專利名稱：一種銀耳菌種繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食用菌栽培技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種銀耳菌種繁育方法。
背景技術(shù)：
銀耳、又名白木耳、雪耳，是我國久負盛名的山珍菌類。隸屬與擔子菌綱，銀耳目，銀耳科，銀耳屬。銀耳是著名的食用兼藥用菌，營養(yǎng)十分豐富。因而具有較高的藥用價值，還含有多種人體必需氨基酸。隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展壯大，銀耳的生產(chǎn)現(xiàn)已成為某些地區(qū)的大部分農(nóng)民主要經(jīng)濟來源之一。菌種，好比農(nóng)作物的種子，是食用菌生產(chǎn)的根本，其優(yōu)劣直接影響著食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量。人工培育的菌種有母種、原種和栽培種之分，母種是用孢子分離或組織分離培育而成的菌絲體，把母種擴大到木屑、棉仔殼等為主的培養(yǎng)料上的菌種稱為原種，由原種擴大培養(yǎng)成為生產(chǎn)上使用的菌種稱為栽培種。銀耳生活史較復(fù)雜， 銀耳純菌絲的制得與保存日前仍相當困難。將銀耳純菌絲接種在普通PDA培養(yǎng)基上，菌絲生長緩慢，且易向節(jié)孢子轉(zhuǎn)變，菌絲易變黃、膠質(zhì)化。銀耳純菌絲沒有分解木質(zhì)纖維素的能 力，只有當銀耳菌絲與耳友菌絲(又稱香灰菌，子囊菌亞門的一種真菌)生活在一起才能發(fā)育結(jié)耳。為克服傳統(tǒng)銀耳菌種培育方法培育出的菌種容易退化、生長不穩(wěn)定且銀耳產(chǎn)量不高的缺陷，2009年10月12日，江壽根發(fā)明的專利號CN 102037849A公開了一種銀耳菌種培育方法，通過挑選出生長強壯優(yōu)良的銀耳孢子所萌發(fā)的菌絲與生長有力的香灰菌絲進行交合培育，從而培育出抵抗力強、不易退化、生長穩(wěn)定、產(chǎn)量高的銀耳菌種。然而對進行交合選取的銀耳菌絲和香灰菌絲的菌絲特征以及交合比例缺乏把握，導(dǎo)致培育出的銀耳菌種重復(fù)性不高。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種銀耳菌種繁育方法，培育出一種重復(fù)性高、抵抗力強、不易退化、生長穩(wěn)定、產(chǎn)量高的銀耳菌種。為了達到上述之目的，本發(fā)明采用如下具體技術(shù)方案一種銀耳菌種繁育方法，包括如下步驟
(I)銀耳純白菌絲的提取
第一步是分離材料的選取從袋栽銀耳栽培房中，選取子實體形態(tài)為牡丹花形、耳片肥厚、色澤鮮白、無病蟲害感染的理想耳朵，置于顯微鏡下觀察并認真鑒定后，選為分離材料；
第二步是將分離材料用無菌水多次漂洗后吸干水分；
第三步是培養(yǎng)將分離材料接種至木屑培養(yǎng)基上，塞好棉塞，在25°c下培養(yǎng)7 10天，直至培養(yǎng)基上出現(xiàn)白色粒狀菌絲團，將菌絲團勾出，接入PDA培養(yǎng)基上，置于23 25°C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)10天；
第四步是對優(yōu)良的銀耳純白菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲顏色為白色、淡黃色或黃色；氣生菌絲直立或斜立平貼于培養(yǎng)基表面，基內(nèi)菌絲生于培養(yǎng)基里面，其菌絲直徑為I. 5 3微米，有橫膈膜，部分菌絲體有明顯的鎖狀連合；
第五步是銀耳純白菌絲的提取通過觀察，依據(jù)第四步的判斷標準，選擇菌絲走勢良好，爬壁力強，舒展雄壯的菌絲作為銀耳純白菌絲；
(2)香灰菌絲的提取
第一步是分離材料的選取在袋栽培養(yǎng)基深層，取一小點含有菌絲體的木屑；
第二步是培養(yǎng)將分離材料接種至PDA培養(yǎng)基上，在23 26°C條件下培養(yǎng)3 4天，接種塊邊緣長出白色粗狀的菌絲，菌絲體顏色由白色轉(zhuǎn)為黃綠色，隨著菌絲的生長，分泌出黑色素，促使培養(yǎng)基顏色逐漸變黑并不斷加深；
第三步是對優(yōu)良的香灰菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲白色、羽毛狀，氣生菌絲呈灰白色、細絨狀，有時有碳質(zhì)的黑疤；分生孢子梗呈掃帚狀，分生孢子為黃綠色至草綠色，近橢圓形，直徑3 5微米；
第四步是香灰菌絲的提取通過觀察，依據(jù)第三步的判斷標準，選擇長勢旺、爬壁力強的羽毛狀菌絲，采取先端分離法，將菌絲體挑出來，并經(jīng)過數(shù)次移植，獲得羽毛狀香灰菌絲；
(3)兩種菌絲交合培養(yǎng)成母種采用斜面試管交合培育法，把銀耳純白菌絲接入試管培養(yǎng)基的中央，挑取少許香灰菌絲，接于離銀耳純白菌絲I 2厘米部位，二者交合后，香灰菌絲呈黑色且布滿試管內(nèi)全部培養(yǎng)基，而銀耳純白菌絲的接種塊上出現(xiàn)黃紅色水珠。所述的步驟(3)中銀耳純白菌和香灰菌交合比例為千分之一。所述的兩種菌絲交合培養(yǎng)成母種也可以在木屑培養(yǎng)基上進行，先把銀耳純白菌絲連同培養(yǎng)基少許從試管中挑取出來，放入木屑培養(yǎng)基上，然后提取少許的香灰菌絲，放入銀耳純白菌絲旁邊或上面，在23 25°C下培養(yǎng)，二者交合時接種塊的白毛團上出現(xiàn)黃紅色水珠。與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下突出優(yōu)點和效果本發(fā)明通過銀耳純白菌絲與香灰菌絲交合培育銀耳菌種，由于銀耳純白菌絲與香灰菌絲比例適當，有早期發(fā)育快的特點，香灰菌絲前期長勢好，能趕在氨味產(chǎn)生前就強壯發(fā)育，保證了菌種的高產(chǎn)、高抵抗力以及菌種的穩(wěn)定性；且結(jié)合菌絲體特征的判斷來確定提取的銀耳純白菌絲和香灰菌絲的優(yōu)良性狀，保證了銀耳菌種制備的高重復(fù)性。
具體實施例方式 下列實例進一步說明本發(fā)明，但不應(yīng)當作為本發(fā)明的限制。通過培養(yǎng)料制作、裝袋打穴、滅菌、冷卻、接種與菌絲培育獲得袋栽銀耳，然后按以下三個環(huán)節(jié)完成銀耳菌種的繁育
(I)銀耳純白菌絲的提取
第一步是分離材料的選取從袋栽銀耳栽培房中，選取子實體形態(tài)為牡丹花形、耳片肥厚、色澤鮮白、無病蟲害感染的理想耳朵，置于顯微鏡下觀察并認真鑒定后，選為分離材料；
第二步是將分離材料用無菌水多次漂洗后吸干水分；
第三步是培養(yǎng)將分離材料接種至木屑培養(yǎng)基上(木屑培養(yǎng)基由木屑75%、麥片20%、石膏粉5%形成的料，與水按1:1.2配制而成)，塞好棉塞，在25°C下培養(yǎng)7 10天，直至培養(yǎng)基上出現(xiàn)白色粒狀菌絲團，將菌絲團勾出，接入PDA培養(yǎng)基上(PDA培養(yǎng)基由馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂18g/L配制而成)，置于23 25°C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)10天；
第四步是對優(yōu)良的銀耳純白菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲顏色為白色、淡黃色或黃色；氣生菌絲直立或斜立平貼于培養(yǎng)基表面，基內(nèi)菌絲生于培養(yǎng)基里面，其菌絲直徑為I. 5 3微米，有橫膈膜，部分菌絲體有明顯的鎖狀連合；
第五步是銀耳純白菌絲的提取通過觀察，依據(jù)第四步的判斷標準，選擇菌絲走勢良好，爬壁力強，舒展雄壯的菌絲作為銀耳純白菌絲；
(2)香灰菌絲的提取
第一步是分離材料的選取在袋栽培養(yǎng)基深層，取一小點含有菌絲體的木屑；
第二步是培養(yǎng)將分離材料接種至PDA培養(yǎng)基上，在23 26°C條件下培養(yǎng)3 4天，接種塊邊緣長出白色粗狀的菌絲，菌絲體顏色由白色轉(zhuǎn)為黃綠色，隨著菌絲的生長，分泌出黑色素，促使培養(yǎng)基顏色逐漸變黑并不斷加深；
第三步是對優(yōu)良的香灰菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲白色、羽毛狀，氣生菌絲呈灰白色、細絨狀，有時有碳質(zhì)的黑疤；分生孢子梗呈掃帚狀，分生孢子為黃綠色至草綠色，近橢圓形，直徑3 5微米；
第四步是香灰菌絲的提取通過觀察，依據(jù)第三步的判斷標準，選擇長勢旺、爬壁力強的羽毛狀菌絲，采取先端分離法，將菌絲體挑出來，并經(jīng)過數(shù)次移植，獲得羽毛狀香灰菌絲；
(3)兩種菌絲交合培養(yǎng)成母種銀耳純白菌和香灰菌交合比例為千分之一，采用斜面試管交合培育法，把銀耳純白菌絲接入試管培養(yǎng)基的中央，挑取少許香灰菌絲，接于離銀耳純白菌絲I 2厘米部位，二者交合后，香灰菌絲呈黑色且布滿試管內(nèi)全部培養(yǎng)基，而銀耳純白菌絲的接種塊上出現(xiàn)黃紅色水珠。
權(quán)利要求
1.一種銀耳菌種繁育方法，其特征在于包括如下步驟 銀耳純白菌絲的提取 第一步是分離材料的選取從袋栽銀耳栽培房中，選取子實體形態(tài)為牡丹花形、耳片肥厚、色澤鮮白、無病蟲害感染的理想耳朵，置于顯微鏡下觀察并認真鑒定后，選為分離材料； 第二步是將分離材料用無菌水多次漂洗后吸干水分； 第三步是培養(yǎng)將分離材料接種至木屑培養(yǎng)基上，塞好棉塞，在25°c下培養(yǎng)7 10天，直至培養(yǎng)基上出現(xiàn)白色粒狀菌絲團，將菌絲團勾出，接入PDA培養(yǎng)基上，置于23 25°C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)10天； 第四步是對優(yōu)良的銀耳純白菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲顏色為白色、淡黃色或黃色；氣生菌絲直立或斜立平貼于培養(yǎng)基表面，基內(nèi)菌絲生于培養(yǎng)基里面，其菌絲直徑為I. 5 3微米，有橫膈膜，部分菌絲體有明顯的鎖狀連合； 第五步是銀耳純白菌絲的提取通過觀察，依據(jù)第四步的判斷標準，選擇菌絲走勢良好，爬壁力強，舒展雄壯的菌絲作為銀耳純白菌絲； 香灰菌絲的提取 第一步是分離材料的選取在袋栽培養(yǎng)基深層，取一小點含有菌絲體的木屑； 第二步是培養(yǎng)將分離材料接種至PDA培養(yǎng)基上，在23 26°C條件下培養(yǎng)3 4天，接種塊邊緣長出白色粗狀的菌絲，菌絲體顏色由白色轉(zhuǎn)為黃綠色，隨著菌絲的生長，分泌出黑色素，促使培養(yǎng)基顏色逐漸變黑并不斷加深； 第三步是對優(yōu)良的香灰菌絲特征進行判斷，其判斷標準是菌絲白色、羽毛狀，氣生菌絲呈灰白色、細絨狀，有時有碳質(zhì)的黑疤；分生孢子梗呈掃帚狀，分生孢子為黃綠色至草綠色，近橢圓形，直徑3 5微米； 第四步是香灰菌絲的提取通過觀察，依據(jù)第三步的判斷標準，選擇長勢旺、爬壁力強的羽毛狀菌絲，采取先端分離法，將菌絲體挑出來，并經(jīng)過數(shù)次移植，獲得羽毛狀香灰菌絲； 兩種菌絲交合培養(yǎng)成母種采用斜面試管交合培育法，把銀耳純白菌絲接入試管培養(yǎng)基的中央，挑取少許香灰菌絲，接于離銀耳純白菌絲I 2厘米部位，二者交合后，香灰菌絲呈黑色且布滿試管內(nèi)全部培養(yǎng)基，而銀耳純白菌絲的接種塊上出現(xiàn)黃紅色水珠。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種銀耳菌種繁育方法，其特征在于環(huán)節(jié)(3)中銀耳純白菌和香灰菌交合比例為千分之一。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種銀耳菌種繁育方法，其特征在于兩種菌絲交合培養(yǎng)成母種也可以在木屑培養(yǎng)基上進行，先把銀耳純白菌絲連同培養(yǎng)基少許從試管中挑取出來，放入木屑培養(yǎng)基上，然后提取少許的香灰菌絲，放入銀耳純白菌絲旁邊或上面，在23 25°C下培養(yǎng)，二者交合時接種塊的白毛團上出現(xiàn)黃紅色水珠。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種銀耳菌種繁育方法，屬于食用菌栽培技術(shù)領(lǐng)域，本方法包括銀耳純白菌絲的提取、香灰菌絲的提取以及兩種菌絲交合培養(yǎng)成母種三個步驟，其中在兩種菌絲的提取過程中結(jié)合了菌絲體特征的判定，為選取優(yōu)良菌絲體的來源劃分了統(tǒng)一標準，本發(fā)明由于銀耳純白菌絲與香灰菌絲交合比例適當，有早期發(fā)育快的特點，香灰菌絲前期長勢好，能趕在氨味產(chǎn)生前就強壯發(fā)育，保證了菌種的高產(chǎn)、高抵抗力以及菌種的穩(wěn)定性；且結(jié)合菌絲體特征的判斷來確定提取的銀耳純白菌絲和香灰菌絲的優(yōu)良性狀，保證了銀耳菌種制備的高重復(fù)性。
文檔編號A01G1/04GK102884945SQ20121042000
公開日2013年1月23日 申請日期2012年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月29日
發(fā)明者彭彪, 陳太權(quán), 林永安, 蓋新敏, 林朝暉 申請人:寧德師范學院