專(zhuān)利名稱(chēng)：羊肚菌大田商業(yè)化栽培新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
該發(fā)明技術(shù)屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明涉及的是一種野生羊肚菌人 工大田商業(yè)化栽培的新技術(shù)，該技術(shù)是通過(guò)采集野生羊肚菌進(jìn)行人工生物克隆方法，在無(wú) 菌條件下進(jìn)行細(xì)胞組織分離，獲得羊肚菌的優(yōu)良菌株，經(jīng)過(guò)提純復(fù)壯，培養(yǎng)出羊肚菌母種， 然后經(jīng)過(guò)不同的原料、不同配方，對(duì)比研制出適合羊肚菌的菌絲生長(zhǎng)的母種、原種及栽培種 的原料和配方，制出了羊肚菌母種、原種及栽培種。在栽培方法上，經(jīng)過(guò)23年的摸索試驗(yàn)和 1000多次的失敗，總結(jié)出了先進(jìn)的本栽培方法，獲得了羊肚菌在大田商業(yè)化栽培的成功。
羊肚菌是一種非常珍稀名貴的食用菌，它主要生長(zhǎng)在大山區(qū)森林之中，一年只 長(zhǎng)一次，由于受地區(qū)條件和資源等限制，產(chǎn)量很少，采集十分困難。目前市場(chǎng)售價(jià)每公斤 1500-1800元，產(chǎn)品主要出口西歐國(guó)家，需大量貨源。
羊肚菌的作用羊肚菌是世界上很名貴的菌類(lèi)，屬高級(jí)營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)品，含豐富的蛋白 質(zhì)、多糖、碳水化合物，多種維生素和20多種氨基酸及微量元素。具有補(bǔ)腎、壯陽(yáng)、補(bǔ)腦、提 神的功能。對(duì)精腎虧損、陽(yáng)萎不舉、性功能減退、性欲冷淡有明顯的作用。長(zhǎng)期食用可防癌抗 癌、抑制腫瘤、預(yù)防感冒、增強(qiáng)人體免疫力的效果，在醫(yī)學(xué)上和保健上都有重要的開(kāi)發(fā)價(jià)值。
羊肚菌營(yíng)養(yǎng)成份羊肚菌干鮮均可食用，風(fēng)味獨(dú)特、味道鮮美、嫩脆可口、營(yíng)養(yǎng)極為 豐富。據(jù)測(cè)定羊肚菌含蛋白質(zhì)22%、粗脂肪3. 82%、氨基酸高達(dá)20多種，含47. 47%，特 別是對(duì)人體必需的8種氨基酸含量很高，占氨基酸總量的44. 14%，多種維生素及礦物質(zhì)元 素含量也極為豐富，被譽(yù)為食品之冠。
羊肚菌既是宴席上的珍品，又是醫(yī)藥中久負(fù)盛名的良藥，李時(shí)珍《本草綱目》記載 羊肚菌用于治療各種胃病。過(guò)去人們把羊肚菌作為敬獻(xiàn)皇帝的滋補(bǔ)貢品，如今已成為出口 西歐國(guó)家的高檔食品，是一種不含任何激素，無(wú)任何副作用的天然保健品，是人類(lèi)最理想的 健康長(zhǎng)壽食品。
背景技術(shù)：
羊肚菌人工栽培研究早在1883年，英、美、法等國(guó)家開(kāi)始了栽培研 究，時(shí)過(guò)100多年都沒(méi)有完全取得成功，直到1986年4月，美國(guó)一名大學(xué)教授Rom Ower第 一個(gè)申報(bào)了羊肚菌人工栽培發(fā)明專(zhuān)利，當(dāng)時(shí)這項(xiàng)技術(shù)震驚了全世界，遺憾的是他還未等到 專(zhuān)利頒布的前幾周，就被謀殺在舊金山，從此這項(xiàng)專(zhuān)利斷絕了實(shí)施。兩年后，1988年6月，美 國(guó)另一名大學(xué)教授San Ronaid(曾與Rom Ower教授當(dāng)過(guò)助手)，又申報(bào)了羊肚菌人工栽培 的發(fā)明專(zhuān)利，但這項(xiàng)專(zhuān)利已過(guò)10多年，仍然沒(méi)有實(shí)現(xiàn)大田栽培野生羊肚菌的商業(yè)化方法。
在我國(guó)，羊肚菌人工栽培的研究單位超過(guò)1萬(wàn)多家，人們都看到了羊肚菌的高昂 價(jià)格和市場(chǎng)前景非常誘人，不惜一切代價(jià)進(jìn)行研究?？墒茄蚨蔷L(zhǎng)有很多奧秘，人工栽培 并不像普通食用菌那么簡(jiǎn)單，很多單位都是以失敗而告終。
我國(guó)著名的食用菌專(zhuān)家，四川省綿陽(yáng)市食用菌研究所朱斗錫教授，是國(guó)內(nèi)研究羊 肚菌最早的人，他從1985年開(kāi)始研究羊肚菌，1992年首次在野外利用純菌種栽培成功， 2000年在野外中試栽培取得了成功，獲得了國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利(專(zhuān)利號(hào)ZL 00112812.4)。但 這種方法還存在投資高，工序復(fù)雜，產(chǎn)量不穩(wěn)定的因素，因此還無(wú)法實(shí)現(xiàn)野生羊肚菌在大田 進(jìn)行商業(yè)化栽培。
近10多年來(lái)，朱斗錫教授主要精力放在羊肚菌的菌種研究和栽培技術(shù)管理上，目32/3頁(yè)的是進(jìn)一步降低生產(chǎn)成本，提高羊肚菌產(chǎn)量和質(zhì)量。在他那堅(jiān)定不移的研究信心中，得到了 很多朋友方面的資金幫助，前后共研究時(shí)間長(zhǎng)達(dá)23年，終于使這個(gè)神奇的野生羊肚菌能在 大田中栽培成功，填補(bǔ)了一項(xiàng)世界空白。成為國(guó)內(nèi)外首次攻破野生羊肚菌能在大田商業(yè)化 栽培成功的人，這項(xiàng)技術(shù)被法國(guó)一位客商看中，目前已決定用300萬(wàn)元人民幣購(gòu)買(mǎi)這項(xiàng)技 術(shù)，這是一項(xiàng)非常有發(fā)展前景的項(xiàng)目。
3、發(fā)明內(nèi)容包括
①.羊肚菌的生物克隆細(xì)胞分離方法；
②.羊肚菌特定培養(yǎng)環(huán)境條件及馴化方法；
③.羊肚菌母種配方及制作方法；
④.羊肚菌的原種配方及制作方法；
⑤.羊肚菌的栽培種配方及制作方法；
⑥.羊肚菌的大田商業(yè)化栽培及管理方法。
4、具體實(shí)施方案本方法是指野生羊肚菌在大田商業(yè)化栽培的新技術(shù)。它包含野 生羊肚菌的采集方法、生物克隆技術(shù)、細(xì)胞組織分離方法、羊肚菌的菌種制作方法、包括母 種制作、原種制作、栽培種制作等方法。菌種培養(yǎng)條件及培養(yǎng)技術(shù)，羊肚菌的大田商業(yè)化播 種栽培及管理，直到出菇采收等技術(shù)方法，具體實(shí)施方案如下
一種野生美味羊肚菌的采集和生物克隆細(xì)胞組織分離法在野生羊肚菌出菇季 節(jié)，采集朵大、肉厚、健壯、無(wú)病蟲(chóng)害且處于壯齡的新鮮羊肚菌，進(jìn)行生物克隆和細(xì)胞組織分 離。分離使用的PDA培養(yǎng)基為香樟木片200克、葡萄糖25克、瓊脂25克、磷酸二氫鉀2克、 硫酸鎂2克、VB1 1克、水1000毫升。
方法是先將香樟木片煮30分鐘，過(guò)濾取汁，加入上述原料煮至融化后分裝試管， 封口、滅菌。經(jīng)高壓滅菌鍋1. 5磅壓力維持90分鐘后，趁熱放成斜面，斜度為試管的2/3為 宜。待冷卻后即可作為羊肚菌分離使用的PDA培養(yǎng)基。
分離方法是在無(wú)菌條件下或接種箱內(nèi)，放入PDA培養(yǎng)基試管數(shù)支，將新鮮羊肚菌 及接種的工具，刀片等，用75%的酒精消毒后放入接種箱，在將5克高錳酸鉀和10毫升甲 醛混合進(jìn)行箱內(nèi)空間消毒。30分鐘后開(kāi)始克隆分離。用刀片將羊肚菌切成2-3mm小塊細(xì) 胞組織，放入PDA培養(yǎng)基上。置于5-20°C溫度范圍內(nèi)，培養(yǎng)5-7天菌絲發(fā)育完成，再通過(guò)馴 化、提純、轉(zhuǎn)管后培養(yǎng)成羊肚菌母種。
一種羊肚菌原種的制作培養(yǎng)方法原材料及配方小麥50-60%，麥麩10-15%，細(xì) 顆粒土壤20-25%，石膏1%，過(guò)磷酸鈣1-2%，含水量60-65%，裝入750克的玻璃瓶中，封 口、滅菌，溫度在100-120°C保持3-8小時(shí)。待冷卻后接種。
接種方法是在接種箱內(nèi)或無(wú)菌條件下進(jìn)行，先將滅菌后的原種培養(yǎng)基放入接種 箱，在將接種針和羊肚菌母種用75%的酒精消毒后，放入接種箱內(nèi)，然后用高猛酸鉀5克和 甲醛10毫升混合產(chǎn)生氣體進(jìn)行空間消毒，30分鐘后開(kāi)始接種。
每支母種可接原種5-8瓶，接種后置于5-20°C溫度條件下，培養(yǎng)20_30天，完成原 種。
一種羊肚菌栽培菌種的制作及培養(yǎng)方法原材料及配方植物有機(jī)物或秸桿粉 70-80%，麥麩或米糠10-15%，石膏1%，石灰1%，含水量60-65%，裝入17X33cm塑料袋 封口，滅菌。常壓在100°C以上保持8小時(shí)，高壓在1. 5磅的壓力下保持90分鐘，冷卻后接種。每袋原種可接栽培種50-80瓶，接種后放在5-20°C的環(huán)境下培養(yǎng)，20-30天菌絲長(zhǎng)滿全 袋即可栽培。
一種羊肚菌大田商業(yè)化栽培播種及管理采收方法其特征在于選擇地勢(shì)平坦 的水稻田，水稻收割完畢后，將田進(jìn)行耕作，要求土粒較細(xì)，然后對(duì)土壤進(jìn)行高溫滅菌、消 毒，或藥物滅菌消毒，消毒后播上羊肚菌的栽培菌種，每平方米播菌種500克，播種后每隔 1. 2-1. 5米一廂開(kāi)溝，用塑料薄膜覆蓋保溫、保濕。為防止太陽(yáng)暴曬，還要用草棚或遮陽(yáng)網(wǎng)并 搭建蔭棚，陰度為70-90%，出菇時(shí)揭開(kāi)塑料薄膜，保持土壤含水量為60-65%，空氣相對(duì)濕 度為80-95%，溫度為5-20°C范圍內(nèi)，直至出菇到采收。
本發(fā)明與過(guò)去其它同類(lèi)的栽培方法完全不同，本方法解決了野生羊肚菌過(guò)去無(wú)法 在大田進(jìn)行商業(yè)化栽培的世界技術(shù)難題，這是一項(xiàng)羊肚菌人工栽培的重大的技術(shù)突破，它 不受地區(qū)的條件和資源的限制，在任何野外的大田都可進(jìn)行人工栽培。是一種成本很低，原 料來(lái)源豐富，出菇較穩(wěn)定、產(chǎn)量較高、質(zhì)量較好的栽培新方法。
本申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)多年的試驗(yàn)研究及不斷創(chuàng)新，發(fā)明了一種適用于大田栽培野生羊肚 菌的新方法，它包括適應(yīng)的環(huán)境培養(yǎng)條件和生長(zhǎng)控制條件、培養(yǎng)基材料及科學(xué)配方、栽培方 法、管理技術(shù)等。
本方法所用的培養(yǎng)基植物有機(jī)物一般是闊葉樹(shù)的木屑或秸桿類(lèi)，如棉籽殼、玉米 芯、玉米桿、甘蔗渣、花生殼、稻草、麥草、樹(shù)枝、樹(shù)葉、小麥、谷物等。
本方法所用的培養(yǎng)基中的輔助營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)為麥麩、米糠、玉米粉及其它營(yíng)養(yǎng)劑等。
本方法所用的泥土是一般泥土，是壤土或腐殖質(zhì)土。泥土是出菇的重要成份，泥土 是完全可以循環(huán)使用的。
本方法除了在野外大田中栽培，還可在大地、林中地上、果樹(shù)下或人工蔭棚栽培。 本發(fā)明的特點(diǎn)在于原料創(chuàng)新、配方創(chuàng)新、工藝方法創(chuàng)新等，其表現(xiàn)為生產(chǎn)成本低，工序簡(jiǎn)單， 產(chǎn)量高，收入大，質(zhì)量好的特點(diǎn)，完全能栽培出與野生羊肚菌相同的產(chǎn)品，本方法達(dá)到了發(fā) 明創(chuàng)新的目的。
權(quán)利要求
1.權(quán)利要求方法之一羊肚菌生物克隆技術(shù)；它是用新鮮羊肚菌的子實(shí)體在無(wú)菌條件 下，進(jìn)行組織細(xì)胞分離。切取2-3mm直徑的組織細(xì)胞，放在PDA培養(yǎng)基上，經(jīng)特定環(huán)境條件 下培養(yǎng)。
2.權(quán)利要求方法之二羊肚菌的母種PDA培養(yǎng)基配方；馬鈴薯、黃豆芽、香樟木片(任 意選擇一種)200克，瓊脂25克，葡萄糖25克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂2克，VB1 1克，水 1000毫升，通過(guò)溶化、裝管、高溫滅菌、接種、培養(yǎng)。
3.權(quán)利要求方法之三羊肚菌的菌絲體發(fā)育特定環(huán)境條件，溫度是在5-20°C的范圍 內(nèi)，基物含水量60-65%，羊肚菌的子實(shí)體生長(zhǎng)特定環(huán)境，溫度是5-20°C范圍內(nèi)，空氣相對(duì) 濕度是80-95%。
4.權(quán)利要求方法之四羊肚菌原種培養(yǎng)基配方；小麥50-60%，麥麩10-15%，細(xì)顆 粒土壤20-25%，石膏1-2%，過(guò)磷酸鈣1-2%，含水量60-65%，裝瓶、封口、滅菌。溫度 100-120°C，保持3-8小時(shí)，冷卻后在無(wú)菌條件下接種。
5.權(quán)利要求方法之五羊肚菌栽培種培養(yǎng)基配方；用植物有機(jī)物或桔桿粉70-80%，麥 麩或米糠10-15%，石膏1%，石灰1%，含水量60-65%，裝入17X33cm塑料袋中，封口、滅 菌。常壓100°C以上保持8小時(shí)，高壓1. 5磅保持90分種，冷卻后接種，在特定的環(huán)境下培 養(yǎng)20-30天成為栽培種。
6.權(quán)利要求方法之六羊肚菌的播種栽培方法；其特征在于利用稻田，通過(guò)耕作后，再 對(duì)土壤進(jìn)行高溫滅菌、消毒。每平方米用羊肚菌栽培菌種500克，每隔1. 2-1. 5米一廂開(kāi)小 溝，用塑料薄膜覆蓋保溫，保濕。外搭建蔭棚，用稻草簾或遮陽(yáng)網(wǎng)遮光70-90%，通過(guò)特定的 環(huán)境條件管理至出菇收獲。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種羊肚菌，通過(guò)克隆技術(shù)進(jìn)行組織細(xì)胞分離、培養(yǎng)、獲得母種。原種配方小麥50-60％，麥麩10-15％，土壤20-25％，石膏1-2％，過(guò)磷酸鈣1-2％，含水量60-65％，裝瓶，滅菌、接入母種。栽培種制作植物有機(jī)物70-80％，加10-15％的麥麩，加1％的石膏，加入1％的白糖，含水量60-65％，裝袋、滅菌，接種、培養(yǎng)。栽培新方法將水稻田耕作后，播上羊肚菌的菌種，蓋上塑料薄膜保溫，保濕，蔭度70-90％，溫度5-20℃，土壤含水量60-65％，空氣相對(duì)濕度80-95％，通過(guò)這些方法至出菇收獲。本創(chuàng)新方法成本低效果好，按照本法可以栽培出與野生質(zhì)量完全相同的羊肚菌。
文檔編號(hào)A01G1/04GK102027857SQ20101028766
公開(kāi)日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2010年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月17日
發(fā)明者何榮華, 朱斗錫 申請(qǐng)人:何榮華, 朱斗錫