗體的試劑和用于獲取尿液樣品的器具在制備用于診斷登 革熱的醫(yī)療器具中的用途。

第二方面，本發(fā)明提供了登革熱特異性iga抗體膠體金快速檢測(cè)試劑在檢測(cè)尿液中的登革熱特異性iga抗體中的用途。

第三方面，本發(fā)明提供了一種診斷登革熱的方法，該方法包括：檢測(cè)患者的尿液樣品中的登革熱特異性iga抗體。

通過(guò)以上技術(shù)方案，本發(fā)明能夠有效輔助診斷登革熱(特別是重癥登革熱)，從而方便醫(yī)生對(duì)登革熱患者進(jìn)行確診。而且，尿液的臨床采集具有無(wú)創(chuàng)、便利的優(yōu)點(diǎn)，因此更值得推廣應(yīng)用。

本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說(shuō)明。

附圖說(shuō)明

附圖是用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說(shuō)明書的一部分，與下面的具體實(shí)施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1為普通登革熱患者和重癥登革熱患者尿液標(biāo)本中特異性iga的檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。

在本文中所披露的范圍的端點(diǎn)和任何值都不限于該精確的范圍或值，這些范圍或值應(yīng)當(dāng)理解為包含接近這些范圍或值的值。對(duì)于數(shù)值范圍來(lái)說(shuō)，各個(gè)范圍的端點(diǎn)值之間、各個(gè)范圍的端點(diǎn)值和單獨(dú)的點(diǎn)值之間，以及單獨(dú)的點(diǎn)值之間可以彼此組合而得到一個(gè)或多個(gè)新的數(shù)值范圍，這些數(shù)值范圍應(yīng)被視為在本文中具體公開(kāi)。

在本發(fā)明中，在未作相反說(shuō)明的情況下，使用的術(shù)語(yǔ)“登革熱特異性iga抗體”是指人體b細(xì)胞針對(duì)登革熱病毒的抗原表位產(chǎn)生的一種免疫球蛋白，氨基酸序列可參見(jiàn)ncbi。

第一方面中，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)登革熱特異性iga抗體的試劑和用于獲取尿液樣品的器具在制備用于診斷登革熱(特別是重癥登革熱)的醫(yī)療器具中的用途。

第一方面中，用于檢測(cè)登革熱特異性iga抗體的試劑可以為各種本領(lǐng)域常規(guī)的用于檢測(cè)登革熱特異性iga抗體的試劑，為了實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，用于檢測(cè)登革熱特異性iga抗體的試劑優(yōu)選為登革熱特異性iga抗體膠體金快速檢測(cè)試劑(如mpdiagnostics的登革熱特異性iga抗體快速檢測(cè)膠體金試紙)。

第一方面中，用于獲取尿液樣品的器具可以為常規(guī)的用于獲取患者尿液的器具，優(yōu)選情況下，用于獲取尿液樣品的器具包括尿液采集器、離心管和離心機(jī)。尿液采集器可以方便患者收集新鮮尿液；離心管用于盛裝新鮮尿液以置于離心機(jī)中對(duì)新鮮尿液進(jìn)行離心處理，從而獲得上清液作為待檢測(cè)的尿液樣品。

第二方面中，本發(fā)明提供了登革熱特異性iga抗體膠體金快速檢測(cè)試劑(如mpdiagnostics的登革熱特異性iga抗體快速檢測(cè)膠體金試紙)在檢測(cè)尿液中的登革熱特異性iga抗體中的用途。

第三方面中，本發(fā)明提供了一種診斷登革熱(特別是重癥登革熱)的方法，該方法包括：檢測(cè)患者的尿液樣品中的登革熱特異性iga抗體。如果尿液樣品中存在登革熱特異性iga抗體，則提示該患者患登革熱(特別是易發(fā)展為重癥登革熱)。

第三方面中，可以直接對(duì)新鮮尿液進(jìn)行上述檢測(cè)，也可以對(duì)尿液樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理。優(yōu)選地，尿液樣品的制備方法為：將患者的尿液在400-1000g的條件下離心3-10min，取上清液作為尿液樣品。

第三方面中，檢測(cè)尿液樣品中的登革熱特異性iga抗體的方法為登革熱特異性iga抗體膠體金快速檢測(cè)法(如使用mpdiagnostics的登革熱特異性iga抗體快速檢測(cè)膠體金試紙)。

以下將通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。以下實(shí)施例中，“室溫”表示“25℃±3℃”；下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。

實(shí)施例1

本實(shí)施例用來(lái)說(shuō)明登革熱患者尿液標(biāo)本中特異性iga抗體的檢測(cè)。

共收集78名登革熱患者(普通登革熱53例，重癥登革熱25例)在不同發(fā)病時(shí)間的262份尿液標(biāo)本，所有患者根據(jù)“who/tdr.dengue-guidelinesfordiagnosis,treatment,preventionandcontrol.2009；http://www.who.int/tdr/publications/training-guideline-publications/dengue-diagnosis-treatment/en/index.html.dateofaccess:12/05/2015.2009”進(jìn)行確診?；颊叩幕拘畔⒁?jiàn)表1。

表1

采用登革熱特異性iga抗體快速檢測(cè)膠體金試紙(dengueigarapidtest，mpdiagnostics)對(duì)所有尿液標(biāo)本進(jìn)行登革病毒特異性iga抗體的檢測(cè)：首先，將新鮮的尿液標(biāo)本在室溫下，400g，離心5min。取25μl上清液，滴加在膠體金試紙上，室溫放置20min，根據(jù)試劑盒自帶的比色卡確定目的條帶的信號(hào)強(qiáng)度。iga信號(hào)強(qiáng)度分為5級(jí)：0.2、0.5、1、2和3。檢測(cè)結(jié)果如表2所示。

表2

根據(jù)表2進(jìn)一步分析登革熱患者在不同發(fā)病期的特異性iga抗體檢測(cè)陽(yáng)性率，可以看出，46例登革熱患者的尿液標(biāo)本中可檢測(cè)到登革病毒特異性iga抗體，陽(yáng)性率為59.0％；而且，重癥登革熱患者在不同發(fā)病期的iga抗體檢測(cè)陽(yáng)性率均高于普通登革熱患者(參見(jiàn)表3)。

表3

根據(jù)表2分析登革熱患者尿液標(biāo)本中特異性iga的動(dòng)態(tài)變化，結(jié)果顯示：iga最早可出現(xiàn)在普通登革熱患者發(fā)病2天的尿液標(biāo)本中，并可持續(xù)存在至發(fā)病13天；而在發(fā)病14天的重癥登革熱患者的尿液中仍能檢測(cè)到iga抗體(參見(jiàn)表4)。

表4

根據(jù)表4統(tǒng)計(jì)不同發(fā)病時(shí)間段的登革熱患者尿液標(biāo)本中特異性iga抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率，結(jié)果顯示：在重癥登革熱組，iga的檢測(cè)陽(yáng)性率在發(fā)病的不同時(shí)間段均高于普通登革熱組，而且隨發(fā)病時(shí)間的延長(zhǎng)，iga的檢測(cè)陽(yáng)性率不斷增高，于發(fā)病12-14天，達(dá)到92.8％；在普通登革熱組，iga的檢測(cè)陽(yáng)性率最高則出現(xiàn)于發(fā)病8-11天，僅為53.8％(參見(jiàn)表5)。

表5

采用fisher檢驗(yàn)分析尿液標(biāo)本中登革病毒特異性iga抗體的檢出率與疾病的嚴(yán)重程度的相關(guān)性(表6)，結(jié)果表明，重癥登革熱患者尿液標(biāo)本中iga的檢出率顯著高于輕癥登革熱患者(p<0.001)，表明尿液標(biāo)本中的iga抗體是重癥登革熱的危險(xiǎn)因子。

表6

進(jìn)一步對(duì)登革熱患者尿液標(biāo)本中的iga進(jìn)行了定量分析(iga信號(hào)強(qiáng)度分析，見(jiàn)圖1，其中，線圖上的數(shù)據(jù)點(diǎn)為散點(diǎn)數(shù)據(jù)的平均值)。結(jié)果顯示，在重癥登革熱組，iga信號(hào)強(qiáng)度在發(fā)病7天后顯著高于普通登革熱組，并持續(xù)維持在1以上。提示臨床醫(yī)生在登革熱患者的發(fā)病過(guò)程中應(yīng)密切關(guān)注尿液中的iga水平，如果iga信號(hào)強(qiáng)度>1，則說(shuō)明該患者很有可能發(fā)展為重癥登革熱。

從以上結(jié)果可以看出，通過(guò)檢測(cè)尿液中的登革熱特異性iga抗體能夠有效輔助醫(yī)生對(duì)登革熱進(jìn)行確診。

以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

另外需要說(shuō)明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過(guò)任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說(shuō)明。

此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開(kāi)的內(nèi)容。