本發(fā)明涉及水產(chǎn)種質(zhì)資源鑒定、保護(hù)及應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種基于鹽度偏好的熊本牡蠣(crassostrea?sikamea)活體鑒定方法。

背景技術(shù)：

1、牡蠣，俗稱蠣黃、生蠔等，廣泛分布于除寒帶外所有海域。我國廣東、廣西、福建、浙江、山東、遼寧等為牡蠣主要養(yǎng)殖省份，年產(chǎn)量600多萬噸，占海水養(yǎng)殖產(chǎn)量的1/4左右，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。浙江、福建、廣東和廣西等沿海熊本牡蠣資源非常豐富，浙江象山港是熊本牡蠣天然分布核心區(qū)，浙江沿海成為世界上熊本牡蠣養(yǎng)殖規(guī)模最大的區(qū)域。因其口感好，殼型優(yōu)美，熊本牡蠣逐漸成為世界上高端牡蠣品種。

2、由于牡蠣殼型受環(huán)境影響較大，且個(gè)體差異顯著，因此基于殼型無法對牡蠣進(jìn)行有效鑒定。在我國南方多個(gè)海區(qū)，熊本牡蠣和福建牡蠣存在同域分布的現(xiàn)象，另外在人工繁殖條件下熊本牡蠣可以和福建牡蠣單向受精產(chǎn)生后代。這不利于熊本牡蠣進(jìn)行良種選育和提升熊本牡蠣的品牌附加價(jià)值。而且近年來，牡蠣養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，牡蠣苗種的異地遷移養(yǎng)殖愈來愈頻繁，對各海區(qū)野生牡蠣資源造成沖擊。

3、對物種進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定是開展生物學(xué)研究和種質(zhì)資源保護(hù)的基礎(chǔ)。物種鑒定的方法涉及多個(gè)層面，主要包括以下方法：1)形態(tài)學(xué)方法：觀察生物的外部形態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)或細(xì)胞形態(tài)，這可能涉及測量生物身體部分的長度、形狀、顏色、紋理等特征；2)分子方法：包括dna條形碼和分子測序，其中，dna條形碼利用特定基因片段的序列來識(shí)別物種，分子測序則通過對特定基因組或基因片段進(jìn)行測序來鑒定；3)生態(tài)學(xué)特征方法：研究物種的生態(tài)習(xí)性、棲息地偏好、地理分布等特征，這種方法可以通過觀察生物在自然環(huán)境中的行為和環(huán)境選擇來識(shí)別；4)化學(xué)分析方法：使用化學(xué)方法來分析生物體內(nèi)的化學(xué)物質(zhì)，如代謝產(chǎn)物、激素或特定的生物標(biāo)志物。鑒定物種通常需要多種方法的結(jié)合使用，特別是對于復(fù)雜或相似物種。例如，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和分子方法可以提高鑒定的準(zhǔn)確性和可靠性。

4、目前，應(yīng)用于牡蠣物種鑒定的分子方法包括：pcr-rflp鑒定、線粒體coi基因測序、多重特異性pcr等。但是這些方法需要dna提取和pcr鑒定，需要一定的實(shí)驗(yàn)條件，且鑒定后牡蠣容易損傷或死亡，不利于后續(xù)牡蠣生理實(shí)驗(yàn)及繁殖。此外，傳統(tǒng)方法依靠形態(tài)學(xué)和解剖學(xué)手段，由于牡蠣具有廣棲性和表型高可塑性等特點(diǎn)，且受鑒別人員識(shí)別經(jīng)驗(yàn)等的影響，這種主觀的方法存在誤判的可能，因此無法對牡蠣進(jìn)行有效的鑒定。因此建立一種熊本牡蠣的活體鑒定方法，應(yīng)用于熊本牡蠣繁育工作中非常重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種簡單高效的基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法，該鑒定方法基于熊本牡蠣和福建牡蠣對低鹽度的耐受能力不同這一特性進(jìn)行鑒定，可以在熊本牡蠣種質(zhì)資源保護(hù)及生產(chǎn)繁育過程的大批量快速鑒定中發(fā)揮重要作用；該鑒定方法的優(yōu)勢是鑒定篩選的熊本牡蠣仍為活體，為純種基礎(chǔ)群體構(gòu)建、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)等用途提供了活體材料，不影響后續(xù)生理實(shí)驗(yàn)和繁殖等。

2、發(fā)明人對熊本牡蠣和福建牡蠣在低鹽條件下的耐受能力進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)鹽度是影響牡蠣生長的重要因子，如果受到鹽度脅迫，牡蠣需要通過消耗大量的能量來維持自身滲透壓平衡，鹽度可直接影響牡蠣的生理代謝進(jìn)而影響牡蠣的存活和生長，而不同品種牡蠣對鹽度的適應(yīng)范圍不同。熊本牡蠣在河口區(qū)潮間帶大量分布，而福建牡蠣在河口低鹽區(qū)幾乎沒有分布。熊本牡蠣和福建牡蠣生活在鹽度過低的水體時(shí)，自身生理調(diào)節(jié)能力減弱，甚至發(fā)生死亡，而熊本牡蠣對于低鹽條件有更好的適應(yīng)能力。因此，本發(fā)明提出一種基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法，該鑒定方法利用熊本牡蠣和福建牡蠣在特定的低鹽條件下的耐受能力的差異性，是一種簡單高效的熊本牡蠣活體鑒定方法。

3、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法，包括以下步驟：

4、(1)從野生熊本牡蠣和野生福建牡蠣共存的海區(qū)采集若干牡蠣，在水體中暫養(yǎng)3天，暫養(yǎng)期間將水體的鹽度從暫養(yǎng)第一天的25逐天下降到暫養(yǎng)第三天的10，期間保持向水體連續(xù)充氣，每天換水量50％并投喂一次300目篩絹過濾的螺旋藻粉；

5、(2)將水體的鹽度保持在10±0.5，保持3周，期間保持向水體連續(xù)充氣，每天換水量50％并投喂一次300目篩絹過濾的螺旋藻粉，并且每天統(tǒng)計(jì)一次死亡個(gè)體數(shù)，并及時(shí)取出死亡個(gè)體，防止水質(zhì)腐敗，因福建牡蠣在低鹽條件下的耐受能力較差，在3周鹽度10±0.5的水體中全部死亡，而熊本牡蠣在低鹽條件下的耐受能力強(qiáng)，在3周鹽度10±0.5的水體中的存活率在80％以上；

6、(3)將步驟(2)結(jié)束后得到的存活的牡蠣使用正常海水養(yǎng)殖，用于熊本牡蠣良種選育工作。

7、作為優(yōu)選，步驟(1)中，暫養(yǎng)第二天的水體的鹽度為18。

8、作為優(yōu)選，步驟(2)中，個(gè)體死亡特征的判斷方法為：若個(gè)體雙殼張開無法自行閉合，且用鑷子刺激時(shí)無反應(yīng)，則判斷個(gè)體為死亡個(gè)體。

9、作為優(yōu)選，步驟(3)中，將存活的牡蠣移至中試基地使用正常海水養(yǎng)殖。

10、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明基于熊本牡蠣和福建牡蠣對低鹽度的耐受能力不同這一特性，利用熊本牡蠣更能耐受低鹽度的優(yōu)點(diǎn)，建立了一種成本低、簡單高效的熊本牡蠣活體鑒定方法，可以在熊本牡蠣種質(zhì)資源保護(hù)及生產(chǎn)繁育過程的大批量快速鑒定中發(fā)揮重要作用。與傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法相比，本發(fā)明鑒定方法的準(zhǔn)確性更高，不受鑒別人員識(shí)別經(jīng)驗(yàn)等的影響；與常規(guī)的dna分子鑒定方法相比，本發(fā)明鑒定方法的優(yōu)勢是鑒定篩選的熊本牡蠣仍為活體，為純種基礎(chǔ)群體構(gòu)建、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)等用途提供了活體材料，不影響后續(xù)生理實(shí)驗(yàn)和繁殖等。

技術(shù)特征：

1.一種基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中，暫養(yǎng)第二天的水體的鹽度為18。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，個(gè)體死亡特征的判斷方法為：若個(gè)體雙殼張開無法自行閉合，且用鑷子刺激時(shí)無反應(yīng)，則判斷個(gè)體為死亡個(gè)體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中，將存活的牡蠣移至中試基地使用正常海水養(yǎng)殖。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法，包括步驟：從野生熊本牡蠣和野生福建牡蠣共存的海區(qū)采集若干牡蠣，在水體中暫養(yǎng)3天，暫養(yǎng)期間將水體的鹽度從25逐天下降到10，期間保持向水體連續(xù)充氣，每天換水量50％并投喂一次螺旋藻粉；將水體的鹽度保持在10±0.5，保持3周，期間保持向水體連續(xù)充氣，每天換水量50％并投喂一次螺旋藻粉，每天統(tǒng)計(jì)一次死亡個(gè)體數(shù)，并及時(shí)取出死亡個(gè)體；將得到的存活的牡蠣使用正常海水養(yǎng)殖，用于熊本牡蠣良種選育工作。本發(fā)明基于鹽度偏好的熊本牡蠣活體鑒定方法簡單高效，鑒定篩選的熊本牡蠣仍為活體，為純種基礎(chǔ)群體構(gòu)建、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)等用途提供了活體材料，不影響后續(xù)生理實(shí)驗(yàn)和繁殖等。

技術(shù)研發(fā)人員：孔祥杰,劉圣,薛清剛,林志華
受保護(hù)的技術(shù)使用者：浙江萬里學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15