本發(fā)明涉及食品檢測(cè)與食品質(zhì)量控制領(lǐng)域，具體涉及一種紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的測(cè)定方法，特別是涉及一種通過(guò)頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的方法。

背景技術(shù)：

葡萄酒的氣味是葡萄酒質(zhì)量與品質(zhì)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，良好的氣味會(huì)增加葡萄酒的復(fù)雜性和協(xié)調(diào)性，并提高消費(fèi)者購(gòu)買(mǎi)率。相反，不良的氣味則會(huì)造成葡萄酒的缺陷。

葡萄酒的氣味是由很多物質(zhì)構(gòu)成的。其中，揮發(fā)性酚類(lèi)是很重要的一類(lèi)，尤其是4-乙基苯酚(4-ethylphenol,4-EP)、4-乙基愈創(chuàng)木酚(4-ethylguaiacol,4-EG)。

4-EP通常被描述為“草棚味”、“馬廄味”，4-EG則被描述為煙熏味、丁香味。低濃度時(shí)，4-EP和4-EG可以增加葡萄酒氣味的復(fù)雜性；高濃度時(shí)，因其嗅覺(jué)閾值較低(4-EP:430μg/L、4-EG:33μg/L)，容易造成紅葡萄酒的感觀缺陷。通常，它們?cè)诰浦械臐舛葟膸资⒖嗣可綆装傥⒖嗣可坏?。?dāng)達(dá)到數(shù)毫克每升時(shí)，4-EP會(huì)帶來(lái)一種強(qiáng)烈的“馬廄”味。即使是在較低的濃度下(600-700μg/L)，4-EP也會(huì)改變酒的香氣。雖然其氣味可能只有輕微地令人不愉快，但它仍然會(huì)掩蓋掉果香和酒香，使酒失去它們本身的個(gè)性。研究表明，這類(lèi)揮發(fā)性酚類(lèi)物質(zhì)給葡萄酒帶來(lái)的香氣上的缺陷是普遍存在的。因此，建立一種準(zhǔn)確、快速檢測(cè)紅葡萄酒中4-EP、4-EG的方法，了解目前紅葡萄酒中4-EP、4-EG的含量情況是十分必要的。這將為進(jìn)一步研究其產(chǎn)生機(jī)理、控制其對(duì)紅葡萄酒感官品質(zhì)的影響提供技術(shù)支持。

近年來(lái)，隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的發(fā)展，一些精密的分析手段被應(yīng)用于葡萄酒風(fēng)味物質(zhì)的分離和鑒定，如氣相色譜、氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)等。但使用這些分析系統(tǒng)之前，都必須將香氣物質(zhì)較為完全地從葡萄酒中抽提出來(lái)，以獲得理想的分析結(jié)果。因此選擇適當(dāng)?shù)妮腿》椒ㄊ鞘直匾?。目前葡萄酒香氣的萃取方法有溶劑萃取法、固相萃取?SPE)、吹掃捕集法(P&T)、頂空固相微萃取法(HS-SPME)、固態(tài)攪拌棒吸附萃取法(SBSE)等。尤其是SPE技術(shù)，近年來(lái)被廣泛運(yùn)用于葡萄酒香氣成分的研究。但該方法的難點(diǎn)是眾多操作參數(shù)的選擇和定量結(jié)果的重復(fù)性，因而，需要研究建立相應(yīng)的方法后才可用作日常質(zhì)量控制分析。

國(guó)外的研究中，對(duì)于4-EP、4-EG的萃取技術(shù)主要有液-液萃取、固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、頂空固相微萃取(HS-SPME)、多重頂空固相微萃取。其中多重頂空固相微萃取是對(duì)頂空固相微萃取技術(shù)的改進(jìn)，可連續(xù)分離樣品中的揮發(fā)性酚類(lèi)物質(zhì)，同時(shí)能避免可能出現(xiàn)的基體效應(yīng)。對(duì)于4-EP、4-EG的定量分析檢測(cè)技術(shù)主要有GC-FID或GC-MS。也有文獻(xiàn)報(bào)道用HPLC-FID定量分析合適的揮發(fā)性酚類(lèi)樣本以及用HPLC-電化學(xué)陣列檢測(cè)器定量分析。

而在中國(guó)，相關(guān)報(bào)道很少。目前，優(yōu)質(zhì)國(guó)產(chǎn)葡萄酒已經(jīng)開(kāi)始逐漸走出國(guó)門(mén)，出口到世界各地，而葡萄酒中4-EP、4-EG的檢測(cè)手段的不足，使得我國(guó)葡萄酒在出口上很容易遭遇其他國(guó)家的貿(mào)易壁壘。

總而言之，我國(guó)在葡萄酒中4-EP、4-EG的檢測(cè)與其他國(guó)家相比有較大的差距。這對(duì)于我國(guó)葡萄酒產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展，是一個(gè)很大的隱患。因此建立一種快速、準(zhǔn)確、方便、實(shí)用的檢測(cè)方法，有利于監(jiān)控葡萄酒生產(chǎn)過(guò)程中4-EP、4-EG的含量控制，進(jìn)而保障葡萄酒的質(zhì)量，以及消費(fèi)者食品安全與我國(guó)葡萄酒產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。目前尚無(wú)針對(duì)紅葡萄酒中4-EP和4-EG檢測(cè)的相關(guān)專利。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是填補(bǔ)紅葡萄酒中4-EP和4-EG相關(guān)檢測(cè)方法領(lǐng)域的不足，通過(guò)摸索最佳頂空固相微萃取條件和最佳氣相色譜-質(zhì)譜分離條件而提供一種紅葡萄酒中4-EP和4-EG含量的測(cè)定方法，從而克服上述不足。

針對(duì)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：

一種同時(shí)檢測(cè)紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

a.內(nèi)標(biāo)物的制備：精確稱取1mg純度為色譜純的對(duì)-甲酚標(biāo)準(zhǔn)品，用純度為色譜純的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存，作為內(nèi)標(biāo)物使用；

b.頂空固相微萃取：在裝有磁力攪拌器的15mL頂空瓶中加入待測(cè)紅葡萄酒樣品10mL，加入步驟a中制備的內(nèi)標(biāo)物100μL和NaCl；將頂空瓶置于磁力加熱攪拌裝置上，在50℃預(yù)先加熱平衡10min，調(diào)整磁力攪拌轉(zhuǎn)速為850rpm，插入萃取頭；

c.標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定：分別精確稱取純度為色譜純的4-EP標(biāo)準(zhǔn)品1mg和純度為色譜純的4-EG標(biāo)準(zhǔn)品1mg，用純度為色譜純的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存；用純度為色譜純的乙醇稀釋，分別配制50μg/L、100μg/L、500μg/L、1000μg/L、2000μg/L和3000μg/L的4-EP標(biāo)準(zhǔn)品溶液；5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和1000μg/L的4-EG標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

在裝有磁力攪拌器的15mL頂空瓶中分別加入上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液10mL，加入步驟a中制備的內(nèi)標(biāo)物100μL和NaCl；將頂空瓶置于磁力加熱攪拌裝置上，在50℃預(yù)先加熱平衡10min，調(diào)整磁力攪拌轉(zhuǎn)速為850rpm，插入萃取頭；

d.氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)：將上述步驟b、c的萃取手柄分別插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口進(jìn)樣，解析5min，得到待測(cè)紅葡萄酒樣品溶液中4-EP、4-EG和內(nèi)標(biāo)物的峰面積，以及4-EP標(biāo)準(zhǔn)品、4-EG標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積；

e.標(biāo)準(zhǔn)曲線的計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為響應(yīng)值A(chǔ)，即

響應(yīng)值A(chǔ)＝標(biāo)準(zhǔn)品峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積；

根據(jù)響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度之間存在的線性關(guān)系，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線；

f.待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EP、4-EG濃度的計(jì)算：以待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EP、4-EG的峰面積分別與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比為響應(yīng)值B_4-EP、B_4-EG，即

B_4-EP＝待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EP峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積，

B_4-EG＝待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EG峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積；

根據(jù)步驟e中得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EP、4-EG濃度；

其中，

所述步驟d中，

1)氣相色譜檢測(cè)條件：

氣相色譜進(jìn)樣方式為SPME無(wú)分流進(jìn)樣；

氣相色譜升溫程序?yàn)槌跏紲囟?0℃保持3分鐘，之后以10℃/min升至150℃，再以5℃/min升至180℃，再以10℃/min升至210℃，保持16min；

2)質(zhì)譜條件：

質(zhì)譜儀電離源為EI電離源，電子能量為70eV，掃描范圍(m/z)：50～500AMU，離子源溫度250℃。

所述的同時(shí)檢測(cè)紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的方法步驟b和步驟c中，NaCl的添加量為2.5g。

所述的同時(shí)檢測(cè)紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的方法步驟b和步驟c中，萃取頭為美國(guó)Supelco公司的50/30μmDVB/CAR/PDMS萃取頭。

所述的同時(shí)檢測(cè)紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的方法步驟b和步驟c中，頂空固相微萃取的溫度為55℃，萃取時(shí)間為45min。

所述的同時(shí)檢測(cè)紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的方法步驟d中，檢測(cè)儀器為美國(guó)安捷倫公司GC6890/MS5973型氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀；

氣相色譜檢測(cè)條件還包括：

1)色譜柱為美國(guó)安捷倫公司的HP-INNO-WAX，規(guī)格為60.0m×0.25mm×0.25μm；

2)載氣為高純度氮?dú)?，流?mL/min；

3)檢測(cè)器溫度250℃，進(jìn)樣口溫度250℃。

所述的同時(shí)檢測(cè)紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的方法步驟d中，質(zhì)譜條件還包括：質(zhì)譜分析結(jié)束后，分析結(jié)果運(yùn)用NIST2005標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)進(jìn)行檢索。

本發(fā)明的有益效果在于：

建立一種快速、準(zhǔn)確、方便、實(shí)用的檢測(cè)方法，用于同時(shí)檢測(cè)和監(jiān)控紅葡萄酒生產(chǎn)過(guò)程中4-EP、4-EG的含量，進(jìn)而保障葡萄酒的質(zhì)量，以及消費(fèi)者食品安全與我國(guó)葡萄酒產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

填補(bǔ)我國(guó)在紅葡萄酒中4-EP、4-EG的含量檢測(cè)方法領(lǐng)域的不足，為葡萄酒質(zhì)量檢測(cè)提供技術(shù)支持。

附圖說(shuō)明

以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中：

圖1為本發(fā)明的實(shí)施例中的4-EP標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

圖2為本發(fā)明的實(shí)施例中的4-EG標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

圖3為本發(fā)明的實(shí)施例中的4-EP和4-EG標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖；

圖4為實(shí)際檢測(cè)中紅葡萄酒樣品中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚以及內(nèi)標(biāo)物的氣相色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。

本發(fā)明一種同時(shí)檢測(cè)紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的方法，其包括以下步驟：

a.內(nèi)標(biāo)物的制備：精確稱取1mg純度為色譜純的對(duì)-甲酚標(biāo)準(zhǔn)品，用純度為色譜純的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存，作為內(nèi)標(biāo)物使用。

b.頂空固相微萃?。涸谘b有磁力攪拌器的15mL頂空瓶中加入待測(cè)紅葡萄酒樣品10mL，加入步驟a中制備的內(nèi)標(biāo)物100μL和2.5g的NaCl。將頂空瓶置于磁力加熱攪拌裝置上，在50℃預(yù)先加熱平衡10min，調(diào)整磁力攪拌轉(zhuǎn)速為850rpm，插入萃取頭，在55℃下頂空固相微萃取45min。

其中，萃取頭為美國(guó)Supelco公司的50/30μm DVB/CAR/PDMS萃取頭。

c.標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定：分別精確稱取純度為色譜純的4-EP標(biāo)準(zhǔn)品1mg和純度為色譜純的4-EG標(biāo)準(zhǔn)品1mg，用純度為色譜純的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存。用純度為色譜純的乙醇稀釋，分別配制50μg/L、100μg/L、500μg/L、1000μg/L、2000μg/L和3000μg/L的4-EP標(biāo)準(zhǔn)品溶液；5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和1000μg/L的4-EG標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

在裝有磁力攪拌器的15mL頂空瓶中分別加入上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液10mL，分別加入步驟a中制備的內(nèi)標(biāo)物100μL和2.5g的NaCl。將頂空瓶置于磁力加熱攪拌裝置上，在50℃預(yù)先加熱平衡10min，調(diào)整磁力攪拌轉(zhuǎn)速為850rpm，插入萃取頭，在55℃下頂空固相微萃取45min。

其中，萃取頭為美國(guó)Supelco公司的50/30μm DVB/CAR/PDMS萃取頭。

d.氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)：萃取結(jié)束后，將上述步驟b、c的萃取手柄分別插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口進(jìn)樣，解析5min，得到待測(cè)紅葡萄酒樣品溶液中4-EP、4-EG和內(nèi)標(biāo)物的峰面積，以及4-EP標(biāo)準(zhǔn)品、4-EG標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積。

檢測(cè)條件：

檢測(cè)儀器為現(xiàn)有的美國(guó)安捷倫公司GC6890/MS5973型氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀。

1.氣相色譜檢測(cè)條件：

1)氣相色譜進(jìn)樣方式為SPME無(wú)分流進(jìn)樣；

2)色譜柱為美國(guó)安捷倫公司的HP-INNO-WAX，規(guī)格為60.0m×0.25mm×0.25μm；

3)氣相色譜升溫程序：初始溫度50℃保持3分鐘，之后以10℃/min升至150℃，再以5℃/min升至180℃，再以10℃/min升至210℃，保持16min。

4)載氣為高純度氮?dú)?，流?mL/min。

5)檢測(cè)器溫度250℃，進(jìn)樣口溫度250℃。

2.質(zhì)譜條件：

1)質(zhì)譜儀電離源為EI電離源，電子能量為70eV，掃描范圍(m/z)：50～500AMU，離子源溫度250℃。

2)質(zhì)譜分析結(jié)束后，分析結(jié)果運(yùn)用NIST2005標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)進(jìn)行檢索。

e.標(biāo)準(zhǔn)曲線的計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為響應(yīng)值A(chǔ)，即

響應(yīng)值A(chǔ)＝標(biāo)準(zhǔn)品峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積；

根據(jù)響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度之間存在的線性關(guān)系，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

f.待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EP、4-EG濃度的計(jì)算：以待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EP、4-EG的峰面積分別與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比為響應(yīng)值B_4-EP、B_4-EG，即

B_4-EP＝待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EP峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積，

B_4-EG＝待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EG峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積,

通過(guò)步驟e中得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)紅葡萄酒樣品中4-EP、4-EG濃度。

通過(guò)下述方法驗(yàn)證上述一種同時(shí)檢測(cè)紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量的方法。

1.紅葡萄酒中4-EP和4-EG含量的精密度檢測(cè)：

精確稱取1mg純度為色譜純的對(duì)-甲酚標(biāo)準(zhǔn)品，用純度為色譜純的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存，作內(nèi)標(biāo)物使用。

分別精確稱取純度為色譜純的4-EP標(biāo)準(zhǔn)品1mg和純度為色譜純的4-EG標(biāo)準(zhǔn)品1mg，用純度為色譜純的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存。用純度為色譜純的乙醇稀釋，分別配制50μg/L、100μg/L、500μg/L、1000μg/L、2000μg/L和3000μg/L的4-EP標(biāo)準(zhǔn)品溶液；5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和1000μg/L的4-EG標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

在裝有磁力攪拌器的15mL頂空瓶中分別加入上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液10mL，分別加入上述內(nèi)標(biāo)物100μL和2.5g的NaCl。將頂空瓶置于磁力加熱攪拌裝置上，在50℃預(yù)先加熱平衡10min，調(diào)整磁力攪拌轉(zhuǎn)速為850rpm，插入萃取頭，在55℃下頂空固相微萃取45min。

其中，萃取頭為美國(guó)Supelco公司的50/30μm DVB/CAR/PDMS萃取頭。

萃取結(jié)束后，將萃取手柄插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口進(jìn)樣，解析5min。得到4-EP標(biāo)準(zhǔn)品、4-EG標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積。

以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為響應(yīng)值A(chǔ)，即

響應(yīng)值A(chǔ)＝標(biāo)準(zhǔn)品峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積。

根據(jù)響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度之間存在的線性關(guān)系，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

經(jīng)過(guò)檢測(cè)，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：

4-EP標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程為Y＝0.0001X+0.0084，線性相關(guān)系數(shù)R²＝0.9971。

4-EG標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程為Y＝0.0006X+0.0217，線性相關(guān)系數(shù)R²＝0.9946。

4-EP標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如圖1所示，4-EG標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如圖2所示，4-EP與4-EG標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖如圖3所示。使用本發(fā)明所提供的4-EP和4-EG含量的測(cè)定方法得到的4-EP和4-EG標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)R²＞0.99，表明本方法精密度高。

2.紅葡萄酒中4-EP和4-EG含量的回收率檢測(cè)：

取待測(cè)紅葡萄酒樣品分別進(jìn)行兩個(gè)濃度的加標(biāo)試驗(yàn)。

精確稱取純度為色譜純的對(duì)-甲酚標(biāo)準(zhǔn)品1mg，用純度為色譜純的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存，作內(nèi)標(biāo)物使用。

(1)4-EP和4-EG標(biāo)準(zhǔn)品的添加量為1.0mg/L和2.0mg/L。

在裝有磁力攪拌器的15mL頂空瓶中加入待測(cè)紅葡萄酒樣品10ml，加入上述內(nèi)標(biāo)物100μL和2.5g的NaCl，加入4-EP標(biāo)準(zhǔn)品1.0mg/L、4-EG標(biāo)準(zhǔn)品2.0mg/L。將頂空瓶置于磁力加熱攪拌裝置上，在50℃預(yù)先加熱平衡10min，調(diào)整磁力攪拌轉(zhuǎn)速為850rpm，插入萃取頭，在55℃下頂空固相微萃取45分鐘。萃取結(jié)束后，將萃取手柄插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口進(jìn)樣，解析5min，得到4-EP、4-EG和內(nèi)標(biāo)物的峰面積。

其中，萃取頭為美國(guó)Supelco公司的50/30μm DVB/CAR/PDMS萃取頭。

(2)4-EP和4-EG標(biāo)準(zhǔn)品的添加量為0.2mg/L、0.4mg/L。

在裝有磁力攪拌器的15mL頂空瓶中加入待測(cè)紅葡萄酒樣品10ml，加入上述內(nèi)標(biāo)物100μL和2.5g的NaCl，加入4-EP標(biāo)準(zhǔn)品0.2mg/L、4-EG標(biāo)準(zhǔn)品0.4mg/L。將頂空瓶置于磁力加熱攪拌裝置上，在50℃預(yù)先加熱平衡10min，調(diào)整磁力攪拌轉(zhuǎn)速為850rpm，插入萃取頭，在55℃下頂空固相微萃取45分鐘。萃取結(jié)束后，將萃取手柄插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口進(jìn)樣，解析5min，得到4-EP、4-EG和內(nèi)標(biāo)物的峰面積。

其中，萃取頭為美國(guó)Supelco公司的50/30μm DVB/CAR/PDMS萃取頭。

上述兩個(gè)加標(biāo)水平回收率見(jiàn)表1。

表1紅葡萄酒中4-EP和4-EG在兩個(gè)加標(biāo)水平的回收率(n＝5)

(注：n為平行試驗(yàn)個(gè)數(shù))

綜上所述，本專利所提供的紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量檢測(cè)方法回收率較高，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較低。

3.實(shí)際檢測(cè)：

采用上述經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的紅葡萄酒中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚含量檢測(cè)方法，對(duì)紅葡萄酒樣品進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)。

圖4為實(shí)際檢測(cè)中紅葡萄酒樣品中4-乙基苯酚與4-乙基愈創(chuàng)木酚以及內(nèi)標(biāo)物的氣相色譜圖。