本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及cd19陽性外泌體作為分子標(biāo)記在制備腫瘤診斷試劑盒中的應(yīng)用及試劑盒。

背景技術(shù)：

腫瘤的早期診斷和治療能顯著提高腫瘤患者的存活率。英國癌癥研究中心一項(xiàng)最新研究發(fā)現(xiàn)，如果能在早期得到診斷，癌癥患者的生存幾率會增加三倍。新研究中，英國癌癥研究中心研究人員對英國乳腺癌、宮頸癌、膀胱癌、腸癌、子宮癌、皮膚癌、卵巢癌和睪丸癌患者生存率情況展開了調(diào)查。這些癌癥占英國所有癌癥病例的40％以上。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大約一半的患者在癌癥1期(癌癥僅限于一個器官)和2期(癌癥擴(kuò)散至少臨近小部分組織)確診。另一半患者確診時為3期(癌癥已經(jīng)擴(kuò)散至腋窩淋巴結(jié)或胃部)和4期(癌癥已擴(kuò)到骨頭、肝臟、大腦、肺臟或其他器官)。最終分析結(jié)果顯示，在這8種常見癌癥中，如果能在癌癥1期(早期)確診，10年生存率能達(dá)到90％。相比之下，癌癥晚期(癌細(xì)胞擴(kuò)散到骨骼、大腦、肺臟或其他重要器官)才確診的患者，10年生存幾率僅為25％，即患者生存期僅為5年。另外，以上消化道癌為例，通過胃鏡加病理活檢分析以后，如果確診為早期，五年存活率可以高達(dá)80％-90％；但是如果它被發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)是晚期，五年存活率勉強(qiáng)能達(dá)到10％-20％。因此，開發(fā)癌癥早期診斷高靈敏度新型標(biāo)記物能夠顯著改善患者的預(yù)后。

目前臨床上常用的腫瘤診斷標(biāo)志物包括甲胎蛋白(afp)、癌胚抗原(cea)和糖類抗原(ca199、ca125和ca153)，僅能檢測到大約15-50％的任何階段的腫瘤，對于疾病早期的檢測則降至大約2-11％。而事實(shí)上，患者可能患有嚴(yán)重的需要立即注意的癌癥。因此，迫切需要開發(fā)出一種具有高靈敏度的癌癥診斷方法。

外泌體(exosome，以下簡寫為exo)是各種活細(xì)胞分泌的納米級別的小囊泡，含有豐富的蛋白質(zhì)、核酸和脂類成分，可廣泛存在于人體的血液、唾液、母乳及尿液中(soungyh,fords,zhangvandchungj.exosomesincancerdiagnostics.cancers.2017；9(1).)。有研究報(bào)道，外泌體中的edil3有希望成為早期乳腺癌的診斷標(biāo)志物。細(xì)胞表面的蛋白聚糖glypican-1存在于胰腺癌病人血清來源的外泌體，對早期胰腺癌的診斷具有絕對的特異性及靈敏度(melosa,lueckelb,kahlertc,fernandezaf,gammonst,kayej,lebleuvs,mittendorfea,weitzj,rahbarin,reissfelderc,pilarskyc,fragamf,piwnica-wormsdandkallurir.glypican-1identifiescancerexosomesanddetectsearlypancreaticcancer.nature.2015；523(7559):177-182.)。微小rnalet-7b和mir-18a在多發(fā)性骨髓瘤病人血清來源的外泌體中明顯升高，可作為多發(fā)性骨髓瘤的診斷及預(yù)后的評價指標(biāo)(maniers,liucj,avet-loiseauh,parkj,shij,campigottof,salemkz,huynhd,glaveysv,rivottob,saccoa,roccaroam,bouyssouj,minvielles,moreaup,facont,etal.prognosticroleofcirculatingexosomalmirnasinmultiplemyeloma.blood.2017.)?？梢?，血清來源的外泌體在腫瘤的早期診斷中具有很好的前景。此外，血清來源的外泌體具有無創(chuàng)，易獲取，檢測方便，性價比高等特征，在未來腫瘤的早期診斷試劑的開發(fā)中，必將成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。

血清中的外泌體可來源于機(jī)體的各種細(xì)胞，包括各器官的上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等。雖然在腫瘤病人血清中，腫瘤來源的外泌體的比重會明顯上升，但其它細(xì)胞尤其是淋巴細(xì)胞來源的外泌體在腫瘤病人血清中是否會上升尚不清楚。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了人血清中cd19陽性的外泌體含量在腫瘤病人中顯著升高，且在腫瘤不同分期時含量沒有顯著變化，所以該指標(biāo)能夠作為腫瘤診斷的標(biāo)志物，特別是對于診斷難度較大的早期腫瘤具有良好的診斷效果。

本發(fā)明搜集了健康人以及腫瘤病人血清(胃癌、腸癌、肺癌和乳腺癌)，并通過elisa法對其中cd19⁺-exo含量進(jìn)行檢測。對比健康人與腫瘤病人血清中cd19⁺-exo的含量，獲得最佳的cut-off值，評價血清中cd19⁺-exo的含量對腫瘤診斷的靈敏度與特異性；對比不同分期腫瘤病人血清中cd19⁺-exo的含量是否具有差異性，評價該指標(biāo)是否具有腫瘤早期診斷的價值；與目前臨床上常用的腫瘤診斷標(biāo)志物cea進(jìn)行對比，評價血清中cd19⁺-exo的含量對腫瘤的診斷是否具有高的靈敏度與特異性。

發(fā)現(xiàn)了腫瘤病人血清中cd19⁺-exo的含量要明顯高于健康人。而且，不同分期腫瘤病人血清中cd19⁺-exo的含量沒有顯著性差異，提示其在腫瘤早期診斷中的價值。與cea相比，通過檢測血清中cd19⁺-exo的含量對腫瘤的診斷，在靈敏度與特異性方面均顯著優(yōu)于cea。對已確診為腫瘤患者的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)中，通過檢測血清中cd19⁺-exo的含量對腫瘤的檢出率要顯著高于cea。以上結(jié)果表明，檢測人體血清中cd19⁺-exo的含量在腫瘤早期診斷中的應(yīng)用前景。此外，在消化道腫瘤胃癌及腸癌的診斷中，通過檢測血清中cd19⁺-exo的含量來診斷腫瘤的靈敏度與特異性均可達(dá)到80％左右。在我國常規(guī)體檢項(xiàng)目中，往往不包括胃、腸鏡的檢查。因此，通過檢查人體血清中cd19⁺-exo的含量，如發(fā)現(xiàn)該指標(biāo)有顯著升高的個體，可建議進(jìn)行胃、腸鏡的檢查，從而增加早期胃、腸癌的檢出率。

本發(fā)明提供了cd19陽性外泌體作為分子標(biāo)記在制備腫瘤診斷試劑盒中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述腫瘤為胃癌、腸癌、肺癌或乳腺癌。

優(yōu)選的，所述腫瘤為早期腫瘤。

本發(fā)明還提供了一種基于檢測血清中cd19陽性外泌體含量的腫瘤診斷試劑盒，包括用于捕獲外泌體的包被抗體、抗cd19抗體、pbst緩沖液、封閉液、avidin-hrp、二甲基聯(lián)苯胺以及反應(yīng)終止液。使用elisa法檢測：先通過包被抗體包被96孔酶標(biāo)版；然后使用pbst緩沖液(含吐溫的pbs緩沖液)洗板；用封閉液進(jìn)行封閉，封閉液常用含10％胎牛血清的pbs緩沖液；再次用pbst緩沖液洗板后，加入待檢測的血清，孵育；用pbst緩沖液洗板后，加入抗cd19抗體孵育；用pbst緩沖液洗板后，加入avidin-hrp(親和素標(biāo)記的辣根過氧化物酶)孵育；用pbst緩沖液洗板后，加入底物二甲基聯(lián)苯胺進(jìn)行顯色反應(yīng)；加入反應(yīng)終止液終止顯色反應(yīng)，反應(yīng)終止液可以選擇常用的1n的h2so4溶液；檢測450nm處吸光度(od)值。

優(yōu)選的，用于捕獲外泌體的包被抗體為抗rab5b抗體。

優(yōu)選的，所述腫瘤診斷試劑盒還包括濃度已知的cd19陽性外泌體標(biāo)準(zhǔn)品。

更優(yōu)選的，所述外泌體標(biāo)準(zhǔn)品通過培養(yǎng)b淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞株raji細(xì)胞獲得。raji細(xì)胞分泌的外泌體表面cd19表達(dá)水平較高，可以作為檢測血清中cd19陽性外泌體數(shù)量時的陽性對照，并用于獲得cd19陽性的外泌體含量與吸光度(od)值相互關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

優(yōu)選的，所述腫瘤為胃癌、腸癌、肺癌或乳腺癌。

優(yōu)選的，所述腫瘤為早期腫瘤。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)腫瘤病人血清中cd19⁺-exo的含量要明顯高于健康人，且不同分期腫瘤病人血清中cd19⁺-exo的含量沒有顯著性差異，提示其在腫瘤早期診斷中的價值，血清中cd19陽性外泌體含量可用于開發(fā)腫瘤診斷的試劑盒?；谘逯衏d19陽性外泌體含量檢測的腫瘤診斷試劑盒，在腫瘤早期診斷中具有良好的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為流式細(xì)胞儀檢測raji細(xì)胞分泌的外泌體表面cd19表達(dá)水平結(jié)果圖。

圖2為raji-exo的電鏡檢測圖。

圖3為raji細(xì)胞及raji-exo的westernblot檢測結(jié)果圖。

圖4為cd19⁺-exo含量與od值相互關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

圖5為乳腺癌病人和健康人血清中cd19⁺-exo的含量在不同腫瘤分期病人中的比較結(jié)果圖，其中hc表示健康人血清(下同)，bc表示乳腺癌病人血清(下同)，***表示兩者在p<0.001具有顯著性差異(下同)，ns表示兩者沒有顯著性差異(下同)。

圖6為乳腺癌病人和健康人血清中cea水平在不同腫瘤分期病人中的比較結(jié)果圖，其中*表示兩者在p<0.05具有顯著性差異(下同)。

圖7為肺癌病人和健康人血清中cd19⁺-exo的含量在不同腫瘤分期病人中的比較結(jié)果圖，其中l(wèi)c表示肺癌病人血清(下同)。

圖8為肺癌病人和健康人血清中cea水平在不同腫瘤分期病人中的比較結(jié)果圖。

圖9為胃癌病人和健康人血清中cd19⁺-exo的含量在不同腫瘤分期病人中的比較結(jié)果圖，其中g(shù)c表示胃癌病人血清(下同)。

圖10為胃癌病人和健康人血清中cea水平在不同腫瘤分期病人中的比較結(jié)果圖。

圖11為腸癌病人和健康人血清中cd19⁺-exo的含量在不同腫瘤分期病人中的比較結(jié)果圖，其中ic表示腸癌病人血清(下同)。

圖12為腸癌病人和健康人血清中cea水平在不同腫瘤分期病人中的比較結(jié)果圖，其中**表示兩者在p<0.01具有顯著性差異。

圖13為乳腺癌病人血清中cd19⁺-exo含量的受試者工作曲線。

圖14為乳腺癌病人血清中cea水平的受試者工作曲線。

圖15為肺癌病人血清中cd19⁺-exo含量的受試者工作曲線。

圖16為肺癌病人血清中cea水平的受試者工作曲線。

圖17為胃癌病人血清中cd19⁺-exo含量的受試者工作曲線。

圖18為胃癌病人血清中cea水平的受試者工作曲線。

圖19為腸癌病人血清中cd19⁺-exo含量的受試者工作曲線。

圖20為腸癌病人血清中cea水平的受試者工作曲線。

圖21為胃炎病人血清中cd19⁺-exo的含量檢測結(jié)果圖，其中g(shù)p表示胃炎病人血清。

圖22為炎癥性腸病病人血清中cd19⁺-exo的含量檢測結(jié)果圖，其中ep表示腸炎病人血清。

圖23為實(shí)施例9中胃癌病人血清中cd19⁺-exo的含量檢測結(jié)果圖。

圖24為實(shí)施例9中腸癌病人血清中cd19⁺-exo的含量檢測結(jié)果圖。

圖25為實(shí)施例9中cd19⁺-exo與cea分別在胃癌和腸癌中的診斷率結(jié)果比較圖。

具體實(shí)施方案

正常人及腫瘤病人血清樣品來源于浙江省腫瘤醫(yī)院；胃炎及炎癥性腸病病人血清樣品來源于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二人民醫(yī)院。

實(shí)施例1

流式細(xì)胞儀檢測b淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞株raji細(xì)胞分泌的外泌體表面cd19表達(dá)水平，其中陰性對照為抗cd19同型對照抗體染色組，結(jié)果如圖1所示，raji細(xì)胞分泌的外泌體表面cd19表達(dá)水平較高，可以作為檢測血清中cd19陽性外泌體數(shù)量時的陽性對照，并用于獲得cd19陽性的外泌體含量與吸光度(od)值相互關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

b淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞株raji細(xì)胞來源外泌體(raji-exo)的提取和鑒定。提取方法如下：

raji細(xì)胞培養(yǎng)上清，300g離心10分鐘；收集上清，1200g離心20分鐘；收集上清，10000g離心20分鐘；收集上清，過0.22μm濾器，100000g離心60分鐘；收集沉淀，沉淀用30mlpbs緩沖液重懸，100000g離心60分鐘，沉淀即為外泌體。將外泌體重懸于200μlpbs緩沖液，經(jīng)bca蛋白濃度測定試劑盒(thermofisher，貨號23252)確定raji-exo的濃度后，分裝保存于-20度備用。

電鏡對raji-exo的鑒定結(jié)果顯示，制備的外泌體均為直徑在100nm左右的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)(圖2)。westernblot檢測結(jié)果顯示，raji-exo含有外泌體特征蛋白cd63、tsg101和rab5b，而不含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白grp94(圖3)，表明其內(nèi)體來源。

實(shí)施例2

使用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法(elisa)檢測血清中cd19陽性的外泌體(cd19⁺-exo)含量。具體步驟如下：

(1)以elisa包被緩沖液為介質(zhì)，抗rab5b的抗體(santacruz，貨號sc-373725)作為包被抗體，抗體終濃度是4μg/ml，4℃包被96孔酶標(biāo)板過夜；

(2)含0.05％吐溫的pbs緩沖液(pbst)洗板4遍后，用含10％胎牛血清的pbs緩沖液，室溫封閉1小時；

(3)pbst洗板4次后，加入100μl待檢血清，37℃孵育過夜；

(4)pbst洗板4次后，以含10％胎牛血清的pbs緩沖液為介質(zhì)，抗cd19的抗體(ebioscience，貨號13-0199-82)為檢測抗體，終濃度為4μg/ml，37℃孵育1小時；

(5)pbst洗板4次后，加入100μl的avidin-hrp(ebioscience，貨號18-4100)室溫孵育1小時；

(6)pbst洗板6次后，加入0.3mg/ml的二甲基聯(lián)苯胺底物室溫反應(yīng)15分鐘；

(7)加入50μl1n的h2so4終止反應(yīng)，450nm測量吸光度(od)值；

(8)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待檢測人血清樣品中相對的cd19⁺-exo含量。

根據(jù)elisa的檢測原理，最終測得的od值實(shí)際是由外泌體中cd19分子的絕對數(shù)量決定，而cd19分子絕對數(shù)量與外泌體的質(zhì)量成正比。如果1μgraji-exo與nμg血清cd19⁺-exo均含有x個cd19分子，那么它們將對應(yīng)相同的od值。根據(jù)按上述步驟(1)～(7)方法測得某一血清樣品od值后，通過raji-exo標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的外泌體質(zhì)量，需要乘以系數(shù)n，才為實(shí)際血清中cd19⁺-exo的質(zhì)量。在n系數(shù)未知的情況下，所測得的血清中cd19⁺-exo的質(zhì)量均為相對質(zhì)量。

標(biāo)準(zhǔn)曲線確定：將已知濃度的raji-exo按濃度梯度稀釋，然后按上述步驟(1)～(7)方法檢測各濃度下的od值，計(jì)算獲得cd19陽性的外泌體含量與吸光度(od)值相互關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每次實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在此，列舉了某次實(shí)驗(yàn)為制作標(biāo)準(zhǔn)曲線所選取raji-exo的濃度及對應(yīng)的od值。檢測了0、3.75、7.5、15、30μg的raji-exo對應(yīng)的od值分別為0.065、0.258、0.465、0.968、1.831，raji-exo的質(zhì)量與od值之間的線性方程為y＝16.748x-0.7651，r²＝0.999，其中x為od值，y為raji-exo的質(zhì)量(μg)(圖4)。

實(shí)施例3

使用實(shí)施例2所述方法檢測乳腺癌病人中cd19⁺-exo的含量，以健康人血清作為對照，并同時檢測這些樣品中的cea含量。cea含量由浙江省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科利用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法(癌胚抗原測定試劑盒，雅培，貨號7k68-32)測定，下同。

檢測結(jié)果如圖5和圖6所示，健康人血清樣品(hc)共86例，乳腺癌病人血清樣品(bc)共80例，其中處于1期的為24例，處于2期的為33例，處于3期的為23例，結(jié)果顯示乳腺癌病人血清樣品中cd19⁺-exo的含量要顯著高于健康人，乳腺癌病人血清樣品中cea的含量(其中有4例病人血清的cea數(shù)據(jù)丟失)也顯著高于健康人；對不同分期的乳腺癌病人血清中的cd19⁺-exo含量與cea水平進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)cd19⁺-exo含量在不同分期的乳腺癌病人血清中沒有明顯差異，而cea水平在晚期乳腺癌病人(2期和3期)血清中要顯著高于早期乳腺癌病人。

實(shí)施例4

使用實(shí)施例2所述方法檢測肺癌病人中cd19⁺-exo的含量，以健康人血清作為對照，并同時檢測這些樣品中的cea含量。

檢測結(jié)果如圖7和圖8所示，健康人血清樣品(hc)共86例，肺癌病人血清樣品(lc)共45例，其中處于1期的為27例，處于2期的為9例，處于3期的為9例，結(jié)果顯示肺癌病人血清樣品中cd19⁺-exo的含量要顯著高于健康人，肺癌病人血清樣品中cea的含量也顯著高于健康人；對不同分期的肺癌病人血清中的cd19⁺-exo含量與cea水平進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)cd19⁺-exo含量和cea水平在不同分期的肺癌病人血清中均沒有顯著性差異。

實(shí)施例5

使用實(shí)施例2所述方法檢測胃癌病人中cd19⁺-exo的含量，以健康人血清作為對照，并同時檢測這些樣品中的cea含量。

檢測結(jié)果如圖9和圖10所示，健康人血清樣品(hc)共86例，胃癌病人血清樣品(gc)共81例，其中處于1期的為20例，處于2期的為30例，處于3期的為31例，結(jié)果顯示胃癌病人血清樣品中cd19⁺-exo的含量要顯著高于健康人，胃癌病人血清樣品中cea的含量也顯著高于健康人；對不同分期的胃癌病人血清中的cd19⁺-exo含量與cea水平進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)cd19⁺-exo含量和cea水平均在不同分期的胃癌病人血清中沒有明顯差異。

實(shí)施例6

使用實(shí)施例2所述方法檢測腸癌病人中cd19⁺-exo的含量，以健康人血清作為對照，并同時檢測這些樣品中的cea含量。

檢測結(jié)果如圖11和圖12所示，健康人血清樣品(hc)共86例，腸癌病人血清樣品(bc)共99例，其中處于1期的為32例，處于2期的為31例，處于3期的為36例，結(jié)果顯示腸癌病人血清樣品中cd19⁺-exo的含量要顯著高于健康人，腸癌病人血清樣品中cea的含量也顯著高于健康人；對不同分期的腸癌病人血清中的cd19⁺-exo含量與cea水平進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)cd19⁺-exo含量在不同分期的腸癌病人血清中沒有明顯差異，而cea水平在晚期(2期和3期)腸癌病人血清中要顯著高于1期腸癌病人。

實(shí)施例7

敏感度(sensitivity)，是指篩檢方法能將實(shí)際有病的人正確地判定為患者的比例。

特異性(specificity)，是指篩檢方法能將實(shí)際無病的人正確地判定為非患者的比例。

約登指數(shù)(youdenindex)：也稱正確指數(shù)，是評價篩查試驗(yàn)真實(shí)性的方法，假設(shè)其假陰性(漏診率)和假陽性(誤診率)的危害性同等意義時，即可應(yīng)用約登指數(shù)。約登指數(shù)是敏感度與特異性之和減去1。表示篩檢方法發(fā)現(xiàn)真正的患者與非患者的總能力。指數(shù)越大說明篩查實(shí)驗(yàn)的效果越好，真實(shí)性越大。

受試者工作曲線(receiveroperatingcharacteristic，roc)，用于二分類判別效果的分析與評價。基本原理是：通過判斷點(diǎn)(cutoffpoint/cutoffvalue)的移動，獲得多對敏感度(sensitivity)和誤判率(1-specificity(特異性))，以敏感度為縱軸，以誤判率為橫軸，連接各點(diǎn)繪制曲線，然后計(jì)算曲線下面積(areaundercurve，auc)，面積越大，判斷價值越高。

乳腺癌(實(shí)施例3)、肺癌(實(shí)施例4)、胃癌(實(shí)施例5)、腸癌(實(shí)施例6)的受試者工作曲線分別如圖13(乳腺癌、cd19⁺-exo含量)、圖14(乳腺癌、cea水平)、圖15(肺癌、cd19⁺-exo含量)、圖16(肺癌、cea水平)、圖17(胃癌、cd19⁺-exo含量)、圖18(胃癌、cea水平)、圖19(腸癌、cd19⁺-exo含量)、圖20(腸癌、cea水平)所示。

人血清中cd19⁺-exo的含量和cea水平在乳腺癌診斷中靈敏度及特異性的比較結(jié)果如表1所示，其中的ci是confidenceinterval的縮寫，指置信區(qū)間。取約登指數(shù)最大的點(diǎn)作為最佳cut-off值。乳腺癌、肺癌、腸癌和肺癌最佳cut-off值分別為64.21、64.44、64.41和64.02ng/μl；cea的cut-off值的選取最接近于臨床診斷上所采用的臨界點(diǎn)5ng/ml時候的cut-off值(根據(jù)約登指數(shù)算出來的最佳cut-off值在3-4之間，而cea臨床的域值是5，所以這里采用了5為cut-off值，提高cut-off值有可能使檢測的特異性達(dá)到100％，但檢測的靈敏度則會大大下降)。

可見，血清中cd19⁺-exo的含量對腫瘤診斷的敏感度要顯著高于血清中cea的水平對腫瘤的診斷。

表1

實(shí)施例8

血液中cea水平對腫瘤診斷的特異性較差。因?yàn)槌┌Y病人外，吸煙、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特異性結(jié)腸炎人群血清cea水平也會升高。為評價血清中cd19⁺-exo對腫瘤診斷的特異性，收集并檢測了胃炎(51例)和炎癥性腸病(61例)病人血清中cd19⁺-exo的含量，并分別與健康人血清中cd19⁺-exo的含量進(jìn)行了對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無論是胃炎(圖21)還是炎癥性腸病(圖22)病人血清中cd19⁺-exo的含量與健康人均無明顯差異。

實(shí)施例9

為進(jìn)一步明確血清中cd19⁺-exo對腫瘤診斷的價值，分別收集了150例已經(jīng)確診為胃癌和腸癌的病人血清并檢測了其中cd19⁺-exo的含量，以健康人血清作為對照(圖23、圖24)。

在cut-off值定義在64.00ng/μl的時候，血清中cd19⁺-exo對胃癌和腸癌的診斷率分別為78.67％和83.33％；同時，通過cea對這些樣品進(jìn)行腫瘤的診斷，發(fā)現(xiàn)cea的cut-off值定義在5ng/ml的時候?qū)ξ赴┖湍c癌的診斷率分別僅17.3％和37.3％(圖25)。該結(jié)果表明，血清中cd19⁺-exo對胃癌和腸癌的診斷率比臨床上常用的的腫瘤標(biāo)志物cea具有明顯的優(yōu)勢。