專利名稱：大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系建立用的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大蒜組織培養(yǎng)技術(shù)，具體是一種大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系建立用的培養(yǎng)基。特別適用于利用從大蒜莖尖分生組織誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。

背景技術(shù)：
大蒜(Allium sativumL.)是無性繁殖植物，具有較高的食用及藥用價(jià)值，利用生物工程技術(shù)改良其品質(zhì).抗病蟲害等性狀現(xiàn)已引起廣泛的重視，這些生物技術(shù)應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是建立一個(gè)大蒜細(xì)胞組織培養(yǎng)、增殖的有效植株再生體系。懸浮培養(yǎng)技術(shù)可以在短時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)出大量同質(zhì)的試驗(yàn)材料，大幅度提高試驗(yàn)效率，為大蒜生物工程提供理想的試驗(yàn)材料。張毅等利用大蒜懸浮培養(yǎng)提取大蒜次生代謝物質(zhì)有過報(bào)道(1993)；但利用大蒜懸浮培養(yǎng)技術(shù)，建立懸浮培養(yǎng)系及有效植株高頻率再生體系尚未報(bào)道。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系建立用的培養(yǎng)基，目的是解決大蒜莖尖分生組織誘導(dǎo)出胚性愈傷組織懸浮培養(yǎng)時(shí)易喪失胚性，難以成系的技術(shù)難題，建立一個(gè)大蒜的胚性細(xì)胞培養(yǎng)系。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系建立用的培養(yǎng)基，是將2，4二氯苯氧乙酸2，4-D、激動(dòng)素KT、蔗糖和瓊脂溶解于基本培養(yǎng)基B5中，PH值調(diào)整至5.8-6.0制得，其各組份的用量為以1L基本培養(yǎng)基B5加入量計(jì) B5 1L 2，4-D 2mg KT 0.5-2mg 蔗糖 30g。
優(yōu)選為 B5 1L 2，4-D 2mg KT 0.5mg 蔗糖30g。
上述原料中，B5為基本培養(yǎng)基，提供培養(yǎng)組織生長發(fā)育所需的無機(jī)營養(yǎng)元素和部分有機(jī)營養(yǎng)元素；2，4-D、KT是植物生長調(diào)節(jié)劑，具有促進(jìn)培養(yǎng)物愈傷組織形成和發(fā)育的作用；蔗糖提供培養(yǎng)組織生長發(fā)育所的碳素營養(yǎng)。
上述各組份的用量是發(fā)明人在理論分析的基礎(chǔ)上進(jìn)行大量試驗(yàn)摸索總結(jié)得出的，按上述比例配制培養(yǎng)基，具有形成優(yōu)質(zhì)胚性愈傷組織顆粒誘導(dǎo)效果。
上述培養(yǎng)基的制作方法是將2，4-D、KT和蔗糖溶解于基本培養(yǎng)基B5中，攪拌均勻，PH值調(diào)整為5.8-6.0即可。
本發(fā)明的積極效果是利用本培養(yǎng)基可以建立大蒜懸浮培養(yǎng)系，解決了大蒜莖尖分生組織誘導(dǎo)出胚性愈傷組織懸浮培養(yǎng)時(shí)易喪失胚性，難以成系的技術(shù)難題。

具體實(shí)施例方式 以下通過實(shí)施例和對(duì)照例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的有益效果。
實(shí)施例1 B51L 2，4-D2mg 6-BA 2mg 蔗糖 30g。
實(shí)施例2 B5 1L 2，4-D 2mg 6-BA 0.5mg NAA 0.2mg 蔗糖 30g。
實(shí)施例3 B51L 2，4-D2mg KT0.5mg 蔗糖 30g。
實(shí)施例4 B51L 2，4-D2mg KT2mg 蔗糖 30g。
試驗(yàn)方法及結(jié)果 將上述實(shí)施例的培養(yǎng)基用于大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系的建立試驗(yàn) 材料大蒜徐州白蒜莖尖分生組織誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織。
方法將大蒜徐州白蒜莖尖分生組織誘導(dǎo)出胚性愈傷組織破碎成小的細(xì)胞團(tuán)，將其轉(zhuǎn)移到裝有上述實(shí)施例液體培養(yǎng)20ml(PH5.5)的三角瓶中，放在100r/min轉(zhuǎn)速的水平搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為27±1℃，每日12h.1000lx光照。懸浮培養(yǎng)每隔2周繼代一次，培養(yǎng)10周。
結(jié)果將大蒜莖尖分生組織誘導(dǎo)得到的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)管接種在上述4個(gè)實(shí)施例液體培養(yǎng)中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。在實(shí)施例3中懸浮系形成率最高為86.7％，可以獲得增殖迅速.分散程度良好的胚性細(xì)胞懸浮培養(yǎng)系。實(shí)施例1中懸浮系形成率最低，為6.6％；實(shí)施例2中懸浮系形成率為40％；實(shí)施例4中懸浮系形成率為63.3％。在實(shí)施例1、2、4中，愈傷組織逐漸變白，最后喪失胚性，同時(shí)部分細(xì)胞團(tuán)形成根狀組織。由此可見，在大蒜體胚形成過程中，過高的生長素不利于其體胚的發(fā)生，而導(dǎo)致向根的方向分化。在實(shí)施例3培養(yǎng)基中獲得的胚性細(xì)胞培養(yǎng)系每周繼代一次，每次繼代時(shí)，將堅(jiān)硬.淡黃色.直徑大于3mm的細(xì)胞團(tuán)破碎成0.1mm以下的小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞，通過2周的懸浮培養(yǎng)，部分細(xì)胞團(tuán)又可以發(fā)育成2-3mm的細(xì)胞團(tuán)。通過上述方法，由一個(gè)莖尖分生組織誘導(dǎo)得到的胚性愈傷組織可以在短時(shí)間內(nèi)得到大量的同質(zhì)胚性愈傷組織。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。
表1大蒜懸浮培養(yǎng)系誘導(dǎo)結(jié)果統(tǒng)計(jì)(10周)

綜合以上分析，得出大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為 B51L 2，4-D2mg KT0.5mg 蔗糖 30g。
權(quán)利要求
1.一種建立大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系的培養(yǎng)基，其特征是將2，4二氯苯氧乙酸2，4-D、激動(dòng)素KT、蔗糖、瓊脂溶解于基本培養(yǎng)基B5中，PH值調(diào)整至5.8-6.0制得，其各組份的用量為以1L基本培養(yǎng)基B5加入量計(jì)
B5 1L
2，4-D 2mg
KT 0.5-2mg
蔗糖30g。
2.一種建立大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系的培養(yǎng)基，其特征是將2，4二氯苯氧乙酸2，4-D、激動(dòng)素KT、蔗糖、瓊脂溶解于基本培養(yǎng)基B5中，PH值調(diào)整至5.8-6.0制得，其各組份的用量為以1L基本培養(yǎng)基B5加入量計(jì)
B5 1L
2，4-D 2mg
KT 0.5mg
蔗糖30g。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種建立大蒜胚性懸浮培養(yǎng)系的培養(yǎng)基，屬大蒜組織培養(yǎng)技術(shù)。將2，4-D、KT、蔗糖、瓊脂溶解于基本培養(yǎng)基B5中，pH值調(diào)整至5.8-6.0制得，其各組份的用量為以1L基本培養(yǎng)基B5加入量計(jì)B5 1L，2，4-D 2mg，KT 0.5-2mg，蔗糖30g。有益效果是利用本培養(yǎng)基可以建立大蒜懸浮培養(yǎng)系，解決了大蒜莖尖分生組織誘導(dǎo)出胚性愈傷組織懸浮培養(yǎng)時(shí)易喪失胚性，難以成系的技術(shù)難題。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101816288SQ201010169619
公開日2010年9月1日 申請(qǐng)日期2010年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月6日
發(fā)明者張?jiān)蕜?申請(qǐng)人:江蘇徐淮地區(qū)徐州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所