本發(fā)明涉及紫外比色傳感器、電化學(xué)傳感器、智能手機傳感器及其生物應(yīng)用，尤其是涉及基于cu2+對dnazyme的剪切機理構(gòu)建的生物傳感方法，并應(yīng)用于銅離子(cu2+)、輔酶a(coa)、組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶(hat?p300)分析檢測，最終實現(xiàn)腫瘤細胞中乙酰化生物應(yīng)用，屬于分析化學(xué)中的化學(xué)生物傳感領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、胃癌危害人類健康，早期發(fā)現(xiàn)、診斷及治療是一種有效預(yù)癌和增加治愈機會的有效手段。近年來，胃癌的防治研究工作取得了較大的進展，病因研究、早期及中西醫(yī)結(jié)合治療均獲一定成效，提高胃癌早期診斷率，將能大大提高治療效果和5年生存率。有研究表明，胃癌細胞中的組蛋白乙酰化修飾與癌癥發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)。組蛋白修飾是對組蛋白的共價翻譯后修飾(ptm)，在表觀遺傳調(diào)控中至關(guān)重要。由于組蛋白修飾，轉(zhuǎn)錄激活/失活、染色體包裝和dna損傷/修復(fù)等多種生物事件可以可控地進行。特別是，賴氨酸殘基的可逆乙?；墙M蛋白修飾的主要機制之一。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(hats)的拮抗催化活性準確地介導(dǎo)了組蛋白賴氨酸乙?；?。通過乙?；?，hat減少了組蛋白與其包裹dna之間的靜電相互作用，為調(diào)節(jié)蛋白的可及性產(chǎn)生了一個開放的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。hat的異?；钚裕T導(dǎo)組蛋白乙?；母蓴_，已被證實與許多疾病的病因有關(guān)，包括癌癥、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、慢性炎癥和hiv感染。迄今為止，hat已成為藥物靶點，hat靶向抑制劑也處于廣泛的研究中。為了加快這一研究，迫切需要開發(fā)方便的hat活性測定方法，這對藥物開發(fā)和臨床診斷的藥物研究具有重要意義，也是更好地理解表觀遺傳學(xué)相關(guān)研究的必要條件。目前，針對hat活性的測定已經(jīng)開發(fā)了一系列方法，包括基于量子點的熒光共振能量轉(zhuǎn)移生物傳感器，時間分辨發(fā)光生物傳感器和化學(xué)發(fā)光生物傳感器，盡管這些檢測方法有較高的靈敏度和精確度，但仍有一定局限性，它們的準確性可能會受到供體和受體之間的距離和角度的影響，這會影響fret過程的效率，ph變化的影響，以及化合物對hat水解的抑制。最重要的是目前大部分的分析方法都集中在體外hat分析檢測，因此，有必要開發(fā)適用于胃癌細胞中hat分析檢測的新方法。

2、組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶分析檢測存在一個極大的局限性：無法通過拷貝/復(fù)制實現(xiàn)信號的放大，但在生物體中豐度又極低，這點與dna傳感極不相同。本專利為了解決這個問題，引入了dna領(lǐng)域中的dnazyme。dnazyme是利用體外篩選技術(shù)獲得的一種具有催化活性和結(jié)構(gòu)識別能力的單鏈dna片段，可以催化dna或rna的切割或連接。dnazymes具有以下優(yōu)勢：①不會引起免疫系統(tǒng)響應(yīng)；②更加經(jīng)濟，更好的化學(xué)穩(wěn)定及熱穩(wěn)定性，且不易受污染；③可以根據(jù)特定的需要體外篩選出不同的dnazyme來滿足需求；④dnazymes作為dna分子具有高度可編程性，容易根據(jù)需要進行修改和標記。基于以上優(yōu)點，dnazymes更加適合實時檢測和現(xiàn)場分析，只是在對dna或rna序列進行催化的過程中需要金屬離子的介入。憑借這些明顯的優(yōu)勢，dnazyme成為分析的理想信號放大器，對目標物識別表現(xiàn)出較好的選擇性和靈敏度。目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)dnazyme用于組蛋白翻譯后乙?；揎椀难芯抗ぷ?。

3、本發(fā)明構(gòu)建了基于cu-dnazyme的紫外比色、電化學(xué)及智能手機傳感方法，并將其應(yīng)用在cu2+、coa、hat?p300檢測中。該方法主要設(shè)計了一種cu2+依賴的d-dna酶和h-dna酶組成的變構(gòu)雙dna酶單分子探針。該探針同時使用兩種催化功能：①依賴于cu2+對dnazyme的剪切作用來檢測cu2+(結(jié)構(gòu)域iii)；②模擬hrp(辣根過氧化物酶)活性催化tmb和h2o2反應(yīng)產(chǎn)生信號輸出(結(jié)構(gòu)域ii)。結(jié)構(gòu)域i是依賴于cu2+的dnazyme的底物，在沒有cu2+離子的情況下，探針以三鏈形式穩(wěn)定存在。在cu2+離子存在的情況下，探針在鳥嘌呤堿基處發(fā)生不可逆的自裂解。結(jié)構(gòu)域i釋放，結(jié)構(gòu)域ii形成g-四鏈體，可以結(jié)合血紅素hemin，形成具有hrp活性的模擬酶，可以催化h2o2將無色的tmb氧化成藍色的ox-tmb，實現(xiàn)紫外比色檢測；而基于不同濃度目標物下溶液顏色深淺變化與rgb色度空間的關(guān)系，開發(fā)了一種基于智能手機的簡單、方便、實時的分析方法；此外，結(jié)合帶有游離尾巴的g-四聯(lián)體可以通過π-π共軛吸附作用吸附在氧化石墨烯(go)修飾電極表面，從而實現(xiàn)電化學(xué)檢測。而coa中存在與cu2+結(jié)合的活性位點，coa-cu(ii)復(fù)合物的形成可以捆綁cu2+，從而減少溶液中游離的cu2+，間接實現(xiàn)coa的檢測；而hat?p300可以將ac-coa上的乙?；D(zhuǎn)移到底物肽的賴氨酸殘基上，從而生成coa分子，因此構(gòu)建了檢測hat?p300活性的方法，并最終應(yīng)用于胃癌細胞中hat?p300的分析檢測。目前為止，未見基于cu-dnazyme構(gòu)建的紫外比色、電化學(xué)、智能手機方法用于cu2+、coa、hatp300檢測的報道，尤其是這種多模式方法可以用于胃癌細胞中hat分析，適用于現(xiàn)代智慧醫(yī)療的發(fā)展，兼具經(jīng)濟效益和社會效益。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單、快速、靈敏度高、成本低的基于cu-dnazyme的多模式智能傳感器制備方法及其在胃癌細胞中hat?p300生物檢測中的應(yīng)用研究。

2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種多模式智能傳感器制備方法及其在胃癌細胞中的乙?；飸?yīng)用，具體步驟如下：

3、一.dnazyme預(yù)處理

4、將購買的dna干粉置于離心機中用5000rmp的轉(zhuǎn)速離心15min，然后根據(jù)dna合成報告用超純水將其稀釋到1μm。取200μl?1μm?dnazyme溶液與200μl?mes(10mm，ph?7，含0.1mkcl)緩沖液混合，然后在95℃下水浴加熱5min，自然冷卻至室溫后放置30min以上，通過變構(gòu)形成穩(wěn)定的雙鏈。

5、其中dna序列如下：

6、

7、二.傳感器的制備

8、1.紫外比色傳感器的制備

9、(1)基于cu-dnazyme構(gòu)建cu2+紫外比色傳感器

10、在96孔酶標板中依次加入30～100μl?hac-naac緩沖溶液(0.1m，ph＝4.0，含0.1mkcl)、0～15μl?h2o、2～20μl?0.2～10μm?cu-dnazyme以及2～20μl?0.5～20μm?cu2+，震蕩混合后于室溫下孵育15～30min；之后加入1～10μl?0.5～10μm?hemin，放置30～60min后，加入2～20μl?5～30mm?tmb和2～20μl?20～100mm?h2o2來引發(fā)催化氧化tmb。室溫孵育30～60min后，用手機在固定高度下拍照，然后用酶標儀測其紫外光譜。

11、(2)基于cu-dnazyme構(gòu)建coa紫外比色傳感器

12、①coa-cu(ii)復(fù)合物的形成：

13、在96孔酶標板中依次加入10～50μl?mes緩沖液(10mm，ph＝7.0)、1～20μl?2～20μm?cu2+、1～20μl?2～20μm?coa，充分震蕩混合后于25～35℃恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)10～30min，以形成coa-cu(ii)復(fù)合物。

14、②將30～100μl?hac-naac緩沖溶液(0.1m，ph＝4.0，含0.1m?kcl)、0～15μl?h2o、2～20μl?0.2～10μm?cu-dnazyme加入上述coa-cu(ii)復(fù)合物中，充分混合后于室溫孵育15～30min，之后加入1～10μl?0.5～10μm?hemin，放置30～60min，加入2～20μl?5～30mm?tmb和2～20μl?20～100mm?h2o2來引發(fā)催化氧化tmb。室溫孵育30～60min，后用手機在固定高度下拍照，然后用酶標儀測其紫外光譜。

15、(3)基于cu-dnazyme構(gòu)建hat?p300紫外比色傳感器

16、①hat?p300催化反應(yīng)：

17、在96孔酶標板中依次加入10～50μl?mes緩沖液(10mm，ph＝7.0)、1～10μl?5～20μm底物肽、1～10μl?10～50μm?ac-coa及1～20μl?10～200ng/ml?hat?p300，充分混合后于25～35℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育80～120min。

18、②coa-cu(ii)復(fù)合物的形成：

19、取2～20μl?0.5～20μm?cu2+，加入上述hat反應(yīng)液中，于25～35℃恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)10～30min。

20、③將30～100μl?hac-naac緩沖溶液(0.1m，ph＝4.0，含0.1m?kcl)、2～20μl?0.2～10μm?cu-dnazyme加入上述coa-cu(ii)復(fù)合物中，充分混合后于室溫孵育15～30min，之后加入1～10μl?0.5～10μm?hemin，放置30～60min后，加入2～20μl?5～30mm?tmb和2～20μl20～100mm?h2o2來引發(fā)催化氧化tmb，室溫孵育30～60min，用手機在固定高度下拍照，然后用酶標儀測其紫外光譜。

21、2.電化學(xué)生物傳感器的制備

22、(1)將玻碳電極(gce，直徑為3mm)在麂皮上依次用粒徑0.3μm、0.05μm的三氧化二鋁粉末拋光3～10min，拋光后將電極置于超聲清洗器中依次用超純水和乙醇超聲清洗2遍，每次2～10min，清洗完畢后將電極保存在乙醇溶液中，記為電極a。

23、(2)將石墨烯分散在hac-naac(0.1m，ph?4.0)緩沖溶液中，控制濃度為0.5～5mg·ml-1，超聲分散1～3h。將gce電極用n2吹干，然后立即置于分散的石墨烯中，通過循環(huán)伏安法在-1.5v到+0.5v的電位范圍內(nèi)以0.01v·s-1的掃速掃描5～10圈，后用醋酸緩沖液沖洗電極，此go修飾電極用于下一步的檢測實驗，記為電極b。

24、(3)基于cu-dnazyme構(gòu)建cu2+電化學(xué)傳感器

25、在30～100μl?hac-naac(0.1m，ph＝4.0，含0.1m?kcl)中加入0～15μl?h2o、2～20μl?0.2～10μm?dnazyme溶液、2～20μl?0.5～20μm?cu2+溶液，震蕩混合，在室溫下孵育15～30min。然后加入1～10μl?0.5～10μm?hemin，孵育30～60min。之后將go修飾電極浸入該溶液中，孵育30～60min。后用醋酸緩沖液(100mm，ph＝4.0，含0.1m?kcl)沖洗電極，記為電極c。

26、使用微分脈沖伏安法(dpv)在含有0.4～20mm?h2o2和0.1～6mm?tmb的hac-naac(100mm，ph＝4.0，含0.1m?kcl)溶液中測量tmb的電流信號。參數(shù)設(shè)置如下：起始電壓為0v，終止電壓為+0.7v，振幅為+50mv，脈沖持續(xù)時間為0.2s。

27、(4)基于cu-dnazyme構(gòu)建coa電化學(xué)傳感器

28、①在10～50μl?mes緩沖液(10mm，ph＝7.0)、依次加入2～20μl?0.5～20μm?cu2+、1～20μl?2～20μm?coa，充分震蕩混合后于25～35℃恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)10～30min，以形成coa-cu(ii)復(fù)合物。

29、②將30～100μl?hac-naac緩沖溶液(0.1m，ph＝4.0，含0.1m?kcl)、2～20μl?0.2～10μm?cu-dnazyme加入上述coa-cu(ii)復(fù)合物中，充分混合后于室溫孵育15～30min；然后加入1～10μl?0.5～10μm?hemin，孵育30～60min。之后將go修飾電極浸入該溶液中，孵育30～60min。后用醋酸緩沖液(100mm，ph＝4.0，含0.1m?kcl)沖洗電極，記為電極d。

30、使用微分脈沖伏安法(dpv)在含有0.4～20mm?h2o2和0.1～6mm?tmb的hac-naac(100mm，ph＝4.0，含0.1m?kcl)溶液中測量tmb的電流信號。參數(shù)設(shè)置如下：起始電壓為0v，終止電壓為+0.7v，振幅為+50mv，脈沖持續(xù)時間為0.2s。

31、(5)基于cu-dnazyme構(gòu)建hat?p300電化學(xué)傳感器

32、①hat?p300催化反應(yīng)：

33、在10～50μl?mes緩沖液(10mm，ph＝7.0)、1～10μl?5～20μm底物肽、1～10μl10～50μm?ac-coa及1～20μl?10～200ng/ml?hat?p300，充分混合后于25～35℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育80～120min。

34、②coa-cu(ii)復(fù)合物的形成：

35、取2～20μl?0.5～20μm?cu2+，加入上述hat反應(yīng)液中，于25～35℃恒溫培養(yǎng)箱中10～30min。

36、③將30～100μl?hac-naac緩沖溶液(0.1m，ph＝4.0，含0.1m?kcl)、2～20μl?0.2～10μm?cu-dnazyme加入上述coa-cu(ii)復(fù)合物中，充分混合后于室溫孵育15～30min；然后加入1～10μl?0.5～10μm?hemin，孵育30～60min，之后將go修飾電極浸入該溶液中，孵育30～60min，后用醋酸緩沖液沖洗電極，記為電極e。

37、使用微分脈沖伏安法(dpv)在含有0.4～20mm?h2o2和0.1～6mm?tmb的hac-naac(100mm，ph＝4.0，含0.1m?kcl)溶液中測量tmb的電流信號。參數(shù)設(shè)置如下：起始電壓為0v，終止電壓為+0.7v，振幅為+50mv，脈沖持續(xù)時間為0.2s。

38、三.傳感器應(yīng)用

39、1.紫外比色傳感器應(yīng)用：cu2+、coa和hat?p300的分析檢測

40、(1)基于以上步驟二-1-(1)，通過改變步驟二-1-(1)中cu2+濃度(終濃度：0～10μm)，其它步驟不變，測量500～800nm波長范圍內(nèi)的紫外光譜，以652nm處的吸光度建立cu2+標準曲線，可實現(xiàn)對不同濃度cu2+的紫外檢測；另外，通過比色圖片可實現(xiàn)不同濃度cu2+的可視化檢測。

41、(2)基于以上步驟二-1-(2)，通過改變步驟二-1-(2)中coa濃度(終濃度：0～10μm)，其它步驟不變，測量500～800nm波長范圍內(nèi)的紫外光譜，以652nm處的吸光度建立coa標準曲線，可實現(xiàn)對不同濃度coa的紫外檢測；另外，通過比色圖片可實現(xiàn)不同濃度coa的可視化檢測。

42、(3)基于以上步驟二-1-(3)，通過改變步驟二-1-(3)中hat濃度(終濃度：0～20ng/ml)，其它步驟不變，測量500～800nm波長范圍內(nèi)的紫外光譜，以652nm處的吸光度建立hatp300標準曲線，可實現(xiàn)對不同濃度hat?p300的紫外檢測；此外，通過比色圖片可實現(xiàn)不同濃度hat?p300的可視化檢測。

43、2.電化學(xué)傳感器應(yīng)用：cu2+、coa和hat?p300的分析檢測

44、(1)基于以上步驟二-2-(3)，通過改變步驟二-2-(3)中cu2+濃度(終濃度：0～10μm)，其它步驟不變，測量tmb的dpv信號，tmb在+0.28v左右和+0.44v左右均有一個氧化峰，本專利以+0.44v處峰電流作為分析對象。以+0.44v處的電流信號建立cu2+標準曲線，可實現(xiàn)對不同濃度cu2+的電化學(xué)檢測。

45、(2)基于以上步驟二-2-(4)，通過改變步驟二-2-(3)-①中coa濃度(終濃度：0～10μm)，其它步驟不變，測量tmb的dpv信號，以+0.44v處的電流信號建立coa標準曲線，可實現(xiàn)對不同濃度coa的電化學(xué)檢測。

46、(3)基于以上步驟二-2-(5)，通過改變步驟二-2-(5)-①中hat?p300濃度(終濃度：0～20ng/ml)，其它步驟不變，測量tmb的dpv信號，以+0.44v處的電流信號建立hat?p300標準曲線，可實現(xiàn)對不同濃度hat?p300的電化學(xué)檢測。

47、四.智能手機平臺設(shè)計

48、1.手機型號為iphone?13，拍照裝置組件包括：暗箱(頂端開有小孔，剛好匹配智能手機攝像頭)、led燈(保證暗箱內(nèi)有充足且穩(wěn)定的光源)、白紙(作為拍照背景)。通過智能手機實時捕捉由cu2+、coa、hat?p300濃度改變而引起的tmb顏色改變，從而對目標物實現(xiàn)實時動態(tài)監(jiān)測。

49、2.智能手機平臺應(yīng)用：將三-1中制備的紫外比色傳感器放入四-1的暗箱中，打開led燈，用手機拍照，然后將獲取的照片導(dǎo)入手機應(yīng)用商店下載的免費取色軟件中，獲取對應(yīng)r、g、b值，根據(jù)b和g的比值與cu2+、coa、hat?p300濃度的關(guān)系分別建立cu2+、coa、hat?p300標準曲線。

50、發(fā)明原理：本發(fā)明一種多模式智能傳感器制備方法及其在胃癌細胞中的乙酰化生物應(yīng)用，在cu2+存在的條件下，cu-dnazyme探針在鳥嘌呤堿基處發(fā)生不可逆的自裂解，結(jié)構(gòu)域ⅰ被釋放，結(jié)構(gòu)域ⅱ在k+存在下形成g-四鏈體，加入hemin后，g-四鏈體與hemin結(jié)合，具有類過氧化物酶活性，可以催化過氧化氫將無色tmb氧化成藍色ox-tmb，加入的cu2+越多，溶液顏色越藍，652nm處的紫外吸收值越大，且b/g的值越大，以此實現(xiàn)紫外比色及智能手機檢測；此外，將go修飾gce上，go可以吸附g-四鏈體另一端的單鏈dna，加入的cu2+越多，g-四聯(lián)體越多，tmb的dpv信號越大，從而實現(xiàn)電化學(xué)檢測。在當加入coa時，cu2+與coa結(jié)合形成coa-cu(ii)復(fù)合物，減少了溶液中游離cu2+的量，從而減少了g-四鏈體生成的量，降低了紫外比色信號、b/g的值及電化學(xué)信號，基于此，實現(xiàn)了對coa的分析檢測。此外，hat?p300可以將ac-coa的乙?；D(zhuǎn)移到組蛋白賴氨酸殘基上，生成coa和乙?；?，隨著hat?p300濃度的增加，產(chǎn)生的coa越多，導(dǎo)致溶液中游離的cu2+減少，紫外比色信號、b/g值及電化學(xué)信號降低，由此構(gòu)建了hat?p300的檢測方法。基于此，可實現(xiàn)cu2+、coa及hat?p300多模式定量分析，構(gòu)建了一組簡單、快速、高靈敏度、高選擇性的分析方法用于腫瘤細胞中組蛋白乙?；M程的研究。

51、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：

52、(1)新穎的分析檢測原理。本專利第一次通過cu-dnazyme設(shè)計多模式分析檢測方法，這些分析方法結(jié)果相互驗證，杜絕了假陽性信號的發(fā)生。且整個方法中只涉及到一條dna，通過cu2+對dna的剪切作用引發(fā)后續(xù)的信號輸出，因此該方法特異性極強，減少了復(fù)雜的操作步驟，實現(xiàn)了目標物的快速、簡單、靈敏的分析檢測。在一定濃度區(qū)間內(nèi)，cu2+濃度越大，生成的g-四鏈體就越多，產(chǎn)生的oxtmb越多，溶液藍色越深，652nm處吸光度越大，b/g值越大，或者tmb在+0.44v處的dpv峰越大；同理，coa/hat?p300濃度越大，游離的cu2+越少，溶液藍色越淺，652nm處吸光度越小，b/g值越小，或者tmb在+0.44v處的dpv峰越小。實驗結(jié)果表明，652nm處吸光度值、b/g值、dpv峰電流值分別與cu2+、coa及hat?p300濃度在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)線性關(guān)系，從而成功實現(xiàn)三個目標物分析檢測。

53、(2)靈敏度高。本發(fā)明基于cu-dnazyme制備紫外比色和電化學(xué)傳感器，利用g-四鏈體對h2o2-tmb系統(tǒng)的催化作用輸出紫外比色信號、dpv信號以及b/g值，分別得到對應(yīng)的線性方程：紫外吸光度差值對cu2+濃度線性相關(guān)方程為：y＝0.02989x+0.07011，r2＝0.9951，檢測限為0.0072nm；電流差值對cu2+濃度的對數(shù)線性相關(guān)方程為：y＝6.760x+24.39，r2＝0.9965，檢測限為0.0067nm。b/g值對cu2+濃度的對數(shù)線性相關(guān)方程為：y＝0.01307x+0.9700，r2＝0.9890，檢測限為0.0097nm。紫外吸光度差值對coa濃度線性相關(guān)方程為：y＝-0.03858x+0.1065，r2＝0.9918，檢測限為0.72nm；電流差值對coa濃度的對數(shù)線性相關(guān)方程為：y＝-9.032x+35.47，r2＝0.9963，檢測限為0.15nm；b/g值對coa濃度的對數(shù)線性相關(guān)方程為：y＝-0.01488x+0.9869，r2＝0.9889，檢測限為0.23nm。紫外吸光度差值對hat?p300濃度線性相關(guān)方程為：y＝-0.04196x+0.1563，r2＝0.9912，檢測限為6.3pg/ml；電流差值對hat?p300濃度的對數(shù)線性相關(guān)方程為：y＝-11.09x+50.38，r2＝0.9935，檢測限為2.4pg/ml；b/g值對hat?p300濃度的對數(shù)線性相關(guān)方程為：y＝-0.01999x+1.011，r2＝0.9829，檢測限為5.3pg/ml。說明所制備傳感器可對cu2+、coa及hat?p300實現(xiàn)高靈敏度檢測。

54、(3)特異性強。本專利通過cu2+對所涉及dna的剪切作用引發(fā)后續(xù)的信號輸出，因此該方法特異性極強。對cu2+檢測：其他金屬離子如鉛離子(pb2+)、鐵離子(fe3+)、鎘離子(cd2+)、鈉離子(na+)、鈷離子(co2+)、鈣離子(ca2+)、鎳離子(ni2+)和鎂離子(mg2+)對cu2+檢測均無干擾；對coa檢測：其他對照物質(zhì)如黃嘌呤(gtp)、鎂離子(mg2+)、鈣離子(ca2+)、蔗糖(suc)、乳酸(hl)、乙醇脫氫酶(adh)、末端轉(zhuǎn)移酶(tdt)、葡萄糖氧化酶(gox)對體系均無干擾；對hat?p300檢測：其他對照物質(zhì)如末端轉(zhuǎn)移酶(tdt)、葡萄糖氧化酶(gox)、乙酰膽堿酯酶(ache)、黃嘌呤氧化酶(xod)、木瓜蛋白酶(papain)、尿酸酶(uao)、抗壞血酸氧化酶(ao)、胰蛋白酶(trypsin)對體系均無干擾。

55、(4)手機便攜式分析裝置?？梢灾苯痈鶕?jù)溶液顏色的深淺大致判斷目標物濃度，而智能手機平臺引入使目標物檢測更加準確、快速，且可以實時監(jiān)測反應(yīng)體系的動態(tài)變化。

56、(5)準確度高，應(yīng)用性強?；厥章示?5％～105％之間；可以初步實現(xiàn)胃癌細胞中組蛋白乙?；傅姆治鰴z測。

57、(6)成本低。消耗少量材料和試劑就可實現(xiàn)對cu2+、coa和hat?p300準確檢測，符合產(chǎn)業(yè)化中低成本的要求。

58、綜上所述，本發(fā)明是一種多模式智能傳感器制備方法及其在胃癌細胞中的乙?；飸?yīng)用，具有操作簡單、可視化、可實時檢測、靈敏度高、特異性強、結(jié)果準確、成本低等優(yōu)點，可以實現(xiàn)待測樣品中cu2+、coa和hat?p300定量分析，尤其是胃癌細胞樣本。目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)類似案例，具有良好的應(yīng)用前景。